用子房整体透明法和微分干涉差显微镜研究水稻的胚胎发育

水稻的胚囊处于胚珠组织的包围之中,外面还有子房壁,以往观察子房都是用切片的方法.切片制作的过程相当繁杂,并且需要掌握熟练的染色技术。根据连续切片来建立立体概念也需要经验。为了寻找观察胚囊结构的简便方法,人们曾提出过胚珠水解压片法、整体解剖法、酶分离法等,但也需要精细的手工操作,并且不能保证每个子房或胚珠都可获得其中的胚囊。整体透明是个比较好的方法,Herr采用胚珠整体透明法在相差和干涉显微镜下观察一些植物的大孢子母细胞、大孢子和早期的胚囊;

整体透明技术在植物生物学中的应用实例及其剖析

通过采用不同的透明剂和透明方法,对番茄(Lycopercicon esculentum)侧根原基、加拿大一枝黄花(Solidago canadensis)与一枝黄花(S.decurens)的亲和性识别反应和苏门白酒草(Conyza sumatrensis)的胚珠发育过程进行了观察,提供了整体透明技术在植物生物学中的应用实例,简要回顾了该技术在植物生殖生物学中的应用和发展状况,分析了该技术在植物生物学应用中的优势和不足,探讨了该技术应用中一些具体的技术环节,如透明剂的选择和使用以及与特殊用途显微镜的配合使用等方面的问题,并对该技术的应用前景进行了展望。

一种新整体透明技术的研究

[目的]研究一种新整体透明与制片技术。[方法]将酒精溶液保存的千金藤幼嫩种子和高粱新鲜的雌蕊与珠心分离出来后,用84消毒液溶液对其进行浸泡、透明,然后按照3种制片方法进行制片处理和封片。[结果]在普通显微镜下不仅能观察到千金藤幼嫩种子中不同发育时期的球形胚和心形胚,还能观察到高粱雌蕊的特征、珠心表面的珠心突、胚囊和承珠盘;在荧光显微镜下可观察到高粱珠心内的胚囊和承珠盘的荧光图像。[结论]使用84消毒液作为整体透明技术的透明剂,不仅能观察保存后颜色变深或新鲜的植物材料,还能简化制片过程、缩短制片时间。

多胚亚麻的胚珠整体透明与解剖观察

利用改进的整体透明技术,以观察多胚性的亚麻受精后的胚珠,同时对整体透明方法进行了讨论。方法:利用60°C 1M氢氧化钠溶液处理植物材料,然后利用10%次氯酸钠溶液透明,于显微镜下进行解剖观察。结果:在显微镜下,能观察到亚麻受精后胚珠内的幼胚,通过解剖还能清楚地观察到胚珠内的双胚的排列方式;并确定供试材料的双胚的发生率为8%。讨论:与传统的整体透明和切片方法相比,本改进的整体透明方法省时省力,并且能够完成整体透明和解剖的3D数据采集,适用于多胚亚麻幼胚的观察。缺点是用DAPI染色DNA效果不好。

整体透明技术观察悬铃叶苎麻胚胎发育的方法研究

本文以悬铃叶苎麻雌花为试验材料,通过整体透明技术观察其生殖过程中胚胎的发育。比较不同的固定液和透明液组合对透明效果的影响,结果表明,卡诺1固定液配合冬青油透明较适合悬铃叶苎麻雌花。

利用改进的整体染色与透明技术观察垂柳的幼胚

[目的]利用改进的整体染色与透明技术,对垂柳受精后的胚珠进行了整体染色与透明,以观察胚珠内的幼胚形态。[方法]使用稀释的爱氏苏木精染液对垂柳胚珠进行适时染色,然后用生理盐水(或水)冲洗,使用无水乙醇和油镜油的混合液对其进行脱水,用油镜油进行透明、制片。同时,还对整体染色与透明技术的方法进行了讨论。[结果]在普通(明视野)显微镜下,不仅能够观察到垂柳受精后胚珠的层次结构,还能清楚地观察到胚珠内的幼胚形态。垂柳的鱼雷形幼胚具有2枚子叶,偶尔见到具有3枚子叶的鱼雷形幼胚。[结论]与爱氏苏木精染色-冬青油透明技术相比,使用油镜油作为透明剂,制片方法简单,制片时间短,并且具有比较好的观察效果。

根尖整体透明技术改良

整体透明观察技术是植物形态发育研究的基础手段之一,是无需制作切片直接观察植物体内部形态结构的有效方法。该技术采用高折射率介质降低光在样品中的散射,提高光通量,增加视野深度,从而实现组织样品透明观察。然而透明剂能改变透明液的渗透势和pH值,从而对细胞形态保持产生负面影响。目前,针对植物叶片和胚珠已建立了相对成熟的整体透明观察体系,但根尖由于细胞壁较薄,现有的整体透明方法常导致细胞形态改变,不确定性增加(如根尖整体形态改变和细胞发生严重的质壁分离)。该研究以拟南芥(Arabidopsis thaliana)幼苗为实验材料,通过检测根尖形态、细胞质壁分离情况和细胞清晰度,对常用的透明液组分、pH值和透明时间进行优化,旨在建立一种适用于根尖等较脆弱组织材料的整体透明方法。

蚕卵整体染色透明技术

通过透明剂的筛选与整体染色透明程序的试验，首次对昆虫材料蚕卵的整体染色透明技术进行了研究。结果表明：利用该技术能更加直观、清晰地观察活化蚕卵胚子各发育阶段的形态特征，效果超过传统的蚕卵胚子解剖法，可在家蚕良种繁育的教学和生产实践中推广应用。

亚麻子房整体染色透明、切片技术的优化

本文通过整体染色透明技术与石蜡切片技术相结合的方法，结合实验室操作，对亚麻子房石蜡切片方法进行总结，旨在解决因缺少观察设备而无法进行观测和组织观察后样品无法长期保存的缺点，为科研工作者提供方法支持，减少摸索时间。

苎麻胚珠的酶解法提取及其整体染色透明技术

本文以悬铃叶苎麻雌花为试验材料,研究通过酶解方法分离出胚珠并对其进行整体染色透明的技术,目的在于提高整体透明技术在苎麻胚胎发育观察中的效果。结果表明:3%纤维素酶与1%果胶酶混合酶液提取胚珠的效果最好,采用苏木精染色后冬青油透明的方法观察效果较好。

应用胚珠切割及子房透明技术观察无融合生殖甜菜M14胚囊发育

介绍了一种快速简便观察分析无融合生殖甜菜胚囊发育过程的制片法。通过剥离胚珠,并对胚珠珠孔端进行再次切割和分离,经过固定和脱水,用冬青油整体透明及丁香油封片,在OLYMPUS-BX51型荧光显微镜下通过荧光技术观察发育中的胚囊产生自发荧光,可分辨出胚囊的内部结构。用FPA和4%戊二醛两种固定液效果不同,后者效果更佳。

应用子房透明术观察无融合生殖甜菜胚囊发育

介绍了一种快速简便观察分析无融合生殖甜菜胚囊发育过程的方法。甜菜胚珠经过固定和脱水,用冬青油整体透明及丁香油封片,在OLYMPUS-BX51型荧光显微镜下通过荧光显微技术观察发育中的胚囊产生自发荧光,可分辨出胚囊内部结构。用FPA和4%戊二醛两种固定液固定效果不同,后者效果更佳。

管花肉苁蓉与柽柳试管苗离体接种的研究

用去果皮的种子对柽柳长根实生苗和试管苗进行接种,建立管花肉苁蓉种子与柽柳的离体接种体系,用体视显微镜观察接种情况并用整体透明方法观察侵染情况。结果表明,寄主柽柳的试管苗与管花肉苁蓉种子的共培养能够建立管花肉苁蓉-柽柳接种复合体,这将为研究寄主-寄生物相互关系提供有效的实验体系。

用共聚焦扫描显微镜检术观察水稻胚囊发育

介绍了一种快速简便观察分析水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）胚囊发育程序的方法。水稻子房经固定和脱水，用冬青油整体透明及丁香油封片，在共聚焦扫描显微镜检术下，发育中的胚囊产生自发荧光，可分辨出胚囊内部结构。ＦＡＡ和４％戊二醛两种固定液效果不同，后者效果较佳。

草莓胚胎发育研究

以沈阳农业大学培育的“明旭”草莓品种为材料,采用常规石蜡切片法,结合整体透明与显微解剖技术,对草莓胚和胚乳的发育过程进行观察,其结果如下:草莓离生单雌蕊每个子房内具一枚横生胚珠,单珠被,厚珠心。成熟胚囊为蓼型。卵细胞较大,呈洋梨形。助细胞略小,核大质浓。极核有时融合成次生核。反足细胞不明显。胚囊窄而长。合点端有明显的承珠盘结构。个别胚珠中有双胚囊现象。胚的发育过程与大多数双子叶植物基本一致。从受精卵发育到二细胞原胚过程中,合子第一次分裂形成顶细胞和基细胞。继而顶细胞斜向纵裂,基细胞横裂。由基细胞分裂来的近合点端的一个细胞再发生纵裂,和从顶细胞分裂来的细胞共同参与胚体的形成,进而产生多细胞球形原胚,心形胚,鱼雷形胚,成熟胚。当成熟胚形成时,胚柄将逐渐消失。草莓胚发育属紫菀型,胚乳发育为核型。

铁皮石斛种子共生萌发形态学观察

本研究以铁皮石斛种子-胶膜菌属菌根真菌共生体为实验材料,利用4种真菌特异性染剂,包括苯胺蓝(aniline blue)、氯唑黑E(chlorazol black E)、台盼蓝(trypan blue)和麦胚凝集素-异硫氰酸荧光素(wheat-germ agglutinin-fluorescein isothiocyante,WGA-FITC)染剂,整体透明试剂(Hoyer′s溶液)和多种显微观察仪器对共生萌发种子和原球茎进行形态学观察.研究结果显示4种真菌特异性染剂能有效检测菌根真菌在共生萌发种子和原球茎中的定殖,共生原球茎经过整体透明试剂处理后,最大程度展示了菌根真菌在皮层细胞内的结构和真实定殖情况.本研究为兰科植物种子共生萌发检测提供了多种简单有效的形态学方法.

烟草早期胚胎细胞观察方法研究

【目的】分析整体透明法和酶解分离法在烟草早期胚胎观察中的应用效果,为烟草细胞发育研究提供参考。【方法】分别采用整体透明法和酶解分离法对烟草早期胚胎细胞进行连续观察,分析两种方法的优缺点。【结果】采用整体透明法观察烟草胚胎,均可清晰观察到烟草的2-细胞原胚、4-细胞原胚至未分化的球形胚,而观察的早期球形胚基部胚柄不够清晰,且后期发育的胚胎不易观察。酶解分离法能够观察到烟草整个发育阶段的胚胎,即烟草2-细胞原胚、开始分化的球形胚、心形胚;但经二次酶解分离,从2-细胞原胚到16-细胞早期球形胚时期的胚胎细胞均存在质壁分离现象,而晚期胚胎未出现此现象。整体透明法具有操作简便、所需材料较少、具有原位地形学观察等优点,能够保持胚胎组织的原位性。酶解分离法耗时较短,但其胚胎细胞缺乏原位性,部分存在质壁分离现象,可获得独立的不包含母体组织的胚胎细胞。【结论】在烟草胚胎发育时期,可根据对不同时期胚胎研究的需要,合理选择适宜的观察方法;或结合整体透明观察法与酶解分离法对早期胚胎进行观察,提高烟草胚胎发生的连续观察效果。

利用激光扫描共聚焦显微术对同源四倍体水稻胚囊形成与发育的进一步观察

应用改进的整体染色透明激光扫描共聚焦显微术(WCLSM),对同源四倍体水稻PDER-2B-4x胚囊的形成与发育过程进行观察。发现其胚囊的形成发育过程与二倍体的一致,可以清楚地划分为8个发育时期,即孢原细胞形成期、大孢子母细胞形成期、大孢子母细胞减数分裂期、功能大孢子形成期、单核胚囊形成期、胚囊有丝分裂期、八核胚囊发育期和成熟胚囊期。除正常发育的过程外,大孢子发育的各个过程均出现一些异常现象,包括:细胞退化、核位置异常、核数目异常和细胞分化异常等。这些异常可能最终导致多种结构异常成熟胚囊的形成。

A New Technique for Whole Clearing

[Objective] The research aimed to study a new whole clearing and preparation technology.[Method] After young seeds of Stephania sp.preserved in the alcohol solution,as well as the fresh pistil and nucellus of Sorghum bicolor were separated,they were soaked and cleared in the solution of 84 disinfectant.And the plant materials could be mounted by using three methods.[Result] The globular embryos and heart-shaped embryos at different stages of Stephania sp.as well as the pistil,nucellus,embryo sac,hypostase o...