不同地区铜绿假单胞菌第一类整合子和整合子相关基因盒的分布

目的对石家庄、昆明两地分离的铜绿假单胞菌临床菌株进行第一类整合子的分布及整合子相关基因盒携带率的比较分析,探讨第一类整合子在两地菌株分布的差别。方法采用PCR方法筛选检测64株石家庄、昆明两地临床分离的铜绿假单胞菌第一类整合子和及其所携带的整合子相关基因盒。结果64株铜绿假单胞菌临床菌中共有43株为第一类整合子阳性菌(阳性率67.2%);其中石家庄菌株和昆明菌株阳性率分别为71.4%和64.3%,两地铜绿假单胞菌第一类整合子阳性率无显著性差异。第一类整合子阳性铜绿假单胞菌中,石家庄菌株和昆明菌株携带一类整合子相关基因盒的阳性率分别为80.0%和38.%,两地第一类整合子阳性菌中整合子相关基因盒的携带率具有显著性差异(P<0.01);两地菌株携带的基因盒大小不同。结论第一类整合子在铜绿假单胞菌临床菌株中广泛分布,环境的选择压力影响细菌整合子相关基因盒的分布。

整合子及相关基因盒在临床分离铜绿假单胞菌中的分布

目的检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子及Ⅰ类整合子相关基因盒在铜绿假单胞菌临床分离株中的分布,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法用纸片法对62株临床分离铜绿假单胞菌进行药敏试验;应用多重PCR法检测62株铜绿假单胞菌Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子;对Ⅰ类整合子阳性菌进行整合子相关基因盒检测。结果62株菌中有40株(64.5%)含有Ⅰ类整合子,1株(1.6%)含有Ⅱ类整合子;没有检测到Ⅲ类整合子阳性菌。在Ⅰ类整合子阳性菌中,有26株携带Ⅰ类整合子相关基因盒(65.0%);分离自同一科室的部分菌株携带大小相同的基因盒;Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在铜绿假单胞菌临床菌株中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。

食品动物源大肠杆菌多重耐药菌株整合子-基因盒的分子特征

为研究分离自四川省食品动物源大肠杆菌多重耐药菌株整合子-基因盒分布及分子特征,采用多重PCR方法检测327株多重耐药菌株中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合酶基因,用PCR-测序法对整合子阳性菌进行基因盒序列分析。结果表明327株Escherichia coli中294株(89.91%)检出有Ⅰ型整合子,未检出Ⅱ、Ⅲ型整合子。在随机选取的81株Ⅰ型整合子阳性菌中,67株(82.72%)能扩增出800～3 000bp的耐药基因盒插入区。基因盒以编码对甲氧磺胺嘧啶类和氨基糖苷类药物耐药的dfrA、dhfrI和aadA基因家族为主,尤其以dfrA17+aadA5为优势基因盒。分别在2株菌中检出aacA4+catB3+dfrA1和aadA22基因盒。aadA22是四川分离菌株中首次报道,介导氨基糖苷类耐药。结果表明Ⅰ型整合子普遍存在于大肠杆菌临床菌株中。尽管菌株携带的整合子-基因盒与其多重耐药谱间不存在对应关系,但不同来源菌株中检测出相同的耐药基因盒片段,说明了通过整合机制耐药基因可在不同菌株间水平传递。

产ESBLs大肠埃希菌整合子及其相关基因盒的研究

目的检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌中整合子的整合酶及插入的相关基因盒情况,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法采用K-B琼脂扩散法对45株临床分离的产ESBLs大肠埃希菌进行药敏试验;应用PCR法检测45株产ESBLs大肠埃希菌Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子;对Ⅰ类整合子阳性菌进行整合子相关基因盒检测。结果45株菌中有27株(60.0%)含有Ⅰ类整合子,没有检测到Ⅱ类和Ⅲ类整合子阳性菌。在Ⅰ类整合子阳性菌中,有23株携带Ⅰ类整合子相关基因盒(85.2%),5种不同的基因盒图谱,片段大小在600～2322bp,分离自同一科室的部分菌株携带大小相同的基因盒;Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在产ESBLs大肠埃希菌株中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。

整合子-基因盒系统与细菌耐药性

细菌耐药性的获得和传播主要与整合子-基因盒系统有关。它在细菌中捕获外来耐药基因水平传递,从而在整合子中形成多种耐药基因的组合和排列,是细菌耐药性传播的机制之一。一个整合子可捕获一个或多个基因盒,组成多重耐药整合子,介导细菌的耐药性。携带重组基因盒的整合子能插入到转座子或接合性质粒中,在细菌中传播耐药性并通过位点特异的基因重组使耐药基因发生播散,它对细菌间耐药基因的扩散和多重耐药性的产生起到重要作用。

大肠埃希菌中Ⅰ类整合子耐药基因的分析

目的对临床分离大肠埃希菌株携带的Ι类整合子及相关耐药基因进行筛选和分析,探讨Ι类整合子在大肠埃希菌耐药中的作用。方法对43株大肠埃希菌临床分离株做药敏试验;采用PCR扩增、DNA测序、DNA序列比对的方法对其携带的Ι类整合子相关耐药基因进行分析。结果43株大肠埃希菌分离株对10种抗菌药物的耐药率依次为亚胺培南4.7%、阿米卡星18.6%、头孢他啶、27.9%、头孢吡肟37.2%、头孢呋辛55.8%、复方磺胺甲噁唑58.1%、妥布霉素74.4%、庆大霉素79.1%、头孢噻肟81.4%和哌拉西林83.7%。在43株大肠埃希菌分离株中有25株含有Ι类整合子,其中18株携带整合子相关耐药基因,如介导对磺胺类和氨基糖苷类药物的耐药基因等;某些菌株携带的整合子相关耐药基因相同。结论Ι类整合子在大肠埃希菌中广泛存在,整合子相关耐药基因在该菌耐药性的形成和播散中发挥作用。

胶东地区健康禽源大肠埃希菌耐药性与整合子-基因盒携带分析

为了解健康禽源大肠埃希菌的耐药性及其Ⅰ型和Ⅱ型整合子携带情况和流行特征,探讨整合子与大肠埃希菌耐药表型的相关性,分析整合子在细菌多重耐药中的作用,采用MIC法和PCR方法分别检测249株健康禽源大肠埃希菌的耐药性和Ⅰ型、Ⅱ型整合酶基因及可变区。结果显示,12种药物耐药率均超过56.63%,多重耐药率高达98.39%;245株多重耐药菌株均含有Ⅰ型整合子,但含有Ⅱ型整合子的大肠埃希菌仅113株,Ⅰ型和Ⅱ型整合子的检出率分别为100%和46.12%;63.75%的Ⅰ型整合子阳性菌株扩增出5类大小不同的基因盒,大小为1 000bp^23 00bp,18.6%的Ⅱ型整合子阳性菌株扩增出2 200bp的基因盒;58.82%的菌株携带2种或2种以上的基因盒,基因盒以编码甲氧苄啶类和氨基糖苷类药物耐药性的dfrA和aadA基因家族为主,其中aadA22为优势基因盒,其次是dfrA17+aadA5基因盒。说明胶东地区禽源大肠埃希菌多重耐药现象严重;Ⅰ型整合子比Ⅱ型整合子更流行;Ⅰ型和Ⅱ型整合子参与多重耐药,但细菌携带的整合子-基因盒与其耐药表型无对应关系。

河北部分腹泻仔猪源大肠杆菌整合子-基因盒的分子流行病学调查

为调查河北地区腹泻仔猪源大肠杆菌中Ⅰ型整合子-基因盒的流行分布情况及对细菌耐药性的影响,试验在测定仔猪源大肠杆菌对常用21种抗菌类药物的耐药谱的基础上,利用PCR技术对分离株的整合子-基因盒系统进行扩增检测,并对携带的耐药基因进行序列分析。结果表明：97.5%的分离菌株检测到Ⅰ型整合子,39株Ⅰ型整合子阳性菌株中24株扩增出四种类型的耐药基因盒,以编码氨基糖苷类和甲氧苄啶耐药基因的aad A和dfr A为主,基因盒排列dfr A17＋aad A5（30.8%）及dfr A1＋aad A1（25.6%）较为流行。说明河北地区仔猪源大肠杆菌多重耐药现象非常严重,Ⅰ型整合子-基因盒普遍流行,菌株的多重耐药与Ⅰ型整合子呈高度正相关。

苏州地区鲍曼不动杆菌中Ⅰ类和Ⅱ类整合子的分布及其基因盒结构分析

目的分析Ⅰ类和Ⅱ类整合子在苏州地区临床分离的鲍曼不动杆菌中分布情况及其基因盒结构。方法用PCR法检测69株鲍曼不动杆菌中Ⅰ类和Ⅱ类整合酶基因及整合子携带率,基因测序技术对其可变区进行分析;重复序列引物聚合酶链反应(REP-PCR)对Ⅰ类整合子阳性菌株进行基因分型,分析其同源性。结果 69株鲍曼不动杆菌中Ⅰ类整合子阳性29株,占42.0%,未检测到Ⅱ类整合子;基因盒结构分析共检出6种基因盒,分别为aacA4,aacC1,catB8,aadA1,orfX和orfX',以5'CS-aacA4-catB8-aadA1-3'CS基因盒排列为主;REP-PCR法将29株Ⅰ类整合子阳性菌株分成I～V型,其中Ⅲ型为主要流行型别。结论苏州地区鲍曼不动杆菌中的整合子携带率较高,主要以Ⅰ类Ⅲ型为主。

细菌多重耐药性的转移与基因盒-整合子系统

细菌的多重耐药已成为临床治疗的难题 ,近年来耐药基因转移的新机制与基因盒 整合子系统密切相关。本文就该系统的发展历史、整合子的结构与分类、基因盒的种类与表达、基因盒

腹泻犬源大肠埃希菌耐药性以及整合子–基因盒检测研究

【目的】了解腹泻犬源大肠埃希菌Escherichia coli的耐药性以及整合子携带情况。【方法】采用K-B纸片扩散法对30株分离自腹泻犬的大肠埃希菌进行19种抗菌药物的敏感性试验;PCR检测菌株中是否携带Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合酶基因,对携带有整合酶基因的阳性菌株进一步检测sul1、qac EΔ1基因以及可变区基因盒携带情况。【结果】30株分离株对19种抗菌药物表现出不同程度的耐药性,共产生18种耐药谱,对阿莫西林、氨苄西林、四环素和多西环素的耐药性较高,耐药率分别为90.00%、83.33%、66.67%和63.33%;对其余药物耐药性较低,耐药率低于14.00%;11株分离株含有Ⅰ型整合酶基因且均携带sul1和qacEΔ1基因,未检出Ⅱ型和Ⅲ型整合酶基因;Ⅰ型整合子阳性菌株中,有2株扩增出1 879 bp的耐药基因盒:dfrA12+orfF+aadA2。【结论】本次检测的腹泻犬源大肠埃希菌对抗菌药物呈不同水平的耐药性;基因盒介导的耐药性与菌株的耐药表型存在部分相关性,大肠埃希菌的耐药性与Ⅰ型整合子存在一定关系。

多重耐药铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子-基因盒的检测与分析

目的检测多重耐药铜绿假单胞菌(multi-drug resistant pseudomonas aeruginosa,MDRPA)携带Ⅰ类整合子-基因盒,分析其与耐药表型的相关性。方法使用K-B纸片扩散法(简称K-B法)进行药敏试验,确定菌株耐药表型;用PCR扩增Ⅰ类整合酶基因及可变区的基因盒,并进行测序及序列分析。结果 23株MDRPA中19株检出Ⅰ类整合酶基因,其中15株携带基因盒,基因盒结构共有6种。其中6株携带aad A4a、3株携带aac A4-cat B8-aad A1、1株携带aac(6’)lai-orfv-aad A1-qac EΔ1-sul、3株携带blaIMP-6-qnr-aac A4-blaOXA-1-aad A1-qac E△1-sul、1株携带permease of ABC transporter gene、1株携带bacteriophage protein gene。在15株携带Ⅰ类整合酶基因盒的可变区中,检出8种耐药基因和2种新型基因盒。结论 MDRPA携带的Ⅰ类整合子-基因盒结构具有多样性,与菌株的多重耐药表型密切相关;检出两种新型基因盒,分别是ABC转运系统蛋白和噬菌体蛋白的编码基因。这两种新型基因盒的功能尚不清楚,特别是它们与菌株耐药性的关系,有待进一步研究。

鱼源嗜水气单胞菌多重耐药菌株整合子的分子特征

为研究嗜水气单胞菌多重耐药菌株整合子基因盒分布及分子特征,首先采用K-B纸片扩散法检测28株鱼源嗜水气单胞菌对18种抗生素的耐药性,然后利用PCR方法检测菌株中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合酶基因并对其携带基因盒序列进行分析。结果表明,分离到的鱼源嗜水气单胞菌呈多重耐药性,对-内酰胺类、大环内酯类、氯霉素类和四环素类药物的耐药率超过60%,而对氟喹诺酮类药物较敏感,且菌株间耐药谱差异较大。53.57%的菌株Ⅰ类整合子阳性,21.43%的菌株Ⅱ类整合子阳性,整合子阳性菌株对多种药物的耐药率均高于阴性株,且Ⅰ类整合子阳性株多重耐药率明显高于Ⅱ类整合子阳性株,表明整合子系统在嗜水气单胞菌多重耐药性中发挥重要作用。Ⅰ类整合子基因盒以aadA、dfrA、catB家族为主,分别介导氨基糖苷类、甲氧磺胺嘧啶类和氯霉素类药物耐药;基因盒的排列以aadA2+dfrA12类型为主。此外,Ⅰ类整合子阳性的嗜水气单胞菌多重耐药性在不同个体间也存在较大差异,提示多重耐药菌株的耐药表型与基因盒的类型无直接相关性。

圈养虎源大肠杆菌耐药性和整合子特性分析

对东北虎林园分离的具有耐药性的大肠杆菌进行了整合子-基因盒的研究,结果表明:61株分离菌中整合酶Ⅰ检出率为52.46%,整合酶Ⅱ和整合酶Ⅲ均没检出。分离株对阿莫西林/克拉维酸、氨曲南和安普霉素较敏感;对氨苄青霉素、四环素和复方新诺明高度耐药。序列分析表明,含有3种基因盒,分别是dfr A15、dfr A12和aad A2。

产金属酶铜绿假单胞菌携带Ⅰ类整合子的研究

目的研究产金属酶铜绿假单胞菌携带Ⅰ类整合子及其基因盒的情况。方法收集铜绿假单胞菌68临床株,进行金属酶IMP-1、VIM基因的PCR检测,选取阳性株再作第Ⅰ类整合酶基因的PCR检测,然后选取整合酶基因阳性株进行Ⅰ类整合子相关基因盒的PCR检测。结果PCR检测出68株铜绿假单胞菌中的1株同时含有IMP-1基因和Ⅰ类整合子基因盒;55株含有VIM基因,其中26株含有Ⅰ类整合酶基因,在这26株中只有18株含有Ⅰ类整合子基因盒,根据电泳条带可分为5种类别。结论首次在中国西南地区发现产IMP-1并同时带有Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌。Ⅰ类整合子在产金属酶铜绿假单胞菌中分布广泛,基因盒携带率为69.2%,对细菌的耐药性传播具有重要意义。

大熊猫粪源大肠杆菌耐药性及整合子研究

为了解大熊猫粪源大肠杆菌的耐药性、整合子-基因盒的分布特性,分析整合子对细菌耐药性的影响,采用Kirby-Bauer（K-B）纸片法进行了50株大肠杆菌对13种抗菌药物的药物敏感性试验;PCR-测序法检测了1、2、3型整合酶基因,进一步对阳性菌株可变区的基因盒序列鉴定分析。结果显示,菌株对13种抗菌药物表现出不同的耐药性,其中对氨苄西林、头孢唑林、四环素和复方新诺明表现出较高耐药性（耐药率为30%-68%）,对其余药物耐药性较低（耐药率低于14%）;50株菌中有15株（30%）含有1型整合子,未发现2型和3型整合子;15株1型整合子阳性菌中,有6株（40%）扩增出1200-2000 bp的基因盒,主要介导氨基糖苷类和磺胺-甲氧苄啶耐药的aad A和dfr A基因家族。以dfr A27＋aad A2为主（检出率83.33%）,1株为aac A4＋aad A1＋cat B2。以上说明本次检测的大熊猫粪源大肠杆菌对多种抗菌药物呈低水平耐药;1型整合子在大肠杆菌中广泛分布,整合子-基因盒是造成整合子阳性菌株耐氨基糖苷类、磺胺-甲氧苄啶类、氯霉素的主要原因。

60株鲍曼不动杆菌耐药基因携带情况分析

目的研究临床分离的60株鲍曼不动杆菌耐药谱及Ⅰ型整合子和β-内酰胺酶等基因携带情况。方法用微量肉汤稀释法测定16种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度;PCR检测β-内酰胺酶、Ⅰ型整合子和外排泵基因,对阳性基因进行序列分析。结果60株菌中,多重耐药株53株,占88.3%;6株携带OXA-23基因,均对包括碳青霉烯在内的5类以上抗菌药耐药,并具有高耐药特性;38株携带PER-1基因,对头孢菌素类耐药率显著高于PER-1基因阴性菌株(P<0.01);45株检出Ⅰ型整合子结构基因,多重耐药率明显高于Ⅰ型整合子阴性菌株(P<0.01);Ⅰ型整合子和PER-1基因同时阳性25株,与7株两者同为阴性菌株相比,多重耐药率增高(P<0.01),但耐药程度无显著差别。结论Ⅰ型整合子基因及β-内酰胺酶类基因的作用是导致鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因;OXA-23基因阳性菌株多为泛耐药和高耐药株,有必要采取有效措施控制其传播。

健康畜禽肠道大肠杆菌耐药性及整合子-基因盒检测

采用微量肉汤稀释法检测455株大肠杆菌对24种抗菌药物的敏感性;多重PCR检测菌株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合酶基因;采用PCR-RFLP和PCR-测序法对整合子-基因盒进行序列分析。结果显示,455株菌除对头孢唑啉、头孢曲松、头孢噻呋和阿米卡星耐药率低于40%外,对其余药物表现出高耐药率,99.23%菌株呈多重耐药性;455株菌Ⅰ型整合子阳性率87.69%,Ⅱ型整合子1.98%,未检出Ⅲ型整合子;随机选取的204株整合子阳性菌中174株(85.29%)扩增出了基因盒可变区。基因盒主要以编码氨基糖苷腺苷基转移酶和二氢叶酸还原酶的aadA、dfrA基因为主,耐药基因排列成Ⅰ型整合子8种基因盒,Ⅱ型整合子3种基因盒。Ⅰ型整合子以dfrA1-aadA1(32.76%)基因盒为主,其次是aadA22(24.14%)和dfrA17-aadA5(24.14%)。Ⅱ型整合子以dfrA1-sat2-aadA1(66.67%)为主,Ⅱ型整合子阳性菌含有Ⅰ型整合子-基因盒;菌株含整合子-基因盒越复杂,其多重耐药性越严重。结果表明,本次分离的健康动物肠道大肠杆菌耐药非常严重,整合子-基因盒分布广泛,已成为耐药基因储库,对耐药基因扩散起重要作用。

动物源大肠杆菌整合子携带氨基糖苷类耐药基因盒的研究

收集540株不同动物源大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法检测其对22种药物的耐药性;利用多重PCR方法检测菌株携带3型整合子的情况;采用χ2检验分析1型整合子阳性菌及阴性菌的耐药性;采用PCR-DNA测序法对整合子阳性菌株携带的氨基糖苷类耐药基因盒进行分析。结果显示,540株菌对链霉素等20种药物耐药率超过37%,全部菌株均呈多重耐药;1型整合子检出率为86.48%,未检出2及3型整合子;整合子阳性菌株对头孢唑啉等13种药物耐药率显著高于整合子阴性菌;随机选择的67株1型整合子阳性菌株中,有92.54%菌株携带有编码氨基糖苷核苷转移酶和乙酰转移酶基因(aadA2、aadA5、aadA22、aacA4),共有5种类型基因盒,其中以介导对甲氧苄啶、链霉素和大观霉素耐药的dfrA17+aadA5组合最为常见;在2株菌中分别发现介导对阿米卡星、氯霉素及甲氧嘧啶耐药的aacA4+catB3+dfrA1组合,和介导链霉素、大观霉素耐药的aadA22基因盒,是在四川分离菌中首次发现这2种基因盒。结果表明,1型整合子广泛存在于大肠杆菌临床菌株中,大肠杆菌耐药性与整合子相关,菌株中广泛携带氨基糖苷类及甲氧苄胺嘧啶耐药基因盒。

安徽鸡源大肠杆菌整合子-基因盒分布及同源性分析

参照CLSI推荐的微量肉汤稀释法检测了15种抗菌药物对91株鸡源大肠杆菌的最小抑菌浓度（MIC）,采用PCR方法检测其整合子-基因盒的分布情况,并用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析大肠杆菌的同源性。结果显示,91株大肠杆菌对15种抗菌药物的耐药率为3.3%-98.9%,且全部为四重耐药以上,多重耐药率为100%。91株大肠杆菌全部携带Ⅰ型整合子,其中70株带有编码耐氨基糖苷类和磺胺类药物的基因盒,分别是dfr A1＋tnp A IS26＋aad A1（45/70）,dfr A12＋aad A2（16/70）和dfr A1＋aad A1（9/70）,未检出Ⅱ型整合子。PFGE分型图谱显示,91株大肠杆菌共产生63个谱型,菌株之间的相似系数为30%-100%,31种谱型的同源性高达90%以上。其中41种带型只包含1株菌,其余22种带型包含菌株数为2-4株。结果表明,安徽合肥地区鸡源大肠杆菌对抗菌药物的耐药性较高,Ⅰ型整合子分布广泛,菌株基因分布呈多态性但同源性较高。