整合素亚型α5β1基因抑制乳腺癌增殖和转移的作用

为了探讨整合素亚型α５β１基因在乳腺癌中的作用及了解其临床意义。采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及免疫组织化学（ＡＢＣ）方法，检测３８例乳腺新鲜标本和１０５例乳腺癌石蜡切片中整合素亚型α５β１基因的表达，结合临床资料分析其临床意义。结果显示Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交良性乳腺疾病整合素亚型α５β１基因的缺失率明显低于乳腺癌组；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交中良性病例的α５β１ｍＲＮＡ表达的量明显高于乳腺癌组；免疫组织化学的结果亦显示病理分化较好的Ⅰ级乳腺癌组α５β１基因的表达率（５４．３％）高于分化差的Ⅲ级组（１１．１％，Ｐ＜０．０５）。因此可认为整合素亚型α５β１基因的表达与乳腺疾病的良恶性质有关（Ｐ＜０．０５），Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果，腋淋巴结阴性组α５β１ｍＲＮＡ表达的量明显高于腋淋巴结阳性组，具有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。免疫组织化学检测腋淋巴结（－）、（＋）组和（＋＋）组整合素亚型α５β１基因的阳性率分别为４８．８％，４７．５％，３８．１％（Ｐ＜０．０１）。无远处转移组与有远处转移组整合素亚型α５β１基因的表达率分别为５３．２％与２５．０％（Ｐ＜０．０５）。整合素亚型α５β１基因与乳腺癌的腋淋巴结?

ITGA5慢病毒shRNA表达载体及Bel-7404稳定细胞系的构建

目的构建整合素α5基因(ITGA5)的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体,并建立稳定沉默ITGA5表达的肝癌细胞系Bel-7404。方法设计3条ITGA5基因特异性shRNA靶序列和1条非特异性序列作为阴性对照(NC),分别克隆到GV493质粒载体中,转化感受态细胞后挑取阳性克隆子进行DNA测序鉴定,包装成重组慢病毒,并纯化、测定病毒滴度。将4组慢病毒载体分别感染人肝癌细胞Bel-7404,使用嘌呤霉素筛选后,在荧光显微镜下观察GFP的表达,q PCR和Western blot分别检测各组中ITGA5的基因和蛋白质表达水平。结果 ITGA5基因shRNA慢病毒表达载体经过测序鉴定构建成功,q PCR和Western blot检测结果显示3种慢病毒干扰组的ITGA5表达水平均低于NC组(P均<0.05)。NC组m RNA的表达量为(100±2.3)%,ITGA5-shRNA-1、ITGA5-shRNA-2、ITGA5-shRNA-3组m RNA相对表达量分别为(10.7±3.7)%、(16.7±1.5)%、(11.8±2.9)%,且其干扰效率均达到70%以上,可选择其中一个干扰靶点进行后续实验。结论成功构建ITGA5基因shRNA慢病毒表达载体,感染肝癌Bel-7404细胞并成功筛选出稳定沉默细胞系,为进一步研究ITGA5在肝癌中的生物学功能和作用机制提供了实验基础。