整合素β样1在肝细胞癌中的表达及作用

目的探讨整合素β样1(ITGBL1)在肝细胞癌中的表达及其在促进肝癌细胞株增殖、迁移及侵袭中的作用。方法实时荧光定量PCR和免疫组织化学法检测12例新鲜肝细胞癌和癌旁肝组织,以及160例石蜡样本中ITGBL1基因和蛋白的表达情况,并分析其表达水平与患者临床病理学参数及预后的关系;分别构建ITGBL1稳定过表达的HUH7细胞系及ITGBL1稳定下调表达的LM3细胞系,CCK8、划痕实验和Transwell实验检测ITGBL1对肝癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果ITGBL1在癌组织中的表达高于癌旁肝组织,高表达ITGBL1与血清AFP水平、肿瘤包膜侵犯、脉管癌栓、肿瘤分化及临床分期相关(均P<0.05),Kaplan-Meier单因素分析结果显示ITGBL1高表达患者DFS较短;过表达ITGBL1基因后,HUH7细胞的增殖、迁移及侵袭能力增强,而下调ITGBL1表达后LM3细胞的增殖、迁移及侵袭能力降低。结论ITGBL1在肝细胞癌组织中高表达,ITGBL1可以促进肝癌细胞株的增殖、迁移及侵袭能力,但具体机制还需进一步研究。

整合素β样1 mRNA在乳腺原发癌中的表达及其临床意义

目的探讨乳腺原发癌组织中整合素β样1(integrin bate-like 1,ITGBL1)mRNA水平与临床病理因素的关系,评估其对预测患者预后的临床价值。方法采用实时定量RT-PCR方法检测180例行乳腺癌根治术并随访3年以上的乳腺浸润性导管癌组织中ITGBL1mRNA的水平。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线确定ITGBL1 mRNA水平分组的阈值;用χ2检验比较组间差异;用Kaplan-Meier法绘制生存曲线;用Log-rank时序检验比较组间生存期的差异。结果ER阴性乳腺癌患者的ITGBL1 mRNA高表达率低于ER阳性患者(χ2=7.475,P=0.006),组织学Ⅲ级的乳腺癌患者ITGBL1 mRNA高表达率低于Ⅰ～Ⅱ级乳腺癌患者(χ2=4.410,P=0.036),而在不同年龄和绝经状态、肿瘤大小、淋巴结转移状态、临床分期以及PR和HER-2状态各组间比较差异无统计学意义(P>0.050)。ITGBL1 mRNA低表达组患者3年无转移生存率低于高表达组,差异有统计学意义(χ2=4.569,P=0.033);3年无病生存率、5年无病生存率和5年无转移生存率组间比较虽差异无统计学意义(P>0.050),但随ITGBL1 mRNA表达降低而有下降趋势。结论乳腺原发癌中ITGBL1 mRNA高表达是ER阳性乳腺癌的生物学特征之一;ITGBL1 mRNA低表达的乳腺癌恶性程度高、组织分化差且患者预后不良,提示ITGBL1基因是潜在的乳腺癌预后预测分子标志物。

外泌体源性LncRNA ESCCAL-1/miR-874/ITGBL1对结直肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的本研究旨在探究外泌体源性长非编码RNA(LncRNA)ESCCAL-1调控miR-874/整合素β样因子1(ITGBL1)轴在结直肠癌(CRC)进展中的作用机制。方法运用基因表达综合数据库(GEO)数据库对CRC中的差异表达基因进行分析。应用qRT-PCR检测LncRNA ESCCAL-1、miR-874和ITGBL1在CRC组织和细胞系(SW480、SW620、HCT116和HT29)及癌旁正常组织和NCM460细胞系中的表达;3(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)、克隆形成和流式细胞术分别检测细胞增殖、集落形成和凋亡情况;双荧光素酶报告实验分别验证miR-874与ESCCAL-1、ITGBL1间的互作用关系;荧光原位杂交测定LncRNAESCCAL-1的亚细胞定位。使用Exosome提取试剂盒分离血清中的外泌体。结果ESCCAL-1和ITGBL1在CRC组织和细胞系中的表达高于癌旁正常组织和NCM460细胞系,miR-874则相反(P<0.05)。敲减ESCCAL-1能够抑制CRC细胞增殖和集落形成,促进细胞凋亡。miR-874和ESCCAL-1存在特异性结合位点,miR-874抑制剂能够部分逆转敲减ESCCAL-1在CRC中介导的效应(P<0.05)。ESCCAL-1吸附miR-874上调ITGBL1。CRC患者血清中的ESCCAL-1及exo-ESCCAL-1较对照组上调,血清exo-ESCCAL-1可能是CRC治疗的一个有价值的诊断指标(P<0.05)。结论ESCCAL-1通过调控miR-874/ITGBL1轴促进CRC进展,ESCCAL-1可能是CRC治疗的一个有效分子靶点。

舌下腺黏液性腺泡细胞特异性Cre重组酶基因敲入小鼠的建立和鉴定

目的建立和鉴定整合素β样蛋白1基因(Itgbl1)启动子指导下的Cre重组酶基因敲入小鼠。方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术研制Itgbl1-Cre基因敲入小鼠。利用Itgbl1-Cre基因敲入小鼠与Cre的报道小鼠ROSA;LSL-tdTomato;交配的子代小鼠进行遗传细胞谱系示踪。通过红色荧光蛋白tdTomato鉴定Itgbl1阳性细胞及其子代细胞的组织表达谱。通过多色免疫荧光染色利用多种细胞特异性的标志物鉴定阳性细胞及其子代细胞的细胞类型。结果与结论tdTomato蛋白在舌下腺的黏液性腺泡细胞、胰岛细胞和胃的分泌细胞中特异性表达。此外,tdTomato在部分视网膜和脑的神经元细胞以及少量肠的浆膜层、骨关节软骨、骨膜和骨髓的细胞中表达。成功建立了首个在小鼠舌下腺的黏液性腺泡细胞中特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠品系。