牛整合素β7亚基片段的表达及多抗制备

为制备牛整合素β7亚基片段的多克隆抗体,根据GenBank中牛整合素β7基因序列,合成了β7亚基288 bp(140-427 bp)的cDNA片段,通过DNA重组法构建表达质粒,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达。表达产物经Western blotting鉴定,结果证实成功表达了分子质量约为15 ku的β7蛋白。超声破碎细菌后,Ni-NTA树脂进行纯化,免疫兔子获得多抗。间接ELISA检测多抗效价为1∶32000,为进一步研究牛整合素α4β7的功能奠定基础。

MadCAM-1与整合素β7免疫细胞浸润在食管癌发生中的作用

目的探讨M adCAM-1(m ucosal addressin cell adhesion m olecu le-1)的变化及整合素β7免疫细胞浸润在食管癌发生中的作用。方法用免疫组织化学SP法,检测50例行食管癌根治术所收集的癌组织、癌旁组织、正常食道黏膜组织中M adCAM-1与免疫细胞上整合素β7的表达。结果M adCAM-1表达率在正常食道黏膜、癌旁组织及癌组织中分别为78%(39/50),64%(32/50)和40%(20/50)。癌组织中的阳性表达率明显低于正常组织(P<0.01)和癌旁组织(P<0.01);而正常组织与癌旁组织之间差异无统计学意义(P>0.05);M adCAM-1阳性表达患者中在低年龄组(<45 y)中的表达低于高年龄组(>45 y)(P<0.05);M adCAM-1阳性表达率与TNM分型、肿瘤部位、肿瘤大小及癌细胞的浸润深度和分化程度无关(P>0.05)。M adCAM-1阳性表达组中β7免疫细胞数量癌组织中明显低于癌旁及正常组织(P<0.01)。结论M adCAM-1参与肿瘤局部免疫过程,与食管癌发生、发展有关。食管癌组织中M adCAM-1的表达减少,β7免疫细胞浸润减少。提高M adCAM-1表达是肿瘤免疫治疗的一种方法。

血清IL-33、TNF-α、整合素α4β7表达率与溃疡性结肠炎患者肠道菌群分布特征的关系研究

目的观察溃疡性结肠炎患者血清白细胞介素-33(IL-33)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、整合素α4β7表达率及肠道菌群分布情况,并分析血清IL-33、TNF-α、整合素α4β7表达率与肠道菌群的关系,旨在为临床相关疾病治疗提供参考。方法采用回顾性分析方法,采集2021年4月~2022年11月期间本院收治的50例活动期溃疡性结肠炎患者的基线资料纳入活动组,采集同时期50例缓解期溃疡性结肠炎患者的基线资料并纳入缓解组,对比两组患者血清IL-33、TNF-α、整合素α4β7表达率及肠道菌群分布情况,并分析上述血清指标与肠道菌群分布的关系。结果两组患者肠道菌群分布及血清TNF-α、IL-33、整合素α4β7差异有统计学意义。其中,活动组患者肠球菌(8.60±0.25)Ig CFU/g、乳杆菌(8.85±0.27)Ig CFU/g及肠杆菌(11.18±0.60)Ig CFU/g较缓解组患者[(7.85±0.22)Ig CFU/g、(7.02±0.15)Ig CFU/g、(9.40±0.20)Ig CFU/g]多,活动组双歧杆菌数量(5.80±0.48)Ig CFU/g较缓解组(7.45±0.55)Ig CFU/g少,差异有统计学意义(P<0.05);活动组患者血清TNF-α(48.25±5.14)ng/ml、IL-33(6.25±1.14)ng/L较缓解组[(9.52±2.65)ng/ml、(4.32±1.05)ng/L]高,活动组整合素α4β7表达率较低[(58.63±1.05)%vs.(70.12±1.45)%],差异有统计学意义(P<0.05);经双变量Spearman直线相关性检验结果显示,双歧杆菌与血清TNF-α、IL-33均呈负相关(r<0,P<0.05),与整合素α4β7呈正相关(r>0,P<0.05);乳杆菌、肠杆菌与血清TNF-α、IL-33均呈正相关(r>0,P<0.05),与整合素α4β7呈负相关(r<0,P<0.05)。肠球菌与血清TNF-α、IL-33、整合素α4β7无相关性(P>0.05)。结论溃疡性结肠炎患者血清TNF-α、IL-33、整合素α4β7与肠道菌群分布相关,针对血清TNF-α、IL-33高,血清整合素α4β7表达率低的患者给予针对性干预措施,可改善溃疡性结肠炎患者肠道菌群,促进患者临床预后。

人整合素α_4(CD49d)β_7的纯化、检测及有关应用的讨论

使用亲和层析的方法 ,对人整合素α4β7进行纯化。通过ELISA检测尤其是对于免疫小鼠应答的监测 ,相应改变免疫策略。从讨论中获取正确的指导思路和适当的试验方法 ,在人整合素 β7和抗体的研制方面取得了显著的进展。

微量元素、整合素α4、β7和COX-2与胃癌侵袭转移关系的研究

目的：研究微量元素变化、整合素α4、β7亚基和环氧合酶．2表达与胃癌侵袭转移行为的关系，探索胃癌淋巴结选择性转移的机制。方法：取甘肃河西地区50例胃癌患者作为研究组(R组)，取当地50例健康志愿者作为对照组(C组)，用等离子发射光谱(ICP)监测血清中微量元素的变化；应用RT-PCR检测胃癌患者癌组织、转移灶中α4、β7亚基的表达。用免疫组化SP法检测胃癌及转移灶中COX-2的表达。结果：(1)胃癌组血清微量元素Cu／Zn、Fe值高于对照组(P<0．01，0．05)，Zn、Mn低于对照组(P<0．01．0。05)，经多因素非条件Logistic回归分析后Zn进入方程(P<0．01)；(2)Zn的含量在有转移患者血清和无转移患者血清中有显著性差异(P<0．01)、整合素α4、β7亚基和COX-2表达在有转移的癌组织中和无转移的癌组织有显著性差异(P<0．01)；(3)转移组中血清Zn的含量在α4、β7、COX-2阳性患者和阴性患者间有显著性差异(P<0．05)；(4)α4、β7和COX-2的表达有协同关系(P<o．05)：(5)血清Zn含量在有第三站淋巴结转移的患者中明显低于有第一、二站淋巴结转移的患者．α4、β7亚基的表达在第三站淋巴结转移灶中明显低于第一、二站淋巴结转移灶中．差异有显著性(P<0．05)。结论：Zn降低可能为胃癌发生或转移的始动因素，可影响细胞黏附能力．降低α4、β7亚基、升高COX-2在胃癌组织中的表达，促进胃癌的侵袭转移。Zn含量的变化与α4、β7和COX-2亚基的表达与淋巴结选择性、跳跃式转移有关。

整合素α4β7在肠道表达的意义

目的通过对外周血和肠道组织CD3+CD4+T淋巴细胞整合素α4β7表达率的检测,从分子水平为肠道作为HIV感染的主要部位提供依据。方法采用流式细胞仪对外周血和肠道组织中CD3+CD4+T淋巴细胞整合素α4β7表达情况进行分析,并对数据进行统计学处理。结果外周血CD3+CD4+T淋巴细胞整合素α4β7表达率为(30.2±5.1)%,肠道组织CD3+CD4+T淋巴细胞整合素α4β7表达率为(45.2±6.2)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论整合素α4β7受体使CD3+CD4+T淋巴细胞向肠相关淋巴组织归巢,肠道组织CD3+CD4+T淋巴细胞整合素α4β7表达率高于外周血。肠道CD3+CD4+T淋巴细胞高表达于整合素α4β7,使肠道作为HIV感染的主要部位成为可能。

人整合素分子β7亚基片段的表达鉴定及多抗制备

目的 在大肠杆菌中高效表达人整合素分子β７片段并制备多抗。方法 ＤＮＡ重组法构建表达质粒，经ＩＰＴＧ诱导在大肠杆菌中获高效表达。表达产物经免疫印迹鉴定后，用８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解包涵体，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯化，免疫家兔获得多抗。结果 β７片段在大肠杆菌中训效表达。表达产物以包涵体形式存在。免疫印迹鉴定为目的蛋白。多抗效价达１：１０２４００。结论 制备了抗β７的多抗，对β７整合素的功能研究有重要意义。

抗整合素α4β7单克隆抗体治疗炎症性肠病的疗效和临床应用

炎症性肠病(IBD)是一种慢性、复发性炎症性疾病, 已成为我国重大公共卫生难题之一。抗整合素α4β7单克隆抗体主要包括维得利珠单抗(VDZ)和正在研发的阿利鲁单抗(abrilumab)。VDZ是目前唯一上市的肠道选择性抗淋巴细胞迁移生物制剂, 多项研究证明了其在IBD治疗中的疗效和安全性。如何预测、监测和评估VDZ的疗效, 如何优化VDZ用药或与其他药物联合使用的方案等, 在临床实践中受到广泛关注。现通过回顾VDZ和阿利鲁单抗的相关研究进展, 特别是已上市的VDZ在治疗IBD方面的最新研究内容, 旨在为IBD治疗的临床实践提供建议。

危重症患儿整合素α4β7和L-选择素水平变化及其意义探讨

目的探讨危重症患儿胃肠功能衰竭时整合素α4β7及L-选择素的表达及其与肠道黏膜免疫功能的关系。方法选择危重症患儿48例，按有无胃肠功能衰竭分为非胃肠功能衰竭组（29例）及胃肠功能衰竭组（19例），另选择同期25例健康体检儿童作为对照组。应用流式细胞仪检测各组整合素α4β7和L-选择素的表达，并进行比较。结果胃肠功能衰竭组整合素α4β7[（11．11±1．15）％]显著低于非胃肠功能衰竭组[（15．36±1．26）％]和对照组[（19．62±0．89）％]（P〈0．05），非胃肠功能衰竭组整合素α4β7与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。胃肠功能衰竭组L．选择素[（60．68±3．72）％]显著低于非胃肠功能衰竭组[（69．43±1．52）％]和对照组[（88．65±2．41）％]，非胃肠功能衰竭组L选择素显著低于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论整合素α4β7和L-选择素水平在危重症患儿发生胃肠功能衰竭的早期开始降低，且整合素α4β7在胃肠功能衰竭时降低更加明显。

整合素α4β7与胃肠道非霍奇金淋巴瘤相关性研究

整合素α4β7为黏膜归巢受体,这种黏膜归巢特性在胃肠道非霍奇金淋巴瘤(NHL)的发病中占重要地位。研究发现α4β7在胃肠道的恶性淋巴瘤性息肉病、结外边缘区B细胞淋巴瘤或MALT型淋巴瘤、小肠T细胞NHL和小肠滤泡性NHL的病理组织中表达,而非黏膜原发部位的NHL一般不表达,如出现阳性,则有可能预示非胃肠道NHL患者已有胃肠道浸润或骨髓浸润。

整合素α4β7在大鼠溃疡性结肠炎发病中的作用

目的 探讨淋巴细胞归巢受体整合素α4β7在溃疡性结肠炎（UC）大鼠发病中的作用.方法 60只SD大鼠分为对照组（20只,仅用丙酮液灌肠）、模型组（2、4-二硝基氯苯丙酮液灌肠,20只）和干预组（造模后即自大鼠尾静脉注入α4抗体,20只）.观察大鼠结肠黏膜损伤情况;采用ELISA法检测结肠组织IL-2和IL-6水平;采用RT-PCR检测结肠组织中α4和β7的表达;采用流式细胞技术检测大鼠门静脉血中整合素α4阳性淋巴细胞数.结果 模型组和干预组大鼠结肠组织α4mRNA相对表达量分别为0.68±0.24和0.58±0.37,β7 mRNA的相对表达量分别为0.84±0.37和0.65±0.30,均显著高于对照组（0.15±0.13,0.24±0.62,均P＜0.01）.模型组和干预组结肠静脉回流血中α4阳性淋巴细胞的比例分别为（76.7±8.2）%和（68.2±7.6）%,显著高于对照组的（14.7±6.7）%（P＜0.01）.与模型组比较,干预组大鼠结肠组织大体损伤评分、组织学评分、IL-2和IL-6水平均显著降低（均P＜0.05）.结论 淋巴细胞整合素α4β7的高表达与大鼠的结肠黏膜炎性反应形成有关,阻断整合素α4β7可有效减轻结肠黏膜炎性损伤.

肠道淋巴细胞归巢与自身免疫性葡萄膜炎的相关性探讨

葡萄膜炎是由眼组织特异性T细胞介导的自身免疫性疾病。肠道菌群激活的眼组织特异性T细胞已被证实可引发小鼠葡萄膜炎,肠道淋巴细胞归巢是其中的关键环节。循环系统中的T淋巴细胞通过表面归巢受体整合素α4β7与其配体黏膜地址素细胞粘附分子-1(MAdCAM-1)特异性识别结合后进入到肠道,再被激活为活化的眼组织特异性T细胞,随后这些眼组织特异性T细胞从肠道不断迁移到眼部,穿越血视网膜屏障进入眼内,引发葡萄膜炎。因此,肠道淋巴细胞归巢在自身免疫性葡萄膜炎的发生发展中可能起重要作用。

维得利珠单抗用于治疗溃疡性结肠炎的研究进展

溃疡性结肠炎(UC)是一种以反复发作的腹痛、腹泻及粘液脓血便为主要临床症状的慢性非特异性炎症性肠病,随着对其免疫发病机制的深入研究,治疗模式已从传统药物逐渐转向以炎症相关通路为作用靶点的生物制剂治疗方案,维得利珠单抗(VDZ)作为一种新型肠道选择性生物制剂,可特异性阻断α4β7整合素与黏膜地址素细胞黏附分子-1 (MAdCAM-1)间的相互作用,抑制T淋巴细胞向肠道黏膜迁徙,减轻肠道炎症反应。本文对维得利珠单抗治疗溃疡性结肠炎的作用机制、临床疗效和安全性作一综述。

克罗恩病概述

克罗恩病(CD)是一种病因未明确的侵犯胃肠全层的慢性炎症性疾病。病理学上可分为早期、活动期、慢性炎症期或消退期等。临床上相应可分早期、活动期、缓解期或慢性活动期。中国近年发病率有明显增高趋势,推算的发病率与患病率分别为0.848/10万和2.29/10万。肠道黏膜免疫学障碍的研究,很多已得到临床证实与应用。大体病理学特点为节段性(跳跃性)溃疡、卵石征、透壁性炎症和(或)瘘管及肠腔狭窄等;显微镜下可见淋巴细胞浸润,灶性分布,隐窝破坏,裂隙状溃疡及非干酪坏死性肉芽肿等。临床表现为腹痛腹泻,发热与消瘦等。必须依据患者的临床资料综合分析后才能作出诊断。不及时规范治疗,大多数患者需手术治疗,但仍会复发。平均期望寿命略低于正常人。

肠道淋巴细胞归巢受体在胃肠功能障碍的危重症患儿外周血中表达的变化

目的探讨危重症患儿胃肠功能障碍时外周血肠道淋巴细胞归巢受体（整合素α4β7和L-选择素）的表达及其与肠道黏膜免疫功能的关系。方法4个月～14岁危重症患儿45例。分为胃肠功能衰竭组及非胃肠功能衰竭组，选择25例健康体检儿为对照组。用流式细胞仪检测整合素α4β7和L-选择索的表达。结果胃肠功能衰竭组外周血中整合素α4β7和L-选择素水平明显减低。胃肠功能衰竭组与非胃肠功能衰竭组比较差异有显著性（P〈0．05），胃肠功能衰竭组与对照组比较差异亦有显著性（P〈0．05）。结论整合素α4β7和L-选择素水平在危重症患儿发生胃肠功能障碍的早期就降低。肠道淋巴细胞归巢受体可能通过抑制淋巴细胞向肠道的归巢，使肠黏膜免疫屏障受损，进而降低肠黏膜的免疫功能。

单克隆抗体用于治疗溃疡性结肠炎的研究进展

溃疡性结肠炎(UC)发病机制复杂,与免疫因素及炎性介质等因素相关。单克隆抗体因为能特异性结合并选择性杀伤靶细胞、体内呈靶向性分布、不良反应少,所以成为治疗中重度UC的研究热点,其中包括抗肿瘤坏死因子类单抗(如英夫利昔单抗、阿达木单抗、戈利木单抗),α4β7整合素抗体(如维多珠单抗、etrolizumab、SHP647),白细胞介素(IL)-12和IL-23拮抗剂等。对治疗UC单克隆抗体的作用机制和临床疗效研究进展进行综述,以期为该类新药的研发及临床应用提供依据。