肿瘤整合素α_vβ_3受体显像的研究现状

整合素αvβ3受体在多种恶性肿瘤细胞表面有高水平的表达,尤其在恶性肿瘤组织新生血管内皮细胞膜,成熟血管内皮细胞和绝大多数正常器官系统则无表达或几乎不能被探及。含有RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)序列的小分子多肽是整合素αvβ3受体拮抗剂,对整合素αvβ3受体具有高度的选择性与亲和力,是一类具有潜在临床应用价值的肿瘤受体显像剂。

整合素αvβ_3在血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老中的变化

目的观察整合素αvβ3在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老中的变化。方法体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ(终浓度10-6mol/L)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组。以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标。其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力;利用Western印迹法分析AngⅡ诱导HUVECs 0、12、24、36、48 h的整合素αvβ3表达的时间效应关系。结果与对照组相比,10-6 mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)%;(81.80±0.92)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0～G1,证实细胞衰老;AngⅡ呈时间依赖性上调整合素αvβ3表达。结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与上调衰老细胞整合素αvβ3表达有关。

靶向整合素αvβ3受体磁共振/荧光双模态成像纳米探针的体外成像性能及光动力治疗效应评价

目的探讨RGD-Gd@BSA-Ce6纳米探针对A549肺癌细胞的磁共振/荧光显像效果和光动力治疗作用。方法构建靶向和非靶向纳米探针RGD-Gd@BSA-Ce6和Gd@BSA-Ce6。采用体外磁场发生仪和3.0T临床医用磁共振仪采集RGD-Gd@BSA-Ce6和商品化Gd-DTPA的T1弛豫时间和T1加权图像。通过激光共聚焦显微镜观察光敏剂二氢卟啉e6(chlorin e6,Ce6)、Gd@BSA-Ce6及RGD-Gd@BSA-Ce6纳米探针与A549肺癌细胞的结合能力效果。通过细胞增殖-毒性检测(CCK8试剂盒法)评估3种药物对肿瘤的光动力治疗效果。通过细胞增殖-毒性检测(MTT试剂盒法)评估3种药物对293T细胞(人胚胎肾细胞)的生物安全性。结果 RGD-Gd@BSA-Ce6较Gd-DTPA具有更高的T1弛豫率,其T1弛豫系数为18.615。同时,RGD-Gd@BSA-Ce6的T1加权图信号显著高于Gd-DTPA。激光共聚焦成像结果表明,RGD-Gd@BSA-Ce6和Gd@BSA-Ce6对A549细胞的结合能力均高于光敏剂Ce6;同时,RGD-Gd@BSA-Ce6对A549细胞的结合能力明显高于Gd@BSA-Ce6。细胞光动力治疗结果证实,两种纳米探针处理组的细胞存活率都低于光敏剂Ce6处理组(P<0.05),同时RGD-Gd@BSA-Ce6组的细胞存活率明显低于Gd@BSA-Ce6组(P<0.05)。细胞水平的生物安全性实验表明,不同药物浓度下,293T细胞的存活率并未发生明显改变,且各组存活率均高于60%。结论 RGD-Gd@BSA-Ce6比商品化Gd-DTPA具有更高T1弛豫性能;体外实验证实RGD-Gd@BSA-Ce6纳米探针对A549肺癌细胞具有显著的结合能力;光动力治疗实验具有明显的杀伤A549肿瘤细胞的作用;MTT实验表明RGD-Gd@BSA-Ce6纳米探针具有良好的生物安全性。

高度近视糖尿病豚鼠视网膜中骨桥蛋白及整合素αvβ3受体的表达

目的:通过观察糖尿病豚鼠视网膜中骨桥蛋白(OPN)及整合素αvβ3受体的表达水平受高度近视的影响情况,初步探讨高度近视影响糖尿病视网膜病变进展的机制。方法:选取出生1周龄雄性豚鼠90只,随机分为正常对照组(Ⅰ组)、高度近视组(Ⅱ组)、糖尿病组(Ⅲ组)、糖尿病合并高度近视组(Ⅳ组)。Ⅰ组18只,余3组每组24只。Ⅱ组为半透明眼罩遮盖右眼20周;Ⅲ组为饲养8周时左下腹腔注射链脲佐菌素(STZ) 280 mg/kg;Ⅳ组为半透明眼罩联合注射STZ。每组随机选择18只完成实验测量,摘除眼球后行HE染色、免疫组化染色,观察视网膜组织形态,并对OPN和整合素αvβ3受体阳性细胞率完成计数。结果:各组豚鼠均造模成功。HE染色观察Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组的视网膜组织形态,与Ⅰ组相比均有组织学差异,Ⅲ、Ⅳ组可见发生糖尿病视网膜改变,Ⅳ组较Ⅲ组程度轻。免疫组化染色观察,有糖尿病组(Ⅲ组、Ⅳ组)与无糖尿病组(Ⅰ组、Ⅱ组)比较,OPN、整合素αvβ3受体表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。另Ⅳ组与Ⅲ组相比,OPN及整合素αvβ3受体阳性表达率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:OPN及整合素αvβ3受体在糖尿病合并高度近视豚鼠视网膜组织中的表达较其在糖尿病模型中表达低,可能在高度近视影响DR进程中新生血管的发展中发挥作用。

血清对Hela细胞整合素αvβ3受体内吞循环的影响

目的探讨血清对Hela细胞整合素αvβ3受体内吞循环的影响。方法培养Hela细胞,激光共聚焦显微镜观测其表面αvβ3受体的表达情况。通过对细胞表面蛋白进行生物素标记,利用酶联免疫吸附法,考察含血清培养基培养条件下和不含血清的培养条件下,细胞表面αvβ3受体的内吞循环情况。结果αvβ3受体在Hela细胞表面具有高表达。与不含血清培养条件相比,含血清培养组αvβ3受体的入胞量在5min和10min时显著减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论含血清培养基培养的条件下,Hela细胞中的αvβ3受体可能更快地循环返回至细胞表面。

99Tcm-3PRGD2整合素受体显像在乳腺癌定性诊断中的价值及与钼靶检查的对比研究

目的 研究99Tcm-联肼尼克酰胺-3聚乙二醇-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽二聚体（99Tcm-3PRGD2）整合素受体显像在乳腺癌定性诊断中的价值及与钼靶检查的对比。方法 选取初诊乳腺占位患者84例，均为女性。所有患者行2 h、4 h 99Tcm-3PRGD2 整合素受体显像及钼靶检查，以术后病理结果作为“金标准”，比较不同显像方法（全身显像及胸部SPECT/CT显像）对乳腺癌定性诊断的价值，并与钼靶结果进行对比分析。采用SPSS22.0软件，对数据进行t检验和χ2检验。结果 SPECT/CT显像的诊断效能高于全身显像；乳腺癌99Tcm-3PRGD2摄取率[病灶容积最大计数（Tmax）、病灶容积平均计数（Tmean）、Tmax/本底平均计数（B）值及Tmean/B值]均明显高于良性占位（t=2.09-3.19，均P〈0.05），且Tmax/B值差异更为明显（t=3.19，P〈0.01）；2 h、4 h显像对乳腺癌诊断效能差异无统计学意义（t=0.63~1.25，均P〉0.05）。SPECT/CT显像诊断乳腺癌的灵敏度大于95.0%，联用钼靶后灵敏度可以提高到98.4%；对致密型乳腺患者，SPECT/CT显像与钼靶诊断乳腺癌的灵敏度、特异度、准确率分别为95.2%、83.3%、91.7%和78.6%、76.2%、77.8%，前者的准确率高于后者，且差异有统计学意义（χ2=4.341，P〈0.05）。结论 99Tcm-3PRGD2 SPECT/CT显像定性诊断乳腺癌具有高灵敏度，是对钼靶的有益补充，尤其对致密型乳腺占位患者具有独特优势。

^99Tc^m-3PRGD2整合素受体显像鉴别乳腺良恶性病变的价值及与超声检查的对比研究

目的 探讨99Tcm-3PRGD2整合素受体显像鉴别乳腺良恶性病变的价值及与超声检查的对比研究。方法 收集2016年10月至2017年6月因乳腺结节或肿块拟行穿刺或手术治疗的女性患者，行乳腺超声检查，选取超声提示病灶直径〉1 cm的45例患者经肘静脉注射99Tcm-3PRGD2（740-925 MBq）后行早期15 min SPECT静态显像及2 h SPECT/CT俯卧位显像。以病理结果为“金标准”，采用半定量分析指标T/NT值建立诊断阈值并进行诊断效能分析。组间比较采用独立样本非参数检验Mann-Whitney U方法；诊断效能比较采用χ2检验。结果 45例患者经病理学检查共发现56个病灶，其中，35个病灶为乳腺癌，21个病灶为良性病变。99Tcm-3PRGD2 2 h SPECT/CT显像的乳腺恶性病灶T/NT值（3.92±1.67）高于良性病灶T/NT值（2.04±0.46），且差异有统计学意义（Z=-3.77，P=0.00）。取约登指数最大时的临界值2.9，99Tcm-3PRGD2 SPECT/CT显像的灵敏度、特异度、准确率分别为82.9%、71.4%、78.6%，诊断乳腺良恶性病变受试者工作特征（ROC）曲线下面积为0.77；超声诊断乳腺良恶性病变ROC曲线下面积为0.76，其灵敏度、特异度、准确率分别为85.7%、66.7%、78.6%。99Tcm-3PRGD2 SPECT/CT与超声诊断效能相近（χ2=0.05，P〉0.05）。超声＋99Tcm-3PRGD2 SPECT/CT联合检查可提高乳腺良恶性诊断的准确率（92.9%），分别与二者比较差异均有统计学意义（χ2=77.17、74.87，均P〈0.05）。结论 99Tcm-3PRGD2整合素受体显像可以从肿瘤血管生成角度鉴别乳腺良恶性病变，提供解剖及功能信息，尤其对于超声声像图表现不典型时，可进一步鉴别良恶性，减少患者不必要的穿刺等有创性检查。

整合素受体靶向的载胰岛素三甲基壳聚糖纳米给药系统细胞摄取及转运机制

本文拟构建整合素配体c RGDyk修饰的三甲基壳聚糖纳米给药系统,以期提高胰岛素的口服生物利用度。采用单因素筛选法对其处方进行优化,筛选最优处方制得非配体修饰纳米粒(TMC NPs)和配体修饰纳米粒(C-TMC NPs),粒径分别为(240.3±4.2)和(259.5±3.3)nm;电位分别为(33.5±0.8)和(25.7±1.6)m V;包封率分别为(76.0±2.2)%和(74.4±2.0)%;载药量分别为(50.1±2.1)%和(26.1±1.0)%。以Caco-2细胞为模型,考察了TMC NPs和C-TMC NPs的细胞摄取、跨膜及相关转运机制。C-TMC NPs的摄取及药物累计透过量较TMC NPs分别提高了1.98倍和2.84倍。研究发现,TMC NPs和C-TMC NPs的细胞摄取均由网格蛋白、小窝蛋白介导的主动转运及大胞饮参与,且游离的c RGDyk可显著抑制C-TMC NPs的细胞摄取。

携RGD靶向肽载紫杉醇高分子超声造影剂制备及其对乳腺癌细胞靶向能力、抗肿瘤效应评估

目的制备携精氨酸—甘氨酸—天门冬氨酸(RGD)肽段的RGDfK载紫杉醇(PTX)高分子超声造影剂,并评价其体外乳腺癌细胞靶向能力及抗肿瘤效应。方法用普通造影剂聚乳酸—羟基乙酸(PLGA)为成膜材料,采用双乳化法及碳二亚胺法制备靶向载紫杉醇造影剂PTX-PLGA-RGDfK。光镜下观察该造影剂的形态,马尔文激光粒径仪检测其粒径分布及表面电位,高效液相色谱法测定PTX体外释药能力。联合使用激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测该造影剂表面FITC-RGDfK的连接情况,激光共聚焦显微镜下观察体外对乳腺癌细胞靶向情况,CCK-8法检测乳腺癌细胞存活率评价细胞毒性,超声诊断仪造影模式下观察其显影效果。结果造影剂PTX-PLGA-RGDfK水溶性较好、大小较均一,粒径为(326.24±56.63)nm,表面电位为-11.4 mV;PTX包封率为82.10%±2.12%,载药量为8.21%±0.21%。PTX-PLGA-RGDfK在最初的12 h内药物突释,释放率达46.59%±1.83%;随后出现平稳的缓慢释放,72 h后释放率达73.26%±1.98%。该造影剂表面FITC-RGDfK结合率达95.28%±0.37%,乳腺癌细胞周围可见大量红色荧光靶向造影剂。与PLGA同浓度处理的乳腺癌细胞比较,PTX-PLGA、PTX-PLGA-RGDfK处理的乳腺癌细胞存活率降低,且PTX-PLGA-RGDfK的乳腺癌细胞处理低于PTX-PLGA处理者(P均<0.05)。PTXPLGA-RGDfK体外显影成像效果较好,回声均匀细腻。结论成功制备出携RGD肽载PTX的高分子超声造影剂,可与MBA-MD-231细胞特异性结合并提高化疗药物对肿瘤细胞的杀伤效果。

^(99m)Tc-RGD肽荷人神经胶质瘤裸鼠显像的试验研究

整合素αvβ3是一种细胞外基质（extrocelluralmatrix,ECM）黏附受体,生理情况下整合素受体为细胞非组成性表达,而在新生血管内皮细胞及肿瘤细胞表面高表达[1]。整合素αvβ3受体在肿瘤生长和转移过程中的高度限制表达,使其成为一个非常有吸引力的靶点,用于肿瘤的诊断和治疗[2]。αVβ3受体通过与ECM蛋白识别含有三肽序列的RGD肽（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）特异性结合[3],这一理论为设计含有RGD肽序列的配体,用作选择性肿瘤靶向受体显像奠定了理论基础。

^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT/CT显像在不摄碘进展性放射性碘难治性分化型甲状腺癌中的诊断价值

目的评价^(99)Tc^(m)-甲苯磺酸钠烟酰胺腙聚乙二醇双环精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽(简称^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2))SPECT/CT显像对不摄碘进展性放射性碘难治性分化型甲状腺癌(RAIR-DTC)的诊断效能。方法前瞻性选择2019年10月至2022年5月在福建省立医院行^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT/CT检查的59例RAIR-DTC患者,其中男性17例、女性42例,中位年龄为51(28,80)岁。所有患者均行^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT/CT显像,其中22例接受酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗,37例接受促甲状腺激素(TSH)抑制治疗(13例在2周内接受了18F-FDG PET/CT显像)。取每例患者最大病灶的最大标准化摄取值(SUV_(max))进行分析。采用ROC曲线评估^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT/CT显像的诊断效能并计算^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT/CT显像检出RAIR-DTC病灶的SUV_(max)临界值;采用Pearson相关分析法分析病灶长径(TL)、刺激性甲状腺球蛋白(sTg)水平与SUV_(max)的相关性;采用配对t检验比较分析RAIR-DTC患者TKI治疗前后sTg水平、SUV_(max)、TL间的关系;采用Spearman分析法分析^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT/CT显像与18F-FDG PET/CT显像在检出阳性病灶的SUV_(max)之间的关系。结果59例RAIR-DTC患者的276个病灶被纳入分析,其中TKI治疗前后对比病灶59个。^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT/CT显像对RAIR-DTC病灶诊断的灵敏度和特异度分别为94.9%(95%CI:90.7%~97.3%)和88.7%(95%CI:77.5%~95.0%)。ROC曲线结果显示,^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT/CT显像检出RAIR-DTC病灶的SUV_(max)临界值为2.70。Pearson相关分析结果显示,靶病灶的SUV_(max)与sTg水平、TL均呈正相关(r=0.811、0.635,均P=0.001)。22例患者经TKI治疗后,RAIR-DTC病灶的SUV_(max)显著降低(t=11.027,P=0.001)。Spearman相关分析结果显示,^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT/CT显像与18F-FDG PET/CT显像在检出阳性病灶的SUV_(max)间呈正相关(r=0.560,P=0.001),且ROC曲线分析结果显示,^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT/CT显像对RAIR-DTC病灶的诊断效能与18F-FDG PET/CT显像的差异无统计学意义(Z=0.312,P=0.753)。结论^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT/CT显像对不摄碘进展性RAIR-DTC的诊断具有较高的灵敏度和特异度,与18F-FDG PET/CT显像相似。

[^(18)F]FDG-RGD多肽在肝纤维化诊断中的应用价值

目的采用[18F]FDG直接一步法标记合成[18F]FDG-RGD,探讨其在肝纤维化动物模型中潜在的诊断价值。方法采用TRACERlab FX18F N平台,在酸性条件下将酸化的[F]FDG与RGD加热直接反应,然后采用固相柱进行分离目的示踪剂[18F]FDG-RGD。应用硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)构建大鼠肝纤维化模型,对照组(n=4)和肝纤维化组大鼠(n=4)经尾静脉注射[18F]FDG-RGD,采用Discovery Elite PET/CT的VIP模型进行动态扫描,用Sharp IR+VUE Point HD及OSEM迭代重建法对采集图像进行重建,通过勾画感兴趣方法(region of interest,ROI)处理图像,获取大鼠肝脏与心脏的放射性计数比值(liver/heart,L/H),比较对照组与肝纤维化动物模型肝脏摄取[18F]FDG-RGD的差异。结果 10次连续合成效率达到20%、放射化学纯度98%,整个合成过程大约30min。注射[18F]FDG-RGD后30min,对照组与肝纤维化组L/H分别为0.73±0.15、1.35±0.08,肝纤维化组明显高于对照组(P=0.018)。结论 [18F]FDG直接标记RGD多肽方法简单、方便可行,[18F]FDG-RGD有助于肝纤维化的诊断。