白藜芦醇下调ILK/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞增殖的机制研究

目的:探讨白藜芦醇对卵巢癌A2780细胞生长、增殖的影响,并探讨其可能机制。方法:体外培养人卵巢腺癌A2780细胞,用不同浓度(50、100、200、400μmol/L)白藜芦醇作用A2780细胞不同时间(24、48和72 h)。采用MTT法检测白藜芦醇对细胞增殖活力的影响,采用流式细胞术检测白藜芦醇对细胞周期的改变情况,采用Western blot检测细胞内整合素蛋白激酶(integrin-linked kinase,ILK)、β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白水平的表达。结果:200μmol/L的白藜芦醇作用24 h可有效抑制A2780细胞增殖,使其阻滞于G0/G1期,并且存在显著的剂量-时间依赖性(P<0.05);结果还显示白藜芦醇能够显著抑制卵巢癌A2780细胞内ILK、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平(P<0.05),且存在浓度-时间依赖性(P<0.05)。结论:白藜芦醇可通过抑制卵巢癌A2780细胞中ILK/β-catenin信号通路,并降低下游靶蛋白Cyclin D1的表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖。

姜黄素对人肺癌A549细胞增殖的影响及机制

目的探讨姜黄素对肺癌A549细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法体外培养肺癌A549细胞,用不同浓度的姜黄素(5、10、20、40μmol/L)处理不同的时间(24、48和72 h)。采用MTT检测姜黄素对细胞增殖活力的影响。然后,采用脂质体法向A549细胞转染质粒pCDNA3.1和pCDNA3.1-ILK,用姜黄素20μmol/L处理细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞中整合素连接激酶(ILK)、β-连环蛋白(β-catenin)和血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA水平;Western blot法检测细胞中ILK、β-catenin、VEGF蛋白的表达。结果与空白对照组比较,随着姜黄素浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞的增殖率明显受到抑制,存在剂量-时间依赖性(P<0.05);而细胞中的ILK、β-catenin、VEGF mRNA和蛋白表达水平都显著降低;而过表达ILK后,细胞的增殖活性显著增高(P<0.05),且细胞中的ILK、β-catenin、VEGF mRNA和蛋白表达水平又显著增高(P<0.05)。结论姜黄素可通过调节ILK的活性进而抑制肺癌细胞的增殖,其可能的机制与姜黄素使Wnt/β-catenin信号通路失活,并降低下游靶基因VEGF的表达有关。

大黄素通过调节ILK/MAPK信号通路对糖尿病肾脏病大鼠肾组织的改善作用

目的:探究大黄素通过调节整合素连接激酶(ILK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对糖尿病肾脏病大鼠肾组织的改善作用。方法:采用腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素的方法诱导糖尿病肾脏病(DN)大鼠模型,并按随机数字表法分为模型组、大黄素低剂量组、大黄素中剂量组、大黄素高剂量组、二甲双胍组,每组12只。另取12只SD大鼠腹腔注射等量生理盐水,设为假手术组。经药物治疗后,检测大鼠24 h尿蛋白定量、血清肌酐(Scr)水平、肾组织病理形态改变、血清白细胞介素-17(IL-17)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平、肾组织ILK/MAPK通路相关蛋白表达。体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,随机分为对照组、模型组、大黄素组、ILK过表达质粒组、ILK空载质粒组、大黄素+ILK过表达质粒组。除对照组外,其余各组均以含有30 mmol/L葡萄糖的高糖培养液诱导构建高糖损伤细胞模型,同时分别以药物及质粒处理后,检测各组细胞活力、释放炎性介质IL-17、iNOS水平、ILK/MAPK通路蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠肾组织呈现明显病理损伤,24 h尿蛋白定量、Scr、血清IL-17及iNOS水平、肾组织p-p38 MAPK/p38 MAPK、ILK蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄素低、中、高剂量组和二甲双胍组大鼠肾组织病理损伤均减轻,24 h尿蛋白定量、Scr、血清IL-17及iNOS水平、肾组织p-p38 MAPK/p38 MAPK、ILK蛋白表达均明显降低,且大黄素各剂量组之间呈剂量依赖性(P<0.05);大黄素高剂量组各指标与二甲双胍组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组HK-2细胞活力明显降低(P<0.05),IL-17与iNOS水平、细胞p-p38 MAPK/p38 MAPK、ILK蛋白表达均明显升高(P<0.05)。与模型组、ILK空载质粒组、大黄素+ILK过表达质粒组比较,大黄素组HK-2细胞活力均明显升高(P<0.05),IL-17与iNOS水平、细胞p-p38 MAPK/p38 MAPK、ILK蛋白表达均降低(P<0.05),而ILK过表达质粒组细胞活力下降,IL-17与iNOS水平、细胞p-p38 MAPK/p38 MAPK、ILK蛋白表达均升高(P<0.05)。结论:大黄素可通过抑制ILK/MAPK信号,阻碍炎症产生及进展,减轻高糖引发的肾小管上皮细胞损伤,大黄素还可通过抑制炎症缓解肾组织损伤,改善DN大鼠肾功能。