肺岩宁对整合素连接激酶沉默后人肺癌A549细胞生物学活性的影响

目的在建立整合素连接激酶(ILK)基因RNAi慢病毒表达载体的基础上,研究ILK基因沉默后对人肺腺癌细胞A549细胞生物学活性的影响及中药肺岩宁方对细胞活性的影响。方法构建载体转染人肺腺癌细胞A549后,分为阴性对照病毒感染细胞组(NC组)、RNAi靶点病毒感染细胞组(KD组)、10%肺岩宁血清干预的NC组(NC+10%中药血清组)、10%肺岩宁血清干预的KD组(KD+10%中药血清组)、20%肺岩宁血清干预的NC组(NC+20%中药血清组)、20%肺岩宁血清干预的KD组(KD+20%中药血清组)及10%(10 mg/L)DDP干预的KD组(KD+10%DDP组)。MTT检测不同浓度的药物敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,Transwell实验和克隆形成检测细胞的迁移和成瘤能力。结果①KD组与NC组相比,KD组细胞凋亡率上升(P<0.05),G2/M期细胞总数的百分比明显降低(P<0.01),转移率明显降低(P<0.05),克隆数目明显减少(P<0.05)。②KD+10%中药含药血清组与NC+10%中药血清组相比,KD+10%中药血清组细胞凋亡率明显上升(P<0.05),G2/M期细胞总数的百分比明显降低(P<0.01),转移率无显著性差异(P>0.05),克隆数目明显减少(P<0.05)。③KD+20%中药血清组与NC+20%中药血清相比,KD+20%中药血清细胞凋亡率下降(P<0.01),G2/M期细胞总数的百分比降低(P<0.01),转移率无显著性差异(P>0.05),克隆数目明显减少(P<0.05)。④KD+10%DDP组与NC+20%中药血清组相比,KD+10%DDP组细胞凋亡率上升(P<0.01),G2/M期细胞总数的百分比明显降低(P<0.01),转移率明显降低(P<0.01),克隆数目明显减少(P<0.01)。结论 ILK基因沉默后可以明显促进人肺腺癌细胞A549的凋亡,降低细胞迁移和成瘤能力,对细胞周期无调控作用;10%中药肺岩宁方含药血清有促进细胞凋亡及抑制细胞克隆形成的能力;20%中药含药血清可以抑制细胞克隆形成能力;10%DDP有促进细胞凋亡、抑制细胞迁移和克隆形成的能力。

整合素连接激酶抑制剂对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)抑制剂在人近端肾小管上皮细胞转分化中的作用及可能机制。方法对数生长期人近端肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为对照组(无糖DMEM/F12培养液)、高糖组(30.0mmol/L葡萄糖DMEM/F12培养液)、抑制剂组(30.0 mmol/L葡萄糖DMEM/F12培养液+30.0μmol/L QLT0267 100μL),培养48h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态,Western blot法检测HK-2细胞ILK、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt(phosphorylated Akt,P-Akt)相对表达量,反转录PCR法检测ILK mRNA、纤连蛋白(fibronectin,Fn)mRNA表达量。结果对照组HK-2细胞呈椭圆形或圆形,细胞间连接紧密,呈岛屿状生长;高糖组细胞向长梭型转变,细胞间紧密连接消失,呈离散状生长;抑制剂组细胞改变同高糖组,但程度较轻;高糖组、抑制剂组HK-2细胞E-cadherin相对表达量(0.43±0.04、0.80±0.05)均低于对照组(1.04±0.05)(P<0.05),且高糖组低于抑制剂组(P<0.05);高糖组、抑制剂组P-Akt相对表达量(0.49±0.05、0.31±0.03)均高于对照组(0.21±0.01)(P<0.05);且高糖组高于抑制剂组(P<0.05),高糖组、抑制剂组HK-2细胞ILK相对表达量(0.52±0.02、0.51±0.02)均高于对照组(0.22±0.01)(P<0.05),高糖组与抑制剂组比较差异无统计学意义(P>0.05);高糖组、抑制剂组及对照组HK-2细胞Akt相对表达量(0.91±0.03、0.92±0.02、0.94±0.05)比较差异均无统计学意义(P>0.05);高糖组、抑制剂组HK-2细胞ILK mRNA(1.83±0.23、1.64±0.07)、Fn mRNA相对表达量(2.06±0.07、1.79±0.06)均高于对照组(0.83±0.04、1.14±0.08)(P<0.05),且高糖组Fn mRNA相对表达量高于抑制剂组(P<0.05),ILK mRNA相对表达量与抑制剂组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论ILK抑制剂QLT0267可抑制ILK下游效应分子Akt的磷酸化,减少Fn、E-cadherin下调,从而抑制或延缓肾小管上皮细胞转分化进程。

ID-1、ILK蛋白表达与宫颈癌病理特征的关系

目的观察宫颈癌组织内细胞分化抑制因子-1(ID-1)及整合素链接激酶(ILK)的表达状况,并分析其与宫颈癌发生发展间的联系。方法选取收集的84例宫颈癌组织标本(宫颈癌组)、同期获取的宫颈上皮瘤变(CIN)组织40例(CIN组)、正常宫颈组织40例(对照组),检测3组标本中的ID-1蛋白、ILK蛋白表达,分析不同国际妇产联盟分期(FIGO)、肿瘤分化程度、组织学类型、肌层浸润程度、淋巴结转移与ID-1蛋白、ILK蛋白表达的关系。结果宫颈癌组织中的ILK蛋白、ID-1蛋白阳性表达率分别为64.29%、70.24%,均显著高于CIN组(27.50%、35.00%)和对照组(12.50%、20.00%),差异具有统计学意义(P<0.05);CIN组和对照组的ILK蛋白、ID-1蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。宫颈癌组织中的ID-1蛋白阳性表达率在不同FIGO分期、是否发生淋巴结转移、不同肌层浸润深度组织中比较,差异具有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组织中的ILK蛋白阳性表达率在不同组织学分化程度、是否发生淋巴结转移、不同肌层浸润深度组织中比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论ID-1蛋白、ILK蛋白在宫颈癌组织中呈典型的高表达,可能与促进宫颈癌的发生发展有关。

ILK在宫颈癌组织中的表达及宫颈癌细胞侵袭能力的影响

目的探讨整合素链接激酶(ILK)在宫颈癌组织中的表达情况及其与宫颈癌细胞的侵袭能力的相关性。方法采用免疫组化法对湖南省益阳医专附属医院妇产科收集的59例宫颈上皮瘤变(CIN)标本、44例术后病例确诊的宫颈癌标本及30例病理检查为正常宫颈组织的标本进行检测,分析ILK在上述几种组织标本中的表达水平,并分析ILK表达与宫颈癌患者的临床病理特征的关系。结果宫颈癌组织中的ILK表达阳性率(86.36%)显著的高于CINⅠ级标本的(62.5%)、CINⅡ~Ⅲ级标本的(65.71%)及正常言颈组织标本的(23.33%)(X^2值分别为5.144、4.725、29.737,均P<0.05)。CINⅠ级标本患者的ILK表达阳性率(62.5%)、CINⅡ~Ⅲ级标本的(75.71%)均显著的高于正常宫颈组织标本(23.33%)(X^2值分别为8.472、11.675,均P<0.05)。ILK在宫颈癌组织中的表达与宫颈癌的低分化程度、发生淋巴结转移、深度的肌层浸润具有相关性(X^2值分别为5.173、4.810、4.020,均P<0.05),与年龄、FIGO分期、组织学类型无显著相关性(X^2值分别为0.275、1.991、0.129,均P>0.05)。结论 ILK在宫颈癌组织中显著的高表达,同时与宫颈癌的分化程度、发生淋巴结转移、深度的肌层浸润具有相关性。