整合素a5b1对胃癌细胞黏附、转移及耐药的影响

目的:探讨整合素a5b1 mRNA表达水平对胃癌细胞黏附、迁移、髓外浸润过程的影响.方法:采用Western blot检测法及RT-PCR分别测量HTB-103、CRL-5822、CRL-5971及CRL-5973等不同对数生长期的白细胞株整合素a5b1蛋白表达水平及整合素a5b1 mRNA水平.将不同胃癌细胞株随机分为实验组及对照组,实验组加入整合素a5b1抗体,对照组加入同型IgG,观察两组胃癌细胞与ECV304细胞系的黏附率、细胞迁移率及白细胞穿过人工基质膜的浸润能力.结果:CRL-5822、CRL-5971及CRL-5973细胞整合素a5b1 mRNA相对表达量分别为(0.0821±0.0128)、(0.185±0.0082)、(0.798±0.042)明显高于HTB-103细胞(0.0002±0.0000)(P<0.05).观察组CRL-5822、CRL-5971及CRL-5973细胞株黏附率(52.16%±2.52%、44.22%±2.59%、33.58%±4.06%)、迁移率(45.96%±1.21%、38.86%±1.99%、24.65%±3.28%)及浸润率(29.85%±4.63%、21.31%±3.24%、13.67%±3.48%)、显著低于对照组黏附率(83.89%±7.21%、71.17%±7.38%、60.89%±10.59%)、迁移率(75.41%±9.51%65.78%±14.62%,49.91%±13.47%)及浸润率(42.63%±7.69%,29.92%±5.47%,21.59%±6.72%)(P<0.05),而两组HTB-103细胞黏附率、迁移率及浸润率无统计学差异(P>0.05).结论:黏附因子整合素a5b1可能参与胃癌细胞的形成、聚集、生长及浸润的过程,其表达水平与胃癌病程进展具有密切的关系.

整合素A5调控FAK/Src/Rac1信号通路促进胃癌增殖、侵袭和黏附能力

目的探讨整合素A5(ITGA5)在胃癌(GC)中的生物学作用和潜在机制。方法2019年1月至2020年12月,从浙江省人民医院接受手术切除的胃癌患者中收集35例胃癌组织[男21例,女14例,年龄(53.8±5.4)岁]以及35例匹配的癌旁组织,从北京百欧博伟生物技术公司购买胃癌和正常胃黏膜细胞。采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫组织化学、Western印迹法检测胃癌细胞中ITGA5、细胞黏附相关基因pFAK、pSrc、aRac1的mRNA和蛋白表达情况。细胞增殖检测(CCK-8)、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、细胞黏附实验检测胃癌细胞的表型。结果与正常胃黏膜细胞比较,ITGA5在胃癌细胞中高表达(1.00±0.26与1.23±0.27,P<0.05)。并且过表达ITGA5后能够通过FAK/Src/Rac1通路促进胃癌细胞增殖,吸光度(A)值由1.14±0.14升至1.61±0.14、迁移能力由(20.3±2.3)%提升至(56.4±6.1)%、侵袭能力由144.0±4.6提升至216.7±6.6,并增强与基质蛋白的黏附能力(99.0±8.5提升至152.0±12.3)(均P<0.05)。结论ITGA5在胃癌中高表达并作为促癌因子发挥作用,为寻找胃癌潜在治疗靶点提供了理论依据。

腹腔冲洗液L3-PP和整合素α5β1检测对胃癌腹膜种植转移预测价值分析

目的:探讨检测腹腔冲洗液中L3-PP和整合素α5β1对于预测胃癌腹膜种植转移的意义。方法:收集96例胃癌患者腹腔冲洗液,用RT-PCR方法测定冲洗液中游离细胞L3-PP、整合素α5β1及CEA mRNA的表达情况,同时作冲洗液细胞学检查(PLC)。结果:腹腔冲洗液中的L3-PP、α5β1和CEA mRNA的阳性率分别为74.0%(71/96)、65.6%(63/96)和62.5%(60/96),均高于腹腔冲洗液细胞学21.9%(21/96),差异均有统计学意义,χ2值分别为52.174、37.333和32.480,P值均<0.01。L3-PP、α5β1及CEA mRNA的阳性率与肿瘤的浸润深度(χ2=7.898,P=0.046;χ2=10.692,P=0.014;χ2=7.897,P=0.048)、TNM分期(χ2=21.960,P<0.01;χ2=29.266,P<0.01;χ2=22.291,P<0.01)、腹膜转移(χ2=13.919,P<0.01;χ2=16.627,P<0.01;χ2=9.089,P<0.01)等密切相关。对CEA-组和CEA+组的生存分析发现差异均有统计学意义(Log-rank test=8.349,P=0.039;Log-rank test=10.864,P=0.012)。结论:用RT-PCR联合检测腹腔冲洗液中L3-PP和整合素α5β1mRNA可作为预测胃癌腹膜种植转移的方法,为临床医生选择合适的治疗方案提供依据。

乳腺

040674 乳腺癌患者血清her-2/meu水平及相关性研究/袁巩…∥中华肿瘤杂志.-2003,25(6).-573～574 用ELISA法检测10例正常人,31例乳腺良性病变、可手术乳癌53例及26例晚期转移性乳癌者血清中her-2/neu的水平。结果:正常人和乳腺良性病变者血清her-2/neu阳性率均为0%。53例可手术乳癌者中10例her-2/neu的水平高于正常,其水平与肿瘤大小有相关性(P<0.05),与淋巴结、受体状况无关。26例晚期转移乳癌者中16例her-2/neu阳性(61.5%),与转移部位无明显相关。认为血清her-2/neu的水平与肿瘤良、恶性、分期及瘤负荷有关,并有可能指导复发转移者的治疗。

红花口服液缓解神经病理性疼痛的分子机制

目的:考察红花口服液(HOL)缓解神经病理性疼痛(NP)的药效作用特点并探究其分子作用机制。方法:基于脊神经结扎(SNL)大鼠模型,将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,HOL低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 mL·kg^(-1)·d^(-1))及阳性药普瑞巴林组(25 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组6只。在脊神经结扎手术恢复3 d后,连续灌胃给药14 d并采集样本。期间检测各组大鼠的机械痛阈值和冷痛阈值,考察HOL的镇痛作用特点。将假手术组、模型组、HOL高剂量组的海马组织样本进行转录组测序,获取不同组别之间的差异表达基因,并进行通路富集分析,进而,选择与NP密切相关的靶标进行验证,进一步通过分子对接寻找HOL关键活性成分与靶标分子的具体结合位点。此外,检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)的表达水平,评价HOL对NP大鼠的影响。结果:与假手术组比较,模型组大鼠的机械痛阈值及冷痛阈值均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,HOL组可有效升高其机械痛阈值及冷痛阈值(P<0.05);转录组分析发现,模型组与假手术组比较共有376个差异表达基因,其中上调基因124个、下调基因252个,模型组与HOL组比较共有194个差异表达基因,其中上调基因33个、下调基因161个。其中,类胰岛素一号生长因子(IGF1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-14(MMP-14)、酪氨酸激酶受体2(ERBB2)和整合素A5(ITGA5)与NP密切相关。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠海马中上述各分子的mRNA表达量均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,HOL组可有效降低其mRNA表达量(P<0.01)。分子对接结果显示,红花主要活性成分羟基红花黄色素A、山奈酚和槲皮素与上述靶标分子IGF1、MMP-2、MMP-14、ERBB2、ITGA5的氨基酸残基形成稳定的氢键作用力。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠血清中TNF-α/IL-10表达失衡(P<0.01),与模型组比较,HOL组可显著减少促炎细胞因子TNF-α的含量(P<0.01),增加抗炎细胞因子IL-10的含量(P<0.05)。结论:HOL对SNL大鼠具有镇痛作用,其机制与抑制神经炎症密切相关。