整合蛋白信号转导研究进展

细胞外基质受体整合蛋白全方位影响细胞的形态、运动、存活和增殖。它通过介导复杂的信号通路,将细胞外信息内传,调控细胞的生命活动。本文综述了整合蛋白的活化过程、信号转导过程及其与生长因子受体信号通路相互关联研究的最新进展。

整合蛋白α5,β1亚基的过表达对肝癌细胞粘附和迁移的影响

目的 :研究整合蛋白α5 ,β1亚基的过表达与肝癌细胞粘附能力、迁移能力、集落形成能力、以及与肝癌细胞凋亡的关系。方法 :用已建立的单独转染α5 ,β1整合蛋白亚基的细胞株α5 3 772 1,β1 6 772 1和共转α5和 β1整合蛋白亚基的细胞株α5 β1 6 772 1;采用结晶紫染色法测定细胞的粘附能力、细胞的迁移能力 ;应用荧光染色法和流式细胞仪法测定细胞凋亡速度。结果 :转染后细胞与主要胞外基质蛋白 纤连蛋白的粘附分别为对照细胞的 1.39,1.34,1.7倍 ;与层粘连蛋白 (Ln)的粘附为对细胞的 1.3、2 .6、1.98倍 ;α5 ,β1整合蛋白转染株细胞在Fn上的迁移能力分别增加 1.2 2、0 .78、1.38倍。集落形成能力分别下降 38% ,35 %和 5 2 %。在无血清培养时 ,α5 ,β1整合蛋白转染株细胞的凋亡百分率分别提高 2 .4、0 .5 3、1.79倍。结论 :将α5 β1整合蛋白导入人肝癌细胞引起α5 β1整合蛋白过表达 ,可显著改变细胞的生长 ,粘附和迁移能力 ,从而导致体外集落形成能力明显下降 。

整合蛋白β1在藻蓝蛋白抑制白血病细胞系K562细胞增殖中的作用

本研究观察不同浓度藻蓝蛋白(phycocyanin)对K562细胞增殖的影响,并检测藻蓝蛋白处理后细胞表面整合蛋白β1表达和胞内黏着斑激酶(FAK)基因表达的变化,探讨整合蛋白β1在藻蓝蛋白抑制K562细胞增殖中的可能作用机制。用流式细胞术(FCM)检测藻蓝蛋白处理前后K562细胞表面整合蛋白β1表达变化;MTT法测定不同浓度藻蓝蛋白对K562细胞增殖的影响;RT-PCR检测不同浓度藻蓝蛋白对K562细胞内FAK基因表达的作用。结果表明整合蛋白β1在K562细胞上高表达;藻蓝蛋白不能改变其表达量。不同浓度藻蓝蛋白对K562细胞的增殖均有抑制作用。藻蓝蛋白可上调胞内FAK的基因表达水平,恢复整合蛋白β1介导的细胞增殖抑制信号。结论藻蓝蛋白可能通过增强细胞基质与K562细胞表面的整合蛋白β1结合,上调K562细胞内FAK基因表达水平,恢复整合蛋白β1介导的细胞增殖抑制信号而发挥抑制K562细胞增殖的作用。

米非司酮药流时整合蛋白β3和细胞间粘附分子-1在蜕膜与绒毛内的表达

为了解米非司酮与米索前列醇对早孕流产的蜕膜、绒毛中整合蛋白 (Integrin)β3和细胞间粘附分子 1 (Intercellular adhesion molecule,ICAM 1 )的影响 ,应用流式细胞定性定量分析技术测定了 1 0例采用米非司酮与米索前列醇终止早孕妇女的蜕膜与绒毛组织中整合蛋白β3和 ICAM 1水平 ,并以 1 0例负压吸引人工流产者为对照。结果显示 :蜕膜与绒毛组织整合蛋白 β3和 ICAM 1均较对照组明显降低。实验组蜕膜组织整合蛋白 β3与 ICAM 1分别为 1 9.1± 5.0 1 %和 2 0 .6 1± 6 .51 % ,对照组分别为 2 9.3 1± 5.2 6和 2 6 .6 9± 6 .1 1 ;实验组绒毛组织整合蛋白β3与 ICAM 1分别为 2 1 .3 2± 4 .3 8%和 2 0 .2 9± 6 .4 9% ,而对照组则为 3 1 .3 1± 7.85和 2 8.6 9± 7.98。结果提示整合蛋白β3及 ICAM 1可能与维持早孕有关 ,米非司酮影响蜕膜、绒毛组织中整合蛋白 β3及 ICAM 1的表达 ,可能参与药物抗早孕机制。

去整合蛋白及其抗肿瘤作用研究进展

去整合蛋白是一类分子量较小 ,由 49～ 84个氨基酸组成 ,富含半胱氨酸的生物活性因子。去整合蛋白二硫桥形成的环中含有精氨酸 -甘氨酸 -天冬氨酸 ( RGD)结构 ,能够竞争性地与整合素结合 ,从而抑制整合素参与的生理活动。去整合蛋白能够抗血小板聚集和肿瘤细胞转移 。

整合蛋白α5、β1亚基在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究整合蛋白α5、β1亚基在前列腺癌(PCa)中的表达及与病理分级和临床分期的关系。方法:采用免疫组化ABC法检测30例正常前列腺组织和30例PCa石蜡标本中整合蛋白α5、β1亚基的表达水平。结果:与正常前列腺组织相比,PCa组织整合蛋白α5、β1亚基表达减弱或消失(P<0.05)。整合蛋白α5、β1亚基表达水平随PCa的病理分级(分化程度)升高而升高,随临床TNM分期的升高而降低。结论:在正常前列腺组织中整合蛋白α5、β1亚基的表达比PCa中高,其表达水平与PCa的病理分级呈正相关关系,和临床分期呈负相关关系,整合蛋白α5、β1亚基的研究为PCa的诊断及增殖提供了一个有价值的指标。

N-糖链合成抑制剂对NIH3T3细胞粘附作用和整合蛋白表达的影响

研究了Ｎ－糖链合成抑制剂——Ｄｅｏｘｙｍａｎｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（ＤＭＭ）和衣霉素（ＴＭ）对ＮＩＨ３Ｔ３细胞粘附作用和细胞表面α５β１整合蛋白含量的影响．研究结果发现甘露糖苷酶Ⅰ抑制剂－ＤＭＭ处理ＮＩＨ３Ｔ３细胞后，３Ｈ－甘露糖（３Ｈ－Ｍａｎ）参入ＮＩＨ３Ｔ３细胞较对照细胞增加一倍，多天线复杂型糖链增加１８％，而细胞表面α５β１整合蛋白与纤连蛋白粘附能力却下降１７％，但对膜整合蛋白α５和β１亚基表达量无明显影响，提示不成熟的糖链对整合蛋白参与的细胞粘附功能有一定影响，但不影响糖蛋白运输及整合到膜上．十四糖二磷酸长萜醇合成抑制剂——ＴＭ为０．５μｇ／ｍｌ时，Ｎ－糖链合成显著抑制，３Ｈ－Ｍａｎ参入减少了５２％，细胞粘附能力下降了３７％，细胞表面膜整合蛋白α５亚基下降了２２％，而β１亚基无明显变化，提示ＴＭ的脱糖基化作用可引起α５亚基转运至细胞膜表面下降，以至影响了细胞的粘附能力．此外，脱糖整合蛋白与纤连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）的结合力下降也是原因之一．

中国长白山乌苏里蝮蛇金属蛋白酶/解整合蛋白Ussurin基因克隆和序列分析(英文)

采用Clontech链转换建库试剂盒 ,建立了中国长白山乌苏里蝮蛇毒腺cDNA文库 ,从中克隆了金属蛋白酶 解整合蛋白Ussurin ,并进行了序列分析。结果显示 ,Ussurin开框读码序列由 14 34bp组成 ,编码 4 78个氨基酸。由核苷酸顺序推导的氨基酸序列可以看出 ,Ussurin最初的翻译产物是酶原前体 ;依次含有 18氨基酸组成的信号肽 ,171氨基酸组成的酶原区和由 2 89氨基酸组成的Ussurin(2 0 0氨基酸组成的金属蛋白酶结构域、16氨基酸组成的间隔区和 73氨基酸组成的解整合蛋白结构域 )。Ussurin的金属蛋白酶结构域含有 3对二硫键 ;解整合蛋白结构域含有 6对二硫键和特征性RGD(精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 )结构。其基因序列和结构域组成与GenBank中蛇毒金属蛋白酶 解整合蛋白呈现高度同源性属于P Ⅱ。氨基酸序列blast比对发现 ,酶原区和解整链蛋白结构域呈现极高的同源性 ,而金属蛋白酶结构域却出现了极高的变异 ,推测这些变异结构区是为了适应不同的底物。

整合蛋白α_5β_1的表达与胃癌生物学行为及微血管密度的关系

目的 探讨整合蛋白α5β1和微血管密度在胃癌组织中表达的临床意义及其相互关系。方法 采用免疫组化SP法检测了 3 5例胃癌组织及其中 10例胃癌淋巴结转移灶和 8例慢性浅表性胃炎组织中整合蛋白α5β1的表达及微血管密度 (MVD)。结果 胃癌组织中整合蛋白α5β1表达水平及MVD均显著高于慢性胃炎 (t=3 .3 2 ,P<0 .0 1;t =2 .3 0 ,P<0 .0 5 ) ;胃癌原发灶中整合蛋白α5β1的表达仅与胃癌浸润深度相关 (t =2 .2 9,P<0 .0 5 ) ,而MVD则与胃癌浸润深度、淋巴结有无转移及TNM分期之间密切相关 (t =3 .0 7,P<0 .0 1;t =2 .48,P<0 .0 5 ;t=2 .94,P<0 .0 1) ;胃癌淋巴结转移灶中整合蛋白α5β1表达水平较相应的原发灶显著增高 (t =2 .45 ,P<0 .0 5 ) ;整合蛋白α5β1的表达及MVD均与胃癌组织学分级无关(t=0 .15 ,P >0 .0 5 ;t=0 .41,P >0 .0 5 ) ;胃癌组织中整合蛋白α5β1不同表达水平间MVD的差异无显著性意义 (F =1.43 ,P >0 .0 5 ) ,相关性分析显示两者无显著相关性 (r =0 .15 6,P =0 .3 7)。结论 整合蛋白α5β1在胃癌组织中的表达显著上调并与胃癌的进展有关 ,有可能成为判断胃癌侵袭和转移能力的指标及基因治疗的靶标 。

整合蛋白β1在人类卵母细胞和早期胚胎上分布的研究

目的 研究人类卵母细胞体外成熟和体外受精前后 ,以及体外受精后胚胎早期发育的不同阶段 ,整合蛋白 β1的分布规律。 方法 利用激光共聚焦显微镜和荧光标记的整合蛋白 β1抗体。 结果 在成熟人类卵母细胞、体外受精的合子以及 2细胞阶段胚胎中 ,整合蛋白 β1的分布不同于在小鼠胚胎中的分布 ,不是分布在细胞质膜的表面 ,而是集中分布在细胞核的附近 ,细胞质膜的表面分布很少。在体外培养的 4细胞和 8细胞胚胎中 ,整合蛋白 β1均匀分布在卵裂球中。发育至桑椹胚阶段 ,整合蛋白 β1的分布开始出现极性 ,到囊胚阶段 ,整合蛋白 β1的分布集中于滋养外胚层处。 结论 整合蛋白分子被普遍认为是卵母细胞上的精子受体 ,但本研究提示 ,人类精子和卵母细胞的结合 ,整合蛋白 β1的影响可能不大。而整合蛋白β1可能与雌雄原核融合。

绿色荧光蛋白(GFP)融合于人整合蛋白α_(Ⅱb)C端不影响α_(Ⅱb) β_3复合物在CHO细胞正常表达

本研究选择αⅡb作为靶蛋白观察绿色荧光蛋白(GFP)标记对αⅡbβ,复合物生物合成过程和表达的影响。 从人αⅡb表达载体p3.1-2b中经PCR扩增的αⅡb基因全长cDNA,插入表达载体pEGFP-N1中构建αⅡbGFP融合蛋 白表达载体,测序正确后利用脂质体将重组质粒与表达人整合蛋白β3亚基的真核表达质粒p3.1-3a共转染CHO 细胞,对转染后细胞用Western blot方法鉴定αⅡbGFP基因在CHO细胞中的表达并用激光共聚焦显微镜确定融合 蛋白的细胞内定位。结果表明:经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒, Western blot证明转基因CHO细胞有人αⅡbGFP基因的表达,融合蛋白细胞内定位研究显示αⅡbGFP可以由内质网 转运至高尔基体。结论:成功构建了人αⅡbGFP融合蛋白真核表达载体;GFP融合于αⅡbC端不影响αⅡbβ3复合物 在CHO细胞的正常表达。

过表达整合蛋白α5β1的SMMC7721细胞株的建立和鉴定

构建过表达整合蛋白α５β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株。方法应用分子克隆技术和基因转染建立过表达整合蛋白α５β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株，应用ＲＴ－ＰＣＲ及流式细胞术鉴定ＳＭＭＣ７７２１细胞表面整合蛋白α５β１的表达。结果获得过表达整合蛋白α５／β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株α５．３－７７２１，β１．６－７７２１，α５β１．６－７７２１细胞。结论整合蛋白α５β１基因转染后，ＳＭＭＣ７７２１细胞整合蛋白α５β１的ＲＮＡ及蛋白质表达明显提高。

高糖诱导牛视网膜微血管周细胞凋亡及与整合蛋白连接酶表达的关系

目的研究高糖培养的牛视网膜微血管周细胞的凋亡和整合蛋白连接酶(ILK)表达的变化及二者的关系。方法原代培养周细胞,用流式细胞Annexin V检测周细胞的凋亡,用免疫细胞化学和Western blot检测牛视网膜微血管周细胞ILK的表达。结果用30mmol/LD-葡萄糖培养24、48、72h后,牛视网膜微血管周细胞凋亡显著增加,分别为47.6%、58.4%和68.7%且具有时间依赖性。用5mmol/LD-葡萄糖培养72h后未见周细胞ILK表达。在30mmol/LD-葡萄糖或5μmol/LH2O2条件下培养72h后,周细胞形态发生改变,ILK表达显著增强,主要分布在细胞质;Westernblot检测发现30mmol/LD-葡萄糖培养的条件下周细胞ILK蛋白水平随时间延长显著增加。结论高糖可以诱导视网膜微血管周细胞凋亡,高糖条件下周细胞ILK过表达可能参与周细胞的损伤。

整合蛋白β1亚基过表达上调p27抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖(英文)

目的:研究整合蛋白β1亚基过表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及机制。方法:采用MTT及细胞流式测定观察整合蛋白β1亚基过表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖及细胞周期的影响。蛋白质印迹及RT-PCR检测细胞中p27的蛋白及mRNA的表达,并构建p27的RNA干扰质粒,转染整合蛋白β1亚基过表达细胞,再观察p27的表达变化对细胞增殖的影响。结果:整合蛋白β1亚基过表达可以抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,并将细胞阻滞在细胞周期的G1期。整合蛋白β1亚基过表达可以在蛋白水平上调p27的表达,但并不影响p27的mRNA水平。p27的RNA干扰质粒可明显抑制p27的表达,而且p27表达的下调可以阻止整合蛋白β1亚基过表达所引起的细胞增殖抑制。结论:整合蛋白β1亚基过表达通过上调p27抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖。

皖南尖吻蝮蛇毒中类去整合蛋白/富含半胱氨酸两结构域cDNA的克隆和表达

为了探讨出血毒金属蛋白酶结构功能关系 ,通过 RT- PCR方法 ,从皖南尖吻蝮蛇( Agkistrodon acutus)毒腺总 RNA中扩增得到编码 P- 型出血毒金属蛋白酶的完整类去整合蛋白和富含半胱氨酸两个结构域 c DNA( AA/DC) .它全长 964bp的 c DNA,开放阅读框架编码 2 1 6个氨基酸残基 ,序列比较分析表明它同来自 Bothrops jararaca的 jararhagin- C、来自 Crotalus atrox的 catrocollastatin- C有很高的同源性 .在类去整合蛋白结构域中 ,Ser- Glu- Cys- Asp( SECD)代替了去整合蛋白中相应部位的 Arg- Gly- Asp( RGD)三肽序列 .将编码区基因克隆入 p GEX- 2 T载体中 ,转化大肠杆菌 TG- 1 ,用 IPTG诱导表达 ,表达产物具有抑制胶原诱导的血小板凝集活性 ,但不抑制ADP诱导的血小板凝集 .该研究为进一步阐述蛇毒金属蛋白酶结构功能关系和药物开发奠定了基础 .

整合蛋白的结构与功能

整合蛋白的结构与功能王学铭（湖南医科大学，长沙４１００７８）关键词整合蛋白，粘附１．整合蛋白的结构整合蛋白（Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ）是细胞重要的粘连分子。纯化的整合蛋白分子在电镜下外形颇似短杆豆芽。它从质膜脂双层向细胞外侧伸展出二根突起，氨基端是呈豆瓣状...

整合蛋白与肿瘤转移

整合蛋白与肿瘤转移魏泓（综述）肿瘤转移是一个极为复杂的多步聚过程，整个过程中都涉及到瘤细胞与其它细胞、与内皮细胞及细胞外基质粘连和解粘连的问题。因此，介导瘤细胞粘连作用的细胞表面粘连分子表达及其在转移中的作用已成为目前肿瘤研究中的热点。经过多年研究，...

整合蛋白介导的信号传导研究进展

整合蛋白是一类分布广泛的细胞粘附分子。细胞表面的整合蛋白与相应的配体结合后，可将胞外信号传入脑内。此种信号传导途径涉及到多种蛋白激酶、SH2－SH3衔接蛋白、小分子量GTP酶以及磷脂酶等，其中聚焦粘附激酶的结构及其功能研究进展迅速。