肺腺癌患者癌组织人内源性逆转录病毒-H长末端重复关联蛋白2、淋巴细胞活化基因3、整合连接激酶表达情况及与临床病理特点的关系

目的 探究肺腺癌(LUAD)患者癌组织人内源性逆转录病毒-H长末端重复关联蛋白2(HHLA2)、淋巴细胞活化基因3(LAG-3)、整合连接激酶(ILK)表达情况及与临床病理特点的关系。方法 检测106例LUAD患者癌组织及癌旁组织HHLA2、LAG-3、ILK表达情况,根据3项指标在癌组织中的表达情况将所有患者分别分为HHLA2高表达组(85例)和HHLA2低表达组(21例)、LAG-3高表达组(65例)和LAG-3低表达组(41例)、ILK高表达组(78例)和ILK低表达组(28例)。收集所有患者一般资料、临床病理资料及3年生存率并进行组间比较。结果 LUAD患者癌组织中HHLA2、LAG-3、ILK高表达患者比例均高于同指标低表达患者比例,癌旁组织中上述3项指标低表达患者比例均高于同指标高表达患者比例。HHLA2高表达组年龄≥60岁、淋巴结转移患者比例均高于HHLA2低表达组;LAG-3高表达组TNMⅢ、Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移患者比例均高于LAG-3低表达组;ILK高表达组组织低分化、TNMⅢ、Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移患者比例均高于ILK低表达组(P<0.05)。HHLA2低表达组、LAG-3低表达组及ILK低表达组3年生存率均高于同指标高表达组(P<0.05)。结论 HHLA2、LAG-3、ILK在LUAD患者癌组织中大部分呈高表达,且与临床病理特点、预后存在一定关系。

整合素连接激酶(ILK)通过调控自噬影响深度烧伤创面愈合

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)在大鼠深度烧伤创面的表达变化及其对创面愈合的影响和机制。方法:10只Wistar大鼠随机分为正常组和实验组,每组5只,实验组大鼠建立背部皮肤深Ⅱ度烧伤模型,正常组大鼠不做任何处理,免疫组化染色和Western blot检测烧伤创面ILK表达;另取45只大鼠建立背部皮肤深Ⅱ度烧伤模型后随机分为对照组、阴性对照组和ILK组,每组15只,阴性对照组和ILK组大鼠创面分别注射pEGFP-C1慢病毒和pEGFP-C1-ILK慢病毒,对照组注射等量生理盐水;于1 d、7 d、10 d、14 d、21 d观察创面愈合情况,10 d时取创面组织,ELISA测定创面组织TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10表达;21 d时取创面组织,HE染色观察创面组织形态变化,免疫组化染色检测创面组织自噬标志蛋白轻链蛋白3(LC3)表达,Western blot检测自噬相关蛋白表达。结果:烧伤大鼠创面组织ILK表达较正常大鼠皮肤组织显著升高(P<0.05);ILK组大鼠创面愈合率在第7、14、21天时均显著高于对照组和阴性对照组(P<0.05);与对照组和阴性对照组比较,ILK组大鼠创面组织病变坏死程度明显降低,炎症细胞浸润减少,TNF-α、IL-1β及IL-6含量均显著降低(P<0.05),IL-10含量显著升高(P<0.05),LC3阳性表达平均光密度值显著降低(P<0.05),LC3-Ⅱ/Ⅰ显著降低(P<0.05),Beclin-1蛋白表达显著下调(P<0.05),p62蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论:ILK在深度烧伤大鼠创面组织表达增加,过表达ILK可减轻创面炎症反应,抑制自噬,促进烧伤创面愈合。

整合素连接激酶在前列腺癌组织中的表达及意义

目的: 探讨整合素连接激酶(ILK)在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。 方法: 应用免疫组化SP法测定 50例前列腺癌及 16例良性前列腺增生组织中ILK的表达。 结果: 前列腺癌组织中ILK阳性表达率46. 0%(23 /50),肿瘤病理分级:高分化组阳性表达率为9. 0% ( 1 /11 ),中分化组为35. 7% ( 5 /14 ),低分化组68. 0% ( 17 /25),随肿瘤病理分级高分化组到低分化组,阳性表达率有趋势性增高。临床分期A+B期为22. 5% (7 /31)和C+D期为84. 2% (16 /19),临床分期程度的增高,癌细胞ILK阳性表达率明显增加。良性前列腺增生组织ILK阳性表达率仅为6. 2% (1 /16),明显低于前列腺癌组织(χ2 =8. 27,P<0. 01)。 结论: ILK异常表达在前列腺癌的恶性进展中起重要作用,检测ILK的表达有帮助于判断病期及预后。

转化生长因子β1/整合素连接激酶信号通路在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素对其的干预效应

目的:研究转化生长因子β1/整合素连接激酶(transforming growth factor-beta1/integrin-linked kinase,TGF-β1/ILK)信号通路在白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation,TEMT)中的作用,并探讨大黄素是否是通过抑制TGF-β1/ILK信号通路而影响TEMT。方法:以体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)为研究对象,分为空白对照组、大黄素对照组、IL-1β诱导组、大黄素阻断组、TGF-β1Ⅰ型受体阻断剂(SB431542)阻断组、大黄素和SB431542共同阻断组、大黄素预处理组和大黄素逆转组。NRK52E细胞在上述处理因素下培养48h后,在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫组化双标法检测细胞表型标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscleactin,α-SMA)和E-钙黏连素(E-cadherin)的表达;免疫组化单染法检测NRK52E细胞TGF-β1和ILK的表达,采用图像分析软件定量分析免疫组化染色结果;酶联免疫吸附测定法测定NRK52E细胞分泌的纤维连接蛋白(fibronectin,FN)含量。结果:与空白对照组比较,IL-1β诱导TEMT的同时TGF-β1和ILK表达增加(P<0.05),大黄素可明显抑制IL-1β诱导的上述变化(P<0.05)。阻断TGF-β1信号通路后,IL-1β诱导的TEMT明显受抑,且ILK表达减少。与大黄素阻断剂组比较,大黄素预处理不能预防IL-1β诱导的TEMT,大黄素不能逆转IL-1β诱导的TEMT。相关分析显示,TGF-β1表达与α-SMA、FN、ILK表达呈正相关,与E-钙黏连素表达呈负相关。ILK表达与α-SMA、FN表达呈正相关,与E-钙黏连素表达呈负相关。结论:IL-1β通过激活TGF-β1/ILK信号通路蛋白而诱导TEMT,大黄素通过抑制TGF-β1/ILK信号通路蛋白而抑制IL-1β诱导TEMT。

整合素连接激酶在梗阻性肾病肾小管上皮细胞转分化中的作用及尿激酶对其表达调节的研究

目的研究整合素连接激酶(ILK)在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及尿激酶对其的影响。方法将雄性CD-1小鼠随机分为假手术对照组(Sham,n=20)、UUO组(UUO,n=28)和尿激酶治疗组(uPA,n=28),分别于术后1、3、7和14d处死小鼠。Masson染色观察肾间质纤维化。免疫荧光和Western印迹检测小鼠肾组织ILK的分布及表达。免疫组化检测肾组织上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)的表达。RT-PCR检测ILK、E-cadherin和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达。结果与Sham组相比,UUO组术后1d ILK mRNA及蛋白表达均增高,7d达到高峰;E-cadherin mRNA及蛋白表达明显减少,α-SMA mRNA表达显著上调。与UUO组同时间点相比,uPA治疗组ILK、α-SMA表达均被显著抑制(P<0.05);E-cadherin表达则增高(P<0.05)。结论ILK通过介导肾小管上皮细胞转分化而参与肾间质纤维化的发生发展。uPA能减轻肾小管间质纤维化,这可能与其抑制肾小管细胞ILK表达有关。

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠足细胞损伤及整合素连接激酶的影响

目的:研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦(Irb)对早期糖尿病肾病大鼠足细胞损伤及整合素连接激酶(ILK)的影响。方法:将注射链脲佐菌素(STZ)的自发性高血压大鼠(SHR)分为糖尿病肾病组(DN,n=8)和糖尿病厄贝沙坦治疗组(DN+Irb,n=9),与SHR遗传背景相同周龄和体重相当的非高血压Wistar-Kyoto大鼠作为正常对照(control,n=11)。观察生化指标变化和病理改变情况,以及Irb对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤和ILK的影响。结果:与对照组相比,DN组大鼠表现为高血糖、高血压、高血脂、胰岛素抵抗和蛋白尿;病理上出现系膜基质增生,足细胞数目减少和足细胞损伤;ILKmRNA和蛋白表达水平明显上调。Irb治疗显著降低血压和蛋白尿,抑制足细胞数目减少,减轻足细胞损伤,下调ILK的表达。结论:糖尿病大鼠早期肾脏足细胞损伤和ILK表达增加,Irb可能通过下调ILK表达而发挥足细胞保护作用。

急性心肌梗死患者血浆miRNA-423-5p与整合素连接激酶水平表达对评价近期临床预后的价值

目的急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者血浆miRNA-423-5p与整合素连接激酶水平表达对评价近期临床预后的价值。方法按照研究标准,从宝鸡市中心医院老年心脑血管病科2016年1月~2018年1月收治患者中选取160例作为研究对象,将80例急性心肌梗死患者随机编入实验组,80例稳定性心绞痛患者编入对照组,开展临床研究分析。结合抽血检查结果分析患者的心肌酶谱(LDH,AST,CK和ALT),心肌损伤(cTnI,Mb和CK-MB)指标,血浆miRNA-423-5p,利用酶联免疫法分析整合素连接激酶的表达水平,并在此基础上将实验组患者编入高表达组与低表达组,分析心室重构情况及生活质量评分。结果治疗后,血浆miRNA-423-5p相对表达量实验组(0.6±0.2)高于对照组(0.3±0.1),差异具有统计学意义(t=12.000,P<0.05);整合素连接激酶表达水平实验组(3.2±0.4)高于对照组(1.8±0.1),差异具有统计学意义(t=30.370,P<0.05);对照组心肌酶谱指标、心肌损伤指标、心室重构指标和生活质量评分均优于观察组,两组差异具有统计学意义(t=0.043~102.176,均P<0.05)。结论血浆miRNA-423-5p与整合素连接激酶均可作为急性心肌梗死近期预后监测的评估依据。

乳腺肿瘤中整合素连接激酶(ILK)的表达及临床意义

目的:检测整合素连接激酶(ILK)在乳腺良、恶性病变中的表达,旨在探讨其在乳腺癌发生和发展中的作用与意义。方法:应用免疫组化SP法检测103例乳腺良、恶性肿瘤中ILK的表达情况。结果:ILK在乳腺癌、癌前病变及良性肿瘤中的阳性表达率分别为81.4%、93.3%和66.7%,各组间有显著性差异(P<0.05),且ILK蛋白在乳腺癌组织中的表达与淋巴结转移及组织学分级有相关性(P<0.01)。结论:ILK过表达在乳腺组织恶性转化中起重要作用。

Wnt信号通路对酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的影响以及整合素连接激酶的调节作用

目的:研究Wnt信号通路对酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的影响以及整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的调节作用。方法:60只Wistar雄性大鼠,随机分为正常对照组和模型组,采用白酒辅以玉米油、吡唑混合食料灌胃的方法制备大鼠酒精性肝纤维化模型,于造模12周后,采用免疫组化法检测大鼠肝组织α-SMA、β-catenin蛋白的表达,并进一步通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠肝组织ILK mRNA的表达。结果:正常肝组织中有少量β-catenin、α-SMA蛋白和ILK mRNA的表达,模型组大鼠肝组织中β-catenin、α-SMA蛋白和ILKmRNA的表达明显升高(P<0.01)。β-catenin的表达量与α-SMA的表达呈正相关(r=0.913,P<0.01),ILK的表达量与β-catenin的表达亦呈正相关(r=0.880,P<0.01)。结论:酒精性肝纤维化发生发展过程中,Wnt信号通路在肝星状细胞活化的过程中可能发挥了重要的作用,ILK可能通过调节Wnt信号通路间接发挥了促进肝星状细胞活化的作用。

整合素连接激酶在糖尿病肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的:观察整合素连接激酶(ILK)在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞中的表达,探讨其与肾小管上皮细胞转分化(EMT)的关系。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=10)、糖尿病模型组(n=10)与糖尿病氯沙坦干预组(n=10)[氯沙坦20mg/(kg.d)];分别于第8周、第16周每组各处死5只大鼠。留取左肾行HE和Masson染色,阅片并计算肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积;免疫组织化学法检测肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)与ILK的表达。结果:与正常对照组比较,糖尿病组大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积明显增加(P<0.01),肾小管上皮细胞α-SMA,Vimentin和ILK阳性表达面积明显增加(P<0.01),ILK与α-SMA呈正相关(rs=0.621,P<0.05);氯沙坦组大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积较糖尿病组明显减弱,其肾小管上皮细胞的ILK,α-SMA与Vimentin表达均较糖尿病组明显减弱(P<0.01)。结论:糖尿病大鼠肾小管上皮细胞存在ILK高表达与EMT,二者之间可能有着重要联系;氯沙坦可下调肾小管上皮细胞ILK表达,阻抑EMT。

整合素连接激酶与缺氧状态下VEGF表达的实验研究

目的探讨缺氧状态下整合素连接激酶(ILK)的表达是否增高以及这种增高与血管内皮生长因子(VEGF)的表达上调是否相关。方法将恒河猴视网膜脉络膜血管内皮细胞(RF/6A)置于94%N2、5%CO2和1%O2的低氧环境,检测0、1、2、3、4hILK,HIF-1α和VEGF的mRNA及蛋白表达水平,进一步用LY294002抑制ILK的活性或RNA干扰抑制ILK的表达后再次检测缺氧4h上述3种因子的表达情况。结果在缺氧0hILK、HIF-1α和VEGF的mRNA及蛋白表达均较低,而缺氧1～4hILK、HIF-1α和VEGF的mRNA及蛋白表达均明显增高,但这种增高都会因为ILK的表达或活性受到抑制而被抑制。结论缺氧状态下在RF/6A细胞中ILK的表达增高,并且ILK的表达增高也会使HIF-1α和VEGF表达上调,说明ILK参与缺氧状态下RF/6A细胞VEGF的表达。

整合素连接激酶在人肾间质纤维化组织中的表达及意义

目的探讨在慢性肾脏病患者肾间质中ILK的表达和其在肾间质纤维化发生、发展中的意义。方法选择各型慢性肾脏病患者49例,按肾间质病理损伤程度对肾组织标本进行分组:正常对照组4例,轻度损伤组17例,中度损伤组16例,重度损伤组12例。用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测肾间质的ILK、TGFβ1、E-cad-herin和FN表达面积,并将ILK表达水平与患者血清肌酐(SCr)进行比较。结果肾小管上皮细胞是间质中ILK的主要来源,ILK表达量与肾小管间质病变程度呈正相关(P<0.01)。此外,ILK与TGFβ1和FN的表达量呈正相关(P均<0.01),而与E-cadherin的表达量呈负相关(P<0.01);ILK还与患者SCr升高水平呈正相关(P<0.01)。结论随着慢性肾小管间质病变程度加重,ILK的表达显著增加,因此它在肾间质纤维化形成中起重要作用。ILK作为TGFβ1的下游因子,可能通过促进肾小管上皮细胞的转分化(EMT)和细胞外基质(ECM),如FN等的合成增加,参与肾间质纤维化的发生。

膀胱移行细胞癌中整合素连接激酶的表达及意义

目的检测膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell carcinoma,BTCC)和癌旁正常膀胱组织中整合素连接激酶(ILK)蛋白和mRNA的表达,探讨其在BTCC发生、发展中的作用。方法利用免疫组织化学S-P法检测56例BTCC和30例癌旁正常膀胱组织中ILK蛋白的表达,同时运用逆转录聚合酶链反应法检测这些组织标本中ILK mRNA的表达,并与临床病理资料进行相关性分析。结果56例BTCC中,ILK蛋白阳性表达率为53.6%(30/56),ILK mRNA阳性表达率为58.9%(33/56);而30例癌旁正常膀胱组织中ILK蛋白阳性表达率为10%(3/30),ILK mRNA表达阳性率为13.3%(4/30),ILK mRNA和蛋白在癌组织和癌旁正常膀胱组织表达有显著差异(P<0.01)。临床病理资料的相关性分析显示,BTCC中,ILK mRNA和蛋白的表达分布与病理分级有相关性(P<0.05),但与临床分期无相关性(P>0.05)。结论ILK基因转录和蛋白表达可能参与BTCC的发生过程,ILK可能成为早期发现BTCC的一个肿瘤标志物和治疗BTCC的新靶点。

肾间质纤维化动物模型中整合素连接激酶及相关因子的表达

背景:在各种原因引起的进展性慢性肾脏病中,均可见到肾间质纤维化现象,其病变程度与慢性肾脏病的预后甚为密切,并可作为预测肾功能恶化的一个十分准确的指标。目的:探讨整合素连接激酶、转化生长因子β1及α-平滑肌肌动蛋白与肾间质纤维化中的关系。设计、时间及地点:随机对照动物实验,2007-03/2008-01在新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室完成。材料:成年雄性SD大鼠72只,体质量(200±12)g。方法:72只大鼠随机分为假手术组、模型组和正常对照组,每组24只。模型组大鼠建立肾间质纤维化模型,术后1,3,7,14d麻醉后处死各组大鼠,取梗阻侧肾做苏木精-伊红、PAS及Masson染色。主要观察指标:以免疫组织化学方法检测整合素连接激酶、α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1的表达;反转录-聚合酶链反应检测整合素连接激酶的mRNA表达。结果:整合素连接激酶、α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1在正常肾组织中表达量极少,但随间质病变的加重,表达量明显增加,与正常组织比差异有非常显著性意义(P<0.001)。其与间质纤维化程度呈正相关(r=0.841,0.892,0.854,P<0.001),在间质中的表达量也成正相关。结论:整合素连接激酶、α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1随着间质病变程度的加重而明显增加,说明与肾间质纤维化的形成有密切关系。

小干扰RNA靶向沉默整合素连接激酶基因对宫颈鳞状上皮细胞生物学行为的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)靶向沉默整合素连接激酶(ILK)基因对宫颈鳞状上皮细胞(H8细胞)增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响。方法设计高效的靶向沉默ILK的siRNA,构建ILK-siRNA脂质体和无关对照质粒。将H8细胞随机分为ILK基因沉默组、阴性对照组和空白组,ILK基因沉默组H8细胞转染ILK-siRNA,阴性对照组细胞转染无关对照质粒,空白组细胞不转染任何序列,转染后继续培养48 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测H8细胞中ILK mRNA相对表达量,Western blot法检测H8细胞中ILK蛋白相对表达量,四甲基偶氮唑盐法检测H8细胞活力,Transwell实验检测H8细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,免疫组织化学法检测H8细胞内Ki-67蛋白表达。结果ILK基因沉默组H8细胞中ILK mRNA和蛋白相对表达量显著低于阴性对照组和空白组(P<0.05),阴性对照组与空白组H8细胞中ILK mRNA和蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。ILK基因沉默组H8细胞活力显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组H8细胞活力比较差异无统计学意义(P>0.05)。空白组、阴性对照组和ILK基因沉默组H8细胞Ki-67蛋白阳性表达率分别为(20.01±0.31)%、(21.01±0.11)%、(12.01±0.01)%,ILK基因沉默组H8细胞Ki-67蛋白阳性表达率显著低于阴性对照组和空白组(P<0.05),阴性对照组与空白组H8细胞Ki-67蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。空白组、阴性对照组和ILK基因沉默组穿膜细胞数分别为28.13±2.44、30.24±2.15、18.52±2.25,ILK基因沉默组穿膜细胞数显著少于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组穿膜细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。空白组、阴性对照组和ILK基因沉默组H8细胞迁移率分别为(15.51±4.88)%、(15.11±5.21)%、(6.91±5.12)%,ILK基因沉默组H8细胞迁移率显著低于阴性对照组和空白组(P<0.05),阴性对照组与空白组H8细胞迁移率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论ILK参与调控宫颈鳞状上皮细胞的增殖、迁移以及侵袭,可能在宫颈癌的发生、发展中发挥重要作用;沉默ILK基因可以抑制H8细胞的增殖、迁移和侵袭能力,ILK有望成为宫颈癌靶向治疗的新靶点。

血管紧张素Ⅱ上调大鼠肾小球系膜细胞整合素连接激酶的表达

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠肾小球系膜细胞整合素连接激酶(ILK)表达的影响。方法体外分离、培养SD大鼠肾小球系膜细胞,予10-7mol/LAngⅡ刺激细胞(0、12、24、48、72h),检测各时间点细胞ILK蛋白质的表达水平;予不同水平(0、10-11、10-9、10-7、10-5mol/L)AngⅡ刺激细胞48h,检测ILK蛋白质的表达水平。采用SPSS 10.0软件进行统计学分析。结果1.分离、培养的SD大鼠肾小球系膜细胞结蛋白染色阳性;2.用10-7mol/LAngⅡ干预肾小球系膜细胞,12h后大鼠ILK的蛋白质表达水平开始升高,48h达到高峰值,0、12、24、48、72h大鼠ILK蛋白质表达水平分别为0.18±0.02、0.37±0.07、0.90±0.10、1.73±0.12、及1.72±0.13(F=166.78P<0.05);3.用不同水平(0、10-11、10-9、10-7、10-5mol/L)AngⅡ刺激细胞48h,其ILK蛋白质表达水平呈水平依赖关系,0、10-11、10-9、10-7、10-5mol/LAngⅡ刺激细胞后,ILK的蛋白质表达水平分别为0.20±0.02、0.38±0.04、0.76±0.06、1.81±0.09、2.01±0.16(F=252.12P<0.05)。结论AngⅡ上调肾小球系膜细胞整合素连接激酶的表达,提示AngⅡ-ILK途径可能在肾脏的慢性病理进程中起重要作用。

整合素连接激酶在食管鳞状细胞癌中的表达和生物信息分析

目的基于生信数据挖掘整合素连接激酶(Integrin linked kinase,ILK)参与食管鳞癌的潜在机制,探讨ILK在食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)中的表达及临床意义。方法收集2008年7月-2015年4月在新疆医科大学第一附属医院肿瘤科诊断为食管鳞癌的52例患者血液标本作为实验组。同期年龄、性别相匹配的健康体检者26例作为正常对照组。利用同位素相对和绝对定量(iTRAQ)技术筛选出参与食管鳞癌的差异蛋白,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot,WB)法验证其在食管鳞癌与正常食管上皮细胞中的表达;运用UALCAN分析食管鳞癌芯片中ILK表达与预后相关性;利用Linked Omics和Cytoscape软件获得ILK共表达基因集,并进行基因功能分类体系(Gene ontology,GO)和京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and ge-nomes,KEGG)富集分析;结合String和Cytoscape筛选出前10位的核心基因(Hub gene)并构建蛋白质-蛋白质相互作用网络图(PPI);通过GEPIA分析Hub gene mRNA水平在食管癌组织中的表达及预后关系。结果ILK在食管鳞癌患者血清中高表达(P<0.05);qRT-PCR、Western blot法结果显示,食管鳞癌TE-1和KYSE150细胞中的ILK相对表达量均显著高于正常食管上皮SHEE细胞(P<0.05);相同病理组织分化程度下,ILK高表达可显著降低食管鳞癌患者总生存期(P<0.05);Linked Omics分析获得175个共表达基因;GO分析生物学过程主要富集在金属内肽酶抑制剂活化、负调控通路受限的SMAD蛋白磷酸化等,细胞组成主要在细胞外基质、细胞骨架等,分子功能主要为整合素结合、生长因子结合等;KEGG富集在细胞外基质受体相互作用、TGFβ信号通路、黏附等。PPI分析筛选出前10位的核心基因,如FN1等,数据库分析显示有9个在食管癌中异常表达,FN1和BGN高表达与患者无病生存期减少显著相关。结论ILK参与食管鳞癌的发生、发展,ILK的高表达对食管鳞癌预后的判断具有一定的参考价值。

核糖核酸酶抑制因子与整合素连接激酶相互作用通过ILK/AKT/mTOR通路抑制膀胱癌体内外生长

背景与目的:蛋白质相互作用控制着细胞信号转导、跨膜转运、DNA合成及转录调控等生命过程,在生命活动中发挥重要作用。前期运用GST蛋白沉降技术与免疫共沉淀等已证明核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)与整合素连接激酶(intergrin-linked kinase,ILK)在体内外直接结合。该研究旨在探讨RI与ILK相互作用对ILK/AKT/m TOR通路与膀胱癌体内外生长的影响。方法:采用免疫荧光观察RI与ILK在膀胱癌EJ细胞中的共定位。采用荧光共振能量转移技术(fluorescence resonance energy transfer,FRET)验证RI与ILK的相互作用。构建过表达RI或ILK的EJ细胞系。采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测细胞中RI、ILK及ILK/AKT/m TOR通路相关蛋白的表达。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)与流式细胞术分析细胞增殖与细胞周期。构建膀胱癌裸鼠移植瘤模型,观察过表达RI或ILK对移植瘤生长的影响。采用免疫组织化学与免疫荧光分析瘤组织中RI、ILK及ILK/AKT/m TOR通路相关蛋白的表达。结果:EJ细胞中RI与ILK存在共定位的现象且RI与ILK存在相互作用。过表达RI抑制EJ细胞增殖并导致细胞周期阻滞于S期(P<0.05),阻碍膀胱癌移植瘤的生长(P<0.05),并抑制体内外ILK/AKT/m TOR通路的活化(P<0.05)。而过表达ILK促进细胞增殖与移植瘤的生长(P<0.05),促进体内外ILK/AKT/m TOR信号通路的激活(P<0.05)。结论:RI通过与ILK相互作用阻碍ILK/AKT/m TOR通路激活并抑制膀胱癌体内外的增殖生长。

高浓度葡萄糖体外对人晶状体上皮细胞整合素连接激酶表达的影响

目的:观察体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04在高浓度葡萄糖条件下细胞的增殖活性及整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的表达变化。方法:用人晶状体上皮细胞系SRA01/04,在培养液中加入不同浓度的葡萄糖溶液,使糖浓度分别为5.5mmol/L(正常对照组),15.5mmol/L,30.5mmol/L和50.5mmol/L,并设立5.5mmol/L葡萄糖+25mmol/L甘露醇组(甘露醇对照组)。细胞经过处理0,6,12,24,48,72h后,用MTT法检测晶状体上皮细胞的增殖活性,并用Western blot法检测细胞在30.5mmol/L葡萄糖处理6,12,72h后ILK蛋白表达量的变化。结果:高糖作用下晶状体上皮细胞的增殖活力高于正常对照组和甘露醇组,在30.5mmol/L组最为明显,而且随高糖暴露时间的延长,在48,72h时细胞的增殖活力增加更显著。30.5mmol/L葡萄糖作用6,72h,晶状体上皮细胞ILK蛋白的表达明显增高,分别是正常组的1.25和1.28倍,而甘露醇并不引起ILK的表达增加。结论:高浓度的葡萄糖促进人晶状体上皮细胞的增生,使细胞中ILK的表达量增加,这些变化并不依赖于高糖引起的高渗透压改变。

RNAi沉默整合素连接激酶基因表达对膀胱癌细胞BIU-87增殖的影响

为了研究整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因沉默对膀胱癌BIU-87细胞系增殖产生的影响,应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,合成了4条针对ILK的miRNA干扰载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-ILK-miR(miR-1、miR-2、miR-3、miR-4)作为实验组,另设1条为阴性对照组,分别转染膀胱癌BIU-87细胞系.经杀稻瘟菌素持续压力筛选和有限稀释法培养获得稳定转染细胞株.采用RT-PCR和Western-blot检测各组对ILK基因的抑制作用,实验组miRNA对BIU-87细胞ILK mRNA和蛋白的表达均有明显的抑制作用,以miR-3组抑制效应最强.通过流式细胞术检测发现,miR-3组细胞周期G0/G1期细胞所占比例较未转染组明显增加,而S期则明显减少(P<0.05).四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测发现,转染组细胞在体外的增殖能力较对照组明显下降(P<0.05).证明RNA干扰技术能有效抑制靶基因ILK的表达,进而抑制了膀胱癌细胞系BIU-87的增殖.