豹斑毒鹅膏菌液体培养及产物毒性的初步研究

为了找出一种较为适宜的野生豹斑毒鹅膏菌的液体培养方式,对野生豹斑毒鹅膏菌进行了液体培养工艺及其产物毒性的初步研究,并以菌丝体生物量和小鼠毒性反应为指标,通过单因素试验和正交试验,对豹斑毒鹅膏菌的液体培养条件和培养基配方进行筛选及优化。结果表明:豹斑毒鹅膏菌的最佳液体培养基为20.0%马铃薯、2.0%葡萄糖、0.3%维生素液(VB10.05%,VPP0.25%,VB60.05%,VC0.05%,甘氨酸1%,蒸馏水定容)、0.3%硝酸钠、0.1%K2HPO4、0.05%氯化钾、0.05%MgSO4.7H2O、0.001%FeSO4,以蒸馏水定容,自然pH。最佳培养条件为:选取3d菌龄的菌丝体约1cm2,接入160mL装液量的锥形瓶中,26℃、120r/min暗培养8d,其菌丝体生物量为8.93g/L,毒性亦为最佳,可在较短的时间内导致小鼠出现神经精神型、肝损害型和胃肠炎型的综合性中毒反应,但主要以神经精神型为主,并在平均中毒时间为40.3h后导致小鼠死亡。

豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对二斑叶螨的毒性研究

从5种大型真菌中筛选出对二斑叶螨有毒性的豹斑毒鹅膏菌,并将其液体培养产物离心、破碎、萃取、烘干,制成大型真菌毒素粗品粉末,用水配制成不同浓度的药液,对二斑叶螨进行防治试验。结果表明:随着豹斑毒鹅膏菌毒素粗品浓度增大,对二斑叶螨的防治效果越来越明显。当豹斑毒鹅膏菌毒素粗品浓度达到100 mg/mL时,二斑叶螨的死亡率为83.3%,效果显著。可见豹斑毒鹅膏菌的毒素粗品对二斑叶螨有比较显著的毒杀作用。

豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对黄粉虫的毒性研究

[目的]探讨豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对黄粉虫的毒性。[方法]测定了5种大型真菌子实体及毒素粗品对黄粉虫的毒杀活性,并对筛选出的豹斑毒鹅膏菌进行了致死效应研究。[结果]随着豹斑毒鹅膏菌毒素粗品浓度的增大,防治效果越来越明显。当豹斑毒鹅膏菌毒素粗品浓度为17.5mg/ml时,黄粉虫死亡率为93.3%,效果显著。[结论]豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对黄粉虫有较显著的毒杀作用。

豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对二斑叶螨的毒性试验

从5种蕈菌中筛选出对二斑叶螨有毒的豹斑毒鹅膏菌,并将其液体培养产物离心、破碎、萃取、烘干,制成大型真菌毒素粗品粉末,兑水配制成不同浓度的药液,对二斑叶螨进行毒性试验。结果表明:随着豹斑毒鹅膏菌毒素粗品浓度的增加,对二斑叶螨的防治效果越来越明显。当豹斑毒鹅膏菌毒素粗品浓度达到0.19 g/mL时,二斑叶螨的死亡率为88.33%;24 h后,LC50为0.19 g/mL,LT50为7.783 d,效果显著。说明豹斑毒鹅膏菌的毒素粗品对二斑叶螨有显著的毒杀作用。

豹斑毒鹅膏菌和褐鳞环柄菇的毒素粗品对剑水蚤的毒效研究

利用豹斑毒鹅膏菌(Amanita pantherina(DC.:Fr.)Schrmm.)和褐鳞环柄菇(Lepiota helveola Bres.)的毒素粗品对剑水蚤(Cyclops)进行毒杀试验。结果表明,豹斑毒鹅膏菌和褐鳞环柄菇的毒素粗品对剑水蚤均具有一定的毒杀作用,并表现出明显的剂量效应和时间效应。在作用时间为12 h时,豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的半致死浓度(LC50)要低于褐鳞环柄菇毒素粗品;在作用时间为48 h时,豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的LC50为0.049 mg/mL,褐鳞环柄菇毒素粗品对剑水蚤的LC50为0.038 mg/mL;在相同浓度下,豹斑毒鹅膏菌毒素粗品对剑水蚤的半致死时间(LT50)比褐鳞环柄菇毒素粗品的都要短。因此,在剑水蚤大量暴发的情况下,可选择豹斑毒鹅膏菌毒素粗品来治理;推测褐鳞环柄菇的毒性发作有一定的潜伏期,若需要较长时间的持续毒杀作用时,则可用褐鳞环柄菇毒素粗品来治理。

冠状环柄菇和豹斑毒鹅膏菌的复合毒素粗品对玉米象的毒效

为微生物杀虫剂的开发与利用提供新的理论依据,利用冠状环柄菇和豹斑毒鹅膏菌的毒素粗品复合物,研究其对玉米象的毒杀效果,测定2种毒蕈的毒素粗品及其复合物对玉米象的毒杀效果、致死浓度及致死率。结果表明,冠状环柄菇和豹斑毒鹅膏菌的毒素粗品及其复合物均具有毒杀玉米象的作用,其中,豹斑毒鹅膏菌对玉米象的毒杀效果优于冠状环柄菇。施药24h后,2种毒蕈对玉米象都有显著的毒杀效果;2种毒蕈毒素粗品的复合物短时间内加大用量,对玉米象的杀虫效果更佳。结论:冠状环柄菇与豹斑毒鹅膏菌的复合毒素粗品作为一种复合微生物杀虫剂,对玉米象有较好的防治效果。

基于“斑为阳明热毒”探析皮肤病的辨治

斑是皮肤病最常见的一种原发性皮损,部分以炎症性斑为主要皮损表现的皮肤病具有起病突然,发展迅速,病情易深重的特点,中医药治疗此类疾病可以根据病患体质,四诊合参进行辨证施治,既可有效缓解症状,又可防止病情传变,改善预后。文章从“斑为阳明热毒”理论探讨部分炎症性斑皮肤病的病因病机,并总结了肖定远教授治疗此类疾病的临证经验。肖定远教授认为,此类皮肤病病机多为阳明热毒炽盛,热迫营血,血络被灼,外溢发于肌表,从而表现为红斑,常以清热解毒凉血为治疗大法,并随症加减,疗效显著。

针灸联合健脾滋肾汤治疗系统性红斑狼疮临床观察

目的 探讨针灸联合健脾滋肾汤治疗系统性红斑狼疮的效果。方法 回顾性分析于都县中医院于2020年6月—2022年6月收治的66例系统性红斑狼疮患者,以治疗方案的不同作为分组依据,将32例采用常规西药(泼尼松+硫酸羟氯喹)治疗的患者纳入常规组,34例应用常规治疗+针灸联合健脾滋肾汤治疗的患者则归为研究组。治疗3个月后,比较两组C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)以及补体C_(3)、C_(4)水平,同时对比中医证候积分,对临床疗效开展评估。结果 治疗后,研究组CRP、ESR水平低于常规组,补体C_(3)、C_(4)水平高于常规组(P<0.05);研究组高热面赤、斑疹鲜红、肌肉关节酸痛评分均较常规组低(P<0.05)。研究组治疗总有效率为97.06%(33/34),高于常规组的81.25%(26/32)(P<0.05)。结论 针灸联合健脾滋肾汤治疗系统性红斑狼疮,可实现生化指标的改善,有助于缓解机体炎症状态,改善免疫功能,对中医证候积分的降低有重要意义,效果确切。

早期静脉注射葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒致痛大鼠行为学的影响

目的观察预先静脉注射葡萄糖酸钙溶液,对间斑寇蛛毒致痛大鼠行为学的影响;评估葡萄糖酸钙溶液对抑制间斑寇蛛毒致痛作用的疗效。方法将雄性SD大鼠80只随机分为葡萄糖酸钙治疗组与致痛组,治疗组大鼠预先尾部静脉注射葡萄糖酸钙溶液,两组大鼠随机分为5组,分别以低剂量(10μL/kg)、中低剂量(40μL/kg)、中剂量(100μL/kg)、高剂量(300μL/kg)的间斑寇蛛毒素及福尔马林(10%甲醛溶液)进行足底注射,观察记录两组大鼠注射后2、15、30min及2h缩足、舔足次数。结果 (1)中低剂量组和高剂量组的蛛毒致痛大鼠缩足次数在15min内均高于福尔马林致痛组,然而30min却低于福尔马林致痛组(P<0.05);(2)15min时致痛组及治疗组大鼠缩足次数均与毒素浓度呈显著的正相关(r2=0.597,P<0.05;r2=0.426,P<0.05);(3)葡萄糖酸钙治疗组与各毒素致痛组相比,大鼠缩足次数均减少(P<0.05)。结论间斑寇蛛毒素致痛大鼠的作用相对于福尔马林在30min内更为强烈,但是30min后则较福尔马林组有所减轻,预先静脉注射葡萄糖酸钙的方法对间斑寇蛛毒致痛有明显的镇痛作用。

钙剂对间斑寇蛛毒致痛大鼠行为学及致痛因子表达的影响

目的:观察预先注射葡萄糖酸钙、吗啡、安痛定对间斑寇蛛毒致痛大鼠行为学及致痛因子表达的影响,评估葡萄糖酸钙对抑制间斑寇蛛毒致痛作用的疗效。方法:将雄性SD大鼠120只随机分为钙剂实验组、吗啡对照组和安痛定对照组,实验组大鼠预先尾静脉注射葡萄糖酸钙溶液,吗啡和安痛定对照组大鼠分别预先皮下注射吗啡和安痛定溶液,随后三组大鼠分别足底注射4种浓度的间斑寇蛛毒素,记录三组大鼠不同时间缩足次数,并应用免疫组织化学分析大鼠脊髓致痛因子P2X3受体、P物质、CGRP的表达水平。结果:(1)当毒素浓度为10μl/kg,15 min时,吗啡的镇痛作用优于安痛定,而钙剂镇痛效果最差;1 h时,吗啡及安痛定的镇痛效果较15 min时明显,钙剂的作用更优于吗啡及安痛定(P<0.05)。毒素浓度为300μl/kg,15 min、30 min时钙剂的镇痛作用优于吗啡和安痛定(P<0.05)。(2)钙剂组大鼠脊髓背角神经元中P2X3受体的表达显著低于吗啡及安痛定组;P物质在三组实验大鼠脊髓背角神经元、神经胶质细胞的表达均为阴性;钙剂和安痛定相比于吗啡抑制CGRP表达的作用更强。结论:在不同毒素浓度和不同时间下,钙剂和吗啡、安痛定的镇痛效果各有优劣,钙剂通过抑制P2X3受体及CGRP的表达进而抑制疼痛的作用较吗啡及安痛定更强,三种镇痛药物均可抑制P物质的表达。

解毒祛斑汤对大鼠Arthus反应的影响

目的探讨解毒祛斑汤抗系统性红斑狼疮(SLE)的作用和作用机理。方法采用大鼠Arthus反应模型,在整体条件下从细胞免疫的角度进行解毒祛斑汤抗SLE的实验研究。结果解毒祛斑汤对大鼠Arthus反应有明显的抑制作用,使Arthus反应大鼠循环免疫复合物含量及血清IL-2水平明显下降。结论解毒祛斑汤可通过降低Th类细胞因子IL-2水平,从而抑制B细胞的增殖和分化,使抗体产生减少,导致血清循环免疫复合物含量减少,产生显著抑制Ⅲ型变态反应的作用,这可能是其抗SLE的作用机理之一。

间斑寇蛛毒致大鼠肾损伤的组织病理及超微结构观察

目的:观察间斑寇蛛毒对肾脏损伤的作用方式,为今后间斑寇蛛毒致肾损伤干预措施提供理论依据。方法:将雄性SD大鼠36只,随机分为对照组、(10μl/kg、40μl/kg、100μl/kg、300μl/kg)剂量毒素组,并以间斑寇蛛毒素进行足底注射,24h后处死后,对肾脏组织病理行光镜(HE、PAS、PASM、Masson染色、银染)和电镜检查。结果:①各剂量的毒素组均表现出肾小囊内出血,肾小管水肿的急性肾损伤特征。②100μl/kg、300μl/kg毒素剂量组观察到肾小囊内大量出血,部分肾单位内血球管萎缩消失,肾小管管壁正常结构消失,肾小管上皮细胞脱落,细胞核溶解消失。③各组肾单位内基膜、系膜及胶原纤维结构未观察到异常变化,无新月体的形成。④各剂量毒素组细胞超微结构均显示内皮细胞、系膜内有团块状电子致密物的沉积,肾单位内毛细血管腔阻塞。⑤100μl/kg、300μl/kg毒素剂量组观察到上皮细胞足突的消失,内质网吞噬体大量增加,滤过膜间隙增大,基膜及内皮细胞的脱落。结论:间斑寇蛛毒素可致大鼠的肾损伤,这种损伤作用是直接的,且损伤具有浓度依赖性。

一起误食豹斑毒鹅膏菌引起的食物中毒调查

目的分析西藏林芝市外来务工人员误食野生毒蘑菇引起中毒的事件,为预防类似中毒事件发生提供参考。方法对中毒事件中共同食用蘑菇家庭开展现场流行病学调查,采集样品进行形态学鉴定,用描述流行病学方法进行分析。结果此次事件共8人中毒,罹患率72.7%(8/11),均为外来务工人员;将患者家庭剩余未加工的菌类进行形态鉴别,其中一种为豹斑毒鹅膏菌。结合临床表现及流行病学调查,判定是一起误食豹斑毒鹅膏菌引起的食物中毒事件。结论做好外来务工人员食品安全宣传,重点要对林芝市常年易发生中毒事件的毒蘑菇进行图片展示。

间斑寇蛛毒致痛大鼠脊髓神经元细胞中钙离子激活的内向整流钾通道蛋白表达

目的分析不同浓度间斑寇蛛毒致痛大鼠脊髓灰质神经元细胞中钙离子激活的内向整流钾通道（IK1）的蛋白表达变化。方法选取36只雄性sD大鼠，采用分层随机抽样法分为对照组（4只）和毒素组（32只），毒素组分别于右后足趾部皮下注射10、40、100、300μl／kg间斑寇蛛粗毒液，每种浓度各8只。观察毒素组大鼠注射毒液后的缩足反应。对照组不做处理。24h后将所有大鼠断颈处死，取样第4—5腰椎脊髓样本，采用苏木精一伊红（HE）染色法观察脊髓神经元细胞结构，采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连结（SP）法观察神经元细胞中IKl蛋白的表达情况，采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测IK1 mRNA的表达水平。分析不同浓度下IK1 mRNA及蛋白表达的变化。采用Pearson相关性检验分析大鼠缩足次数与毒液浓度的相关性。结果注射间斑寇蛛毒15min后毒素组大鼠1h内的缩足次数分别为（44±16）、（64±9）、（69±19）、（91±35）次，Pearson相关性分析显示不同浓度下的1h缩足次数与毒液浓度呈正相关（F2=0．548，P〈0．05）。对照组及10、40、100、300μl／kg毒素组大鼠脊髓神经元细胞中平均IK1蛋白阳性细胞数分别为（2．0±1．0）、（5．0±2．0）、（6．0±1．0）、（6．0±2．0）、（7．0±1．0）个；各毒素组平均阳性细胞数均明显高于对照组，40、100、300μl／kg毒素组明显高于10μl／kg毒素组（均P〈0．05），40、100、300μl／kg毒素组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。对照组及10、40、100、300bd／kg毒素组大鼠脊髓中IK1 mRNA的相对表达量分别为（0．56±0．16）、（0．62±0．27）、（1．27±0．10）、（1．53±0．29）、（1．61±0．86）；各毒素组IK1 mRNA表达水平均明显高于对照组，40、100、300bd／kg毒素组明显高于10μl／kg毒素组（均P〈0．05），40、100、300μl／kg毒素组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论问斑寇蛛毒具有急性致痛作用，与毒素呈浓度依赖性；其疼痛传递机制依赖于钙离子激活的IK1 mRNA及蛋白在脊髓神经元细胞中的表达。

葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒液致痛大鼠脊髓致痛因子表达的影响

目的探讨葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒液致痛大鼠脊髓中致痛因子依赖于钙离子的钾离子通道蛋白（IK1）、降钙素基因相关肽（CGRP）、环氧合酶2（COX-2）、嘌呤能受体（P2X3）相对表达量的影响,研究葡萄糖酸钙在疼痛中的作用。方法将雄性SD大鼠80只随机分为福尔马林、10、40、100、300μL/kg毒液致痛组（40只）和钙剂治疗组（40只）,其中治疗组大鼠预先尾部静脉注射10%葡萄糖酸钙2 m L,然后两组大鼠均以5%福尔马林溶液150μL和4种剂量（10、40、100、300μL/kg）的间斑寇蛛毒液进行足底皮下注射,24 h后处死后,取L4~5脊髓标本,采用免疫组化、Western blot和荧光实时定量PCR技术分别从组织学、蛋白以及分子水平分析两组P2X3、CGRP、COX-2和IK1相对表达量。结果 （1）免疫组化结果显示300μL/kg毒液剂量时,治疗组P2X3和CGRP的表达显著低于致痛组,差异具有统计学意义（P〈0.05）,COX-2和IK1的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。（2）Western blotting结果显示,与致痛组各剂量相比,10μL/kg剂量治疗组大鼠脊髓中P2X3和IK1表达量明显升高,CGRP和COX-2表达量降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;40μL/kg剂量治疗组COX-2表达量降低,CGRP、P2X3和IK1的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;100μL/kg剂量治疗组P2X3、CGRP和IK1表达量明显降低,COX-2的表达量升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;300μL/kg剂量治疗组大鼠脊髓中P2X3、CGRP、COX-2、IK1表达量明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。（3）荧光实时定量PCR结果显示：10μL/kg治疗组大鼠脊髓中P2X3和CGRP mRNA的表达高于致痛组,COX-2和IK1 mRNA的表达低于致痛组,差异有统计学意义（P〈0.05）;40μL/kg治疗组P2X3和IK1 mRNA的表达高于致痛组,CGRP mRNA的表达低于致痛组,差异有统计学意义（P〈0.05）,COX-2 mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;100μL/kg治疗组P2X3、CGRP、和COX-2mRNA的表达均高于致痛组,IK1 mRNA的表达低于致痛组,差异有统计学意义（P〈0.05）;300μL/kg治疗组P2X3、CGRP、COX-2和IK1 mRNA的表达均高于致痛组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。各致痛组间P2X3、CGRP、COX-2和IK1 mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）。（4）3种方法结果显示福尔马林致痛组与治疗组致痛因子的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论新疆间斑寇蛛毒的致痛机制可能与大鼠脊髓中致痛因子CGRP、P2X3、COX-2和IK1蛋白的高表达有关,葡萄糖酸钙能显著抑制部分高浓度毒素组致痛因子CGRP、P2X3、COX-2和IK1蛋白的表达量,缓解疼痛的传递。

几种药品抗圆斑蝰蛇毒作用的比较

目的探讨几种药品抗圆斑蝰蛇毒的作用。方法将蝰蛇毒造模后的小鼠随机分组,给予美兰、葛根素、葛根总黄酮和生理盐水于小鼠皮下注射,观察24 h内各组动物各个时间段内的局部症状以及呼吸、食欲、活动等全身症状,以动物的死亡数累计各组的实验结果。结果美兰在规定的4 h内对小鼠的保护率高于葛根总黄酮与葛根素。结论美兰有较强的抗蝰蛇毒作用。

新型抗蝰蛇毒血清对不同蝰蛇毒作用的实验研究

目的 探讨新型抗蝰蛇毒血清对国产圆斑蝰蛇毒及缅甸蝰蛇毒的作用 .方法 采用免疫电泳、SDS -聚丙烯酰胺电泳及动物实验等方法 .结果 国产圆斑蝰蛇毒的LD50 (腹腔注射 )为 0 .3 0 6± 0 .0 0 3mg/kg ,缅甸蝰蛇毒的LD50 (腹腔注射 )为 0 .2 90± 0 .0 0 3mg/kg .免疫电泳结果表明国产圆斑蝰蛇毒和缅甸蝰蛇毒均和新型抗蝰蛇毒血清产生明显的免疫沉淀线 .体外中和实验表明抗蝰蛇毒血清对国产圆斑蝰蛇毒的中和抗体效价为 2 75 0 μg/ml(约45 0LD50 ) ,对缅甸蝰蛇毒的中和抗体效价为 2 490 μg/ml(约 43 0LD50 ) .体内保护实验表明给予 0 .0 5ml抗蝰蛇毒血清可抵御 2 5 4μg(约41 5LD50 )国产圆斑蝰蛇毒或 116μg(约 2 0LD50 )缅甸蝰蛇毒的攻击 ,使小鼠全部存活 .结论 新型抗蝰蛇毒血清对国产圆斑蝰蛇毒及缅甸蝰蛇毒的中和抗体效价均较高 ,有较大的应用价值 .