批量斑点免疫渗滤法检测血清HBsAg

批量斑点免疫渗滤法检测血清ＨＢｓＡｇ徐兵朱忠勇（南京军医福州总医院实验科，福州３５０００１）关键词斑点免疫渗滤法ＨＢｓＡｇ斑点免疫渗滤法一般采用单个渗滤盒式〔１，２〕，制作繁琐，不适于批量检测。现将已多点包被（点样）ＨＢｓＡｇ的硝酸纤维素膜（ＮＣＭ）...

牛传染性鼻气管炎抗体的纳米胶体金斑点免疫渗滤法检测

将无血清细胞培养的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗原包被于硝酸纤维素膜,加入待检血清样品后,利用纳米胶体金标记的山羊抗牛IgG显色,建立了检测IBR抗体的纳米胶体金斑点免疫渗滤法检测试纸盒。整个试验过程仅需5min即可判断结果,与蓝舌病、牛赤羽病、牛地方流行性白血病、牛病毒性腹泻黏膜病、猪瘟、猪伪狂犬病和猪细小病毒病的阳性血清不发生交叉反应。将该法与用于IBR抗体检测的ELISA方法同时对300份临床牛血清样品进行IBR抗体检测,结果二者的阳性符合率达94.4%。结果表明,该法具有特异、敏感、快速可靠、效果直观、结果容易判断的特点,非常适用于IBR的早期诊断和流行病学调查。

斑点免疫渗滤法检测结核杆菌抗体试剂盒的研制

介绍斑点免疫渗滤法检测结核杆菌抗体（ＴＢＡｂ）试剂盒的研制方法。该法是以酶联免疫吸附试验原理和亲和层析原理为基础，采用硝酸纤维素薄膜（ＮＣ膜）作为固相载体而建立一种简便（三步）、快速（５～１０ｍｉｎ）、特异性强、灵敏度高（ｎｇ水平）的新方法。该法的逐步完善将在流行病学调查和临床医学检查中得到广泛应用。

斑点免疫渗滤法检测HBsAg和HBsAb试剂盒的研制

本文介绍斑点免疫渗滤法检测 HBsAg 和 HBsAb 试剂盒的研制方法。该法是以酶联免疫吸附试验原理和亲和层析原理为基础,采用硝酸纤维索薄膜(NC 膜)作为固相载体而建立的一种简便(三步)、快速(5～10 min)、特异性强、灵敏度高(ng 水平)的新方法。该法的逐步完善将在流行病学调查和临床医学检查中得到广泛应用。

应用斑点免疫金渗滤法检测旋毛虫病患者血清IgG

目的 研究应用斑点免疫金渗滤法 (DIGFA)快速检测旋毛虫病患者血清抗旋毛虫IgG抗体。 方法 采用旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原 ,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体 ,以颜色深浅为判断阳性标准。 结果 纯化的旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原与患者血清中特异性抗旋毛虫IgG抗体通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应 ,1 0min内即可直接观察结果。在 76份患者血清的检测中 ,阳性率为 94 .74 % ,与ELISA法的检出阳性率 86 .84 %相比差异无显著性 ( χ2 =2 .83,P >0 .0 5)。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。

斑点金免疫渗滤法在检测囊虫抗体中的应用

目的 将斑点金免疫渗滤法用于检测囊虫抗体 ,以制备囊虫病诊断试剂盒。方法 经透析的猪囊尾蚴囊液作为检验抗原 ,对 71份囊虫病患者、90份正常人和 2 0份其他病患者血清进行了斑点金免疫渗滤法检测并与酶联免疫吸附法比较。结果 斑点金免疫渗滤法的敏感性为 90 .1% (6 4 / 71) ,特异性为 95 .6 % (86 / 90 ) ,其他病患者血清反应中仅 1例脑肿瘤患者血清阳性 ,其余为阴性。斑点金免疫渗滤法和酶联免疫吸附法的符合率为94 .4 % (15 2 / 16 1)。

斑点免疫金渗滤法同时检测猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征抗体的研究

在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征单重斑点免疫金渗滤法的基础上,建立能同时检测HC和PRRS的双重斑点免疫金渗滤法。将提纯的HC和PRRS抗原同时包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,当猪血清中含有HC、PRRS抗体时,则相应的点会显现红色(呈红色斑点),结果易于判断。且操作简单,耗时短,与猪细小病毒、口蹄疫和猪伪狂犬病毒阳性血清不发生交叉反应。

斑点金免疫渗滤法检测血清抗精子抗体

目的建立检测血清抗精子抗体的斑点金免疫渗滤法 (dot im munogold filtration assay,DIGFA)。方法 采用经 Sephadex G- 75 -抗人全血清柱亲和层析纯化的人精子抗原和胶体金标记的 SPA,根据免疫渗滤原理 ,建立抗精子抗体(ASAb)的斑点金免疫渗滤法检测法。结果 纯化的人精子抗原具有较好的特异性 ;斑点金免疫渗滤法与 EL ISA法比较 ,符合率为 97.7%。特异性为 96 .2 % (TN/ TN+ FP× 10 0 % ) ,敏感性为 88.9% (TP/ TP+ FN× 10 0 % ) ,阳性预测值 84.2 % (TP/TP+ FP) ,阴性预测值 97.2 % (TN/ TN+ FN) .结论 斑点金免疫渗滤法方法检测血清抗精子抗体有较好的特异性和敏感性 ,重复性好 ,试剂稳定 ,操作简便快速 。

斑点金免疫渗滤法快速检测禽肉中金霉素残留

研究斑点金免疫渗滤法快速检测禽肉中金霉素残留,将制备的金霉素多克隆抗体点在硝酸纤维素膜上,用以竞争捕获胶体金标记的金霉素-牛血清白蛋白结合物和样品中的游离金霉素,通过可见的颜色深浅判断结果。结果表明,本方法的检测限为0.4μg/ml,在金霉素浓度为0.6～1μg/ml范围内可实现定量分析。结果与酶联免疫方法的测定结果一致(相关系数r为0.970)。该法可应用于禽肉中金霉素残留的快速检测。

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记SPA,建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色,阳性者出现红色斑点,结果易于判断。整个试验过程仅需5min,操作简单,与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot-ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较,符合率达98.4％和98.9％。说明该法微量、特异、敏感可靠,检测时间短,效果直观,非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。

斑点金免疫渗滤法快速诊断布鲁杆菌病的研究

目的建立一种布鲁杆菌病快速免疫诊断方法。方法以硝酸纤维素膜为载体,胶体金标记蛋白为显示剂,通过最佳实验条件的选择及稳定性、重现性、敏感性、特异性和交叉反应试验,建立斑点金免疫渗滤法(DIGFA)快速检测布鲁杆菌病。结果 DIGFA快速检测布鲁杆菌病具有很好的重现性和稳定性;敏感性、特异性分别达到98％和100％;未发现与肺结核患者、乙肝患者及幽门螺杆菌感染者血清有交叉反应。结论 DIGFA快速检测布鲁杆菌病快速、简便,测试过程1-2 min内完成,试剂敏感、特异、稳定,非常适合布鲁杆菌病的诊断及流行病学调查。

斑点免疫金渗滤法定量测定血清淀粉样蛋白A方法的建立及性能评估

目的建立斑点免疫金渗滤法(DIGFA)定量测定血清淀粉样蛋白A(SAA)并评估其分析性能。方法选用2株商品化抗SAA单克隆抗体,分别结合于硝酸纤维素膜和胶体金,制备免疫金渗滤试剂板条(SAADOT)以定量检测SAA。按照EP文件,评估SAA-DOT的分析性能(检测限、精密度、准确性、线性范围等)。结果SAA-DOT最低检测限为5 mg/L;10和100 mg/L的批内变异系数(CV)分别为9.07%和10.21%,天间CV分别为11.33%和11.53%;线性范围为5～230 mg/L;SAA-DOT的测定结果与商品化乳胶增强速率散射比浊法(LERN)试剂具有良好的相关性(r=0.995,P<0.05)。表观健康者血清SAA浓度中位数为5.7 mg/L,95%可信区间为0～9.6 mg/L。结论基于DIGFA的SAA-DOT简便、快速,能在5 min内完成检测,各项分析性能指标达到国家食品药品监督管理局(SFDA)对体外诊断试剂的要求,可用于临床患者血清标本的检测。

快速斑点免疫金渗滤法检测血清中囊虫抗体的研究

为建立一种快速敏感、适于基层应用的检测囊虫抗体的方法 ,将囊尾蚴抗原点于硝酸纤维素膜 (NC)上 ,用来检测血清中囊虫抗体 ,通过胶体金标记的金黄色萄萄球菌A蛋白(SPA)直接显色 ,阳性者出现红色斑点 ,结果易于判断。结果表明 ,整个试验过程仅需 5分钟 ,操作简单 ,用该法与酶联免疫吸附试验对比检测 5 7份囊虫患者血清标本 ,2法均阳性为 5 4份 ,2法均阴性为 1份 ,总符合率为 95 %。结果提示斑点免疫金渗滤法简便、快速、适于基层应用 。

斑点金标免疫渗滤法诊断家畜血吸虫病的敏感性和特异性

研制成家畜血吸虫病斑点金标免疫渗滤法（DIGFA）诊断试剂盒可测出人工感染血吸虫14—42d的病牛、猪和兔的血清及血纸抗体，比病原体检查法提早28d查出病畜，达到早期诊断的要求；同时亦能检出仅感染1对血吸虫病牛抗体，证实DIGFA具有较高的敏感性。血吸虫与肝片吸虫、锥虫、蛔虫、囊虫和旋毛虫病之间未见交叉反应现象，说明本法具有较强的特异性。

金标抗rSjc26GST多克隆抗体斑点免疫金渗滤法检测血吸虫循环抗原的研究

目的 探索一种简捷的检测血吸虫循环抗原的方法。方法 应用抗日本血吸虫重组谷胱甘肽 - S-转移酶 (r Sjc2 6 GST)的多克隆抗体标记胶体金 ,建立检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的双抗体夹心斑点免疫金渗滤法 (S- DIGFA) ,并以 S- EL ISA作对比。结果 用 S- DIGFA和 S- EL ISA平行检测 95例慢性血吸虫病患者 ,阳性检出率分别为 81.0 5 %和 82 .11% ;正常人血清 180份 ,两者的假阳性率分别为 6 .6 7%和 7.78%。结论 经统计分析证明 S- DIGFA的敏感性和特异性与 S-EL ISA相近 ,且方法更简便快速 ,适合于基层应用。并表明 r Sjc2 6 GST抗原具有诊断血吸虫病的应用价值。

用快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSA抗体

目的建立一种简便、快速、可靠的检测抗SSA抗体的方法。方法将重组的SSA抗原包被于硝酸纤维素(NC)膜上,以胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(StaphylococusproteinA,SPA)作为显示剂,建立一种检测抗SSA抗体的快速斑点免疫金渗滤法(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)。结果本法对系统性红斑狼疮(SLE)阳性率为100%,对皮肌炎(DM)阳性率为100%,狼疮性肾炎(LN)阳性率为75%,本法与免疫印迹法(IBT)的符合率为94.1%。IBT法阴性的50例病人中,本法检出3例阳性病例(其ANA均为阳性);健康体检50例均为阴性。结论本法简便、快速、可靠,整个检测过程只需2min,不需其他特殊设备。

斑点免疫金渗滤法检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色,阳性者出现红色斑点,整个试验过程仅需5min即可判断结果;与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病阳性血清不发生交叉反应;纯化PRRSV抗原的最低检测量为0.0553mg mL,即55.3ng 点。对200份猪血清用该法与ELISA同时进行PRRS抗体检测,两种方法的符合率达98%。

国内斑点免疫金胶体渗滤法检测结核抗体诊断结核病的文献质量评价

目的评价国内斑点免疫金胶体渗滤法检测结核抗体诊断结核病的文献质量。方法计算机检索中国生物医学文献数据库(CBM,1978～2006)和中文科技期刊全文数据库(VIP,1994～2006),纳入斑点免疫金胶体渗滤法检测结核抗体诊断结核病的所有诊断性研究文献,按QUADAS质量评价标准评估,由两位研究者独立进行文献质量评估。若遇分歧,讨论解决。结果共检索到38篇相关文献,质量评价结果显示,大多数文献与QUADAS质量评价标准的符合率不高。多数文献采用回顾性病例对照研究设计,其中31篇未清楚描述研究对象的选择标准,18篇不能确定是否所有研究对象均经金标准核实,36篇不清楚诊断试验结果的解释是否采用盲法,37篇未描述是否有难以解释的结果,34篇未描述是否有退出病例。结论国内斑点免疫金胶体渗滤法检测结核抗体诊断结核病的诊断性研究质量还有待提高。