快速斑点免疫金染色法与二种免疫金银染色法检测抗囊尾蚴抗体的比较研究

目的 建立敏感性高、特异性强 ,方法简便和经济实用的快速诊断囊尾蚴病的免疫学检测方法。方法将猪囊尾蚴液抗原点加于微孔滤膜 ,经预作用和封闭后 ,依次加入待检血清和金标记二抗 ,建立快速斑点免疫金染色法 (F -Dot-IGS)以检测囊尾蚴病患者血清抗体 ,同时用快速微量斑点免疫金银染色法 (RMDot-IGSS)和斑点免疫金银染色法 (Dot-IGSS)检测作为对照。结果 检测 4 0例囊尾蚴病患者血清抗体 ,阳性率 10 0 % ;检测 4 0例健康人血清均为阴性 ;除包虫病患者外 ,10例肝吸虫病患者、10例血吸虫病患者和 10例肺吸虫病患者血清未见交叉反应。结论 F -Dot-IGS敏感特异 ,快速简便 ,有较高的实用价值 。

应用斑点免疫金渗滤法检测旋毛虫病患者血清IgG

目的 研究应用斑点免疫金渗滤法 (DIGFA)快速检测旋毛虫病患者血清抗旋毛虫IgG抗体。 方法 采用旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原 ,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体 ,以颜色深浅为判断阳性标准。 结果 纯化的旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原与患者血清中特异性抗旋毛虫IgG抗体通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应 ,1 0min内即可直接观察结果。在 76份患者血清的检测中 ,阳性率为 94 .74 % ,与ELISA法的检出阳性率 86 .84 %相比差异无显著性 ( χ2 =2 .83,P >0 .0 5)。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。

斑点免疫金渗滤法同时检测猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征抗体的研究

在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征单重斑点免疫金渗滤法的基础上,建立能同时检测HC和PRRS的双重斑点免疫金渗滤法。将提纯的HC和PRRS抗原同时包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,当猪血清中含有HC、PRRS抗体时,则相应的点会显现红色(呈红色斑点),结果易于判断。且操作简单,耗时短,与猪细小病毒、口蹄疫和猪伪狂犬病毒阳性血清不发生交叉反应。

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记SPA,建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色,阳性者出现红色斑点,结果易于判断。整个试验过程仅需5min,操作简单,与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot-ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较,符合率达98.4％和98.9％。说明该法微量、特异、敏感可靠,检测时间短,效果直观,非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。

斑点免疫金渗滤法检测鸭肝炎病毒的研究

用胶体金标记提纯后的兔抗鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）ＩｇＧ，建立了一种以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金为标记物的检测ＤＨＶ的斑点免疫金渗滤法（ＤＩＧＦＡ），并确定了最佳试验条件。该法既可定性，亦可定量，对纯化ＤＨＶ的最小检测量为４．１２ｎｇ／点，其敏感性为抗原斑点试验（ＡＳＴ）的２倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＤＩＧＦＡ检测ＤＨＶ具有较高的特异性。对ＤＨＶ鸡胚尿囊液ＤＩＧＦＡ法检出率为１００％。ＤＩＧＦＡ和ＡＳＴ法对３６份临床样本检测阳性率分别为８３．３％和７５％，其阳性符合率为８６．７％。随机抽样的６份ＤＩＧＦＡ阳性肝脏样本经人工发病试验后电镜检查，均发现大量直径３０～４０ｎｍ的病毒粒子。实验结果表明，ＤＩＧＦＡ法是一种微量、敏感、特异、快速、简便的检测ＤＨＶ方法。

斑点免疫金渗滤法定量测定血清淀粉样蛋白A方法的建立及性能评估

目的建立斑点免疫金渗滤法(DIGFA)定量测定血清淀粉样蛋白A(SAA)并评估其分析性能。方法选用2株商品化抗SAA单克隆抗体,分别结合于硝酸纤维素膜和胶体金,制备免疫金渗滤试剂板条(SAADOT)以定量检测SAA。按照EP文件,评估SAA-DOT的分析性能(检测限、精密度、准确性、线性范围等)。结果SAA-DOT最低检测限为5 mg/L;10和100 mg/L的批内变异系数(CV)分别为9.07%和10.21%,天间CV分别为11.33%和11.53%;线性范围为5～230 mg/L;SAA-DOT的测定结果与商品化乳胶增强速率散射比浊法(LERN)试剂具有良好的相关性(r=0.995,P<0.05)。表观健康者血清SAA浓度中位数为5.7 mg/L,95%可信区间为0～9.6 mg/L。结论基于DIGFA的SAA-DOT简便、快速,能在5 min内完成检测,各项分析性能指标达到国家食品药品监督管理局(SFDA)对体外诊断试剂的要求,可用于临床患者血清标本的检测。

快速斑点免疫金渗滤法检测血清中囊虫抗体的研究

为建立一种快速敏感、适于基层应用的检测囊虫抗体的方法 ,将囊尾蚴抗原点于硝酸纤维素膜 (NC)上 ,用来检测血清中囊虫抗体 ,通过胶体金标记的金黄色萄萄球菌A蛋白(SPA)直接显色 ,阳性者出现红色斑点 ,结果易于判断。结果表明 ,整个试验过程仅需 5分钟 ,操作简单 ,用该法与酶联免疫吸附试验对比检测 5 7份囊虫患者血清标本 ,2法均阳性为 5 4份 ,2法均阴性为 1份 ,总符合率为 95 %。结果提示斑点免疫金渗滤法简便、快速、适于基层应用 。

斑点免疫金渗滤试验检测淋球菌抗原的应用研究

目的 :建立一种简易快速的斑点免疫金渗滤试验 (DIGFA)用于检测淋球菌抗原。方法 :用抗淋球菌单克隆抗体为包被抗体 ,以胶体金标记兔抗淋球菌IgG作探针 ,制成DIGFA反应盒。结果 :该反应盒特异性强 ,与脑膜炎球菌、葡萄球菌、肺炎球菌、大肠杆菌等无交叉反应 ,淋球菌抗原最低检出量为 63 .0 0ng/ml。经 5 1例临床分离株测定 ,敏感性为 98.0 4% ,特异性 1 0 0 %。 结论 :检测淋球菌抗原的DIGFA是一种简易快速、敏感、特异的方法。

国内斑点免疫金胶体渗滤法检测结核抗体诊断结核病的文献质量评价

目的评价国内斑点免疫金胶体渗滤法检测结核抗体诊断结核病的文献质量。方法计算机检索中国生物医学文献数据库(CBM,1978～2006)和中文科技期刊全文数据库(VIP,1994～2006),纳入斑点免疫金胶体渗滤法检测结核抗体诊断结核病的所有诊断性研究文献,按QUADAS质量评价标准评估,由两位研究者独立进行文献质量评估。若遇分歧,讨论解决。结果共检索到38篇相关文献,质量评价结果显示,大多数文献与QUADAS质量评价标准的符合率不高。多数文献采用回顾性病例对照研究设计,其中31篇未清楚描述研究对象的选择标准,18篇不能确定是否所有研究对象均经金标准核实,36篇不清楚诊断试验结果的解释是否采用盲法,37篇未描述是否有难以解释的结果,34篇未描述是否有退出病例。结论国内斑点免疫金胶体渗滤法检测结核抗体诊断结核病的诊断性研究质量还有待提高。

用快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSA抗体

目的建立一种简便、快速、可靠的检测抗SSA抗体的方法。方法将重组的SSA抗原包被于硝酸纤维素(NC)膜上,以胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(StaphylococusproteinA,SPA)作为显示剂,建立一种检测抗SSA抗体的快速斑点免疫金渗滤法(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)。结果本法对系统性红斑狼疮(SLE)阳性率为100%,对皮肌炎(DM)阳性率为100%,狼疮性肾炎(LN)阳性率为75%,本法与免疫印迹法(IBT)的符合率为94.1%。IBT法阴性的50例病人中,本法检出3例阳性病例(其ANA均为阳性);健康体检50例均为阴性。结论本法简便、快速、可靠,整个检测过程只需2min,不需其他特殊设备。

金标抗rSjc26GST多克隆抗体斑点免疫金渗滤法检测血吸虫循环抗原的研究

目的 探索一种简捷的检测血吸虫循环抗原的方法。方法 应用抗日本血吸虫重组谷胱甘肽 - S-转移酶 (r Sjc2 6 GST)的多克隆抗体标记胶体金 ,建立检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的双抗体夹心斑点免疫金渗滤法 (S- DIGFA) ,并以 S- EL ISA作对比。结果 用 S- DIGFA和 S- EL ISA平行检测 95例慢性血吸虫病患者 ,阳性检出率分别为 81.0 5 %和 82 .11% ;正常人血清 180份 ,两者的假阳性率分别为 6 .6 7%和 7.78%。结论 经统计分析证明 S- DIGFA的敏感性和特异性与 S-EL ISA相近 ,且方法更简便快速 ,适合于基层应用。并表明 r Sjc2 6 GST抗原具有诊断血吸虫病的应用价值。

斑点免疫金渗滤法检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色,阳性者出现红色斑点,整个试验过程仅需5min即可判断结果;与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病阳性血清不发生交叉反应;纯化PRRSV抗原的最低检测量为0.0553mg mL,即55.3ng 点。对200份猪血清用该法与ELISA同时进行PRRS抗体检测,两种方法的符合率达98%。

斑点免疫金渗滤技术检测抗精子抗体的实验研究

抗精子抗体是由于精子或精浆中的抗原类物质刺激机体通过同种免疫或自身免疫而产生,包括Ig A、Ig G、Ig M、Ig E等类型,抗精子抗体可抑制精子活动、干扰精子的获能等多个环节,导致不孕不育的发生[1]。近年来,免疫性因素导致的不孕不育已经成为困扰适龄生育人群的重要问题[2]。有资料估计,临床上大约20%的不孕不育是由于免疫性因素导致的,其中抗精子抗体阳性导致的免疫性不孕被认为是导致不孕不育的重要原因之一[3]。

斑点免疫金渗滤法检测赤羽病抗体的研究

以亲和层析原理为基础,将提纯的AKAV抗原包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,建立了斑点免疫金渗滤法诊断赤羽病抗体的方法。其中最佳点样抗原质量浓度是0.099mg/mL,封闭液选择含1%BSA,0.5%Tween-20的0.01mol/LpH7.2的PBS缓冲液,SPA胶体金最佳稀释度为1∶4。特异性试验表明,该方法特异性好,与牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎、牛白血病、口蹄疫、蓝舌病等阳性血清不发生交叉反应。将DIGFA与ELISA进行对比,差异不显著。研究结果表明,该方法操作简单,结果易于判断,适用于赤羽病的临床诊断和流行病学调查。

斑点免疫金渗滤试验、生物素-链霉亲和素一步法与培养法检测淋球菌抗原的对比

目的 探讨斑点免疫金渗滤试验 (DIGFA)、生物素 链霉亲和素一步法及培养法检测淋球菌抗原的优缺点。方法 同时用DIGFA、生物素 链霉亲和素一步法及培养法检测临床疑诊淋病患者 110例泌尿生殖道标本中的淋球菌抗原 ,并相互比较。结果 DIGFA和生物素 链霉亲和素一步法的敏感性、特异性分别为 97.53 %、92 .85%和 96.2 9%、89.2 8%。配对计数资料 χ2 检验 ,两法分别与培养法比较差异均无显著性 (P >0 .0 5)。结论 检测淋球菌抗原的DIG FA、生物素 链霉亲和素一步法是一种简易、快速、敏感。

斑点免疫金渗滤法诊断猪蛔虫病

[目的]探讨斑点免疫金渗滤法诊断猪蛔虫病的可行性,为制备诊断猪蛔虫病试剂盒提供参考依据。[方法]采用猪蛔虫的重组蛋白AS16抗原和胶体金标记葡萄球菌蛋白A(SPA),根据免疫渗滤原理,建立抗猪蛔虫抗体的斑点金免疫渗滤检测法。[结果]斑点免疫金渗滤法检测1200份猪血清样本中猪蛔虫抗体,检出阳性率为25.00%,而琼脂扩散试验(AGP)阳性检出率为15.00%。[结论]斑点金免疫渗滤检测法具有操作简便,灵敏度高,特异性强的优点,可用于猪蛔虫病的快速检测。

快速斑点免疫金染色法检测抗日本血吸虫抗体方法的建立与初步应用

目的 建立简便、经济和敏感、特异的快速免疫学诊断方法。方法 将日本血吸虫可溶性虫卵抗原点加于混合纤维素酯微孔滤膜 ,以快速斑点免疫金染色法 (F -Dot-IGS)检测日本血吸虫病患者血清抗体。结果 初步结果显示 ,共检测 5 5例日本血吸虫病患者血清抗体 ,阳性率 10 0 % ;检测 4 0例义务献血员血清均为阴性 ;5 0例肝吸虫病患者血清 ,1例出现阳性反应 ,交叉反应率为 2 0 % ;10例肺吸虫病人血清未见交叉反应。结论 本法快速 ,更为简便、经济 ,有较高的敏感性和特异性 ,适于基层。

血清甲状腺球蛋白抗体的斑点免疫金渗滤法

血清甲状腺球蛋白抗体的斑点免疫金渗滤法冯修高唐玉钗朱忠勇叶大付杨丽珠①李珍儿＊兰小鹏黄俏佳（南京军区福州总医院全军医学检验中心，福州３５０００１）关键词斑点免疫金渗滤法抗体甲状腺球蛋白血清甲状腺球蛋白抗体（ＴｇＡｂ）的检测，对自身免疫性甲状腺疾病的诊...

斑点免疫金渗滤法检测抗乳铁蛋白多克隆抗体特异性研究

采用斑点免疫金渗滤法对抗乳铁蛋白多克隆抗体特异性进行检测。结果表明金探针具有很强的选择性,斑点免疫金渗滤法能准确快速地检测出多克隆抗体的特异性。

斑点免疫金测定法检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

本文通过制备胶体金标记提纯后的兔抗IBV IgG,从而建立一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为环记物,检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的斑点免疫金测定法(DIGFA)。该法对IBV的最小检测量为O.203μg,与鸡胚培养测定法比较,在10份自然病例样品中DIGFA法检出8份,检出率为80%,而鸡胚培养测定法以盲传3～5代,出现侏儒胚者为阳性,其检出6份,检出率为60%。对接种IBV鸡胚尿囊液,DIG-FA法检出率为100%。实验结果表明,DIGFA法对鸡传染性支气管炎的早期诊断具备简便、灵敏、快速、特异性强和重复性好等优点。