斑点型锌指结构蛋白在恶性肿瘤发生发展中的作用

恶性肿瘤居中国各类疾病死因之首,发病率与病死率呈逐年上升趋势。近几年来靶向治疗已广泛应用于临床,显示出良好的抗肿瘤效果,新靶点的探索和鉴定在靶向药物研发过程中起着重要作用。E3泛素连接酶斑点型锌指结构蛋白(speckletype POZ protein,SPOP)作为治疗选择的潜在靶点,能特异性识别底物,使底物发生泛素化降解,广泛参与机体内多种生理、病理过程。研究发现SPOP基因突变或表达水平改变,通过调控AR/ERG、Akt-mTORC1、Hedgehog/Gli2等多种信号通路影响恶性肿瘤的发生发展,并与前列腺癌、肾癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤细胞增殖及远处转移密切相关。目前,SPOP影响恶性肿瘤发生发展的相关研究为靶向治疗恶性肿瘤奠定了基础,综述SPOP在恶性肿瘤的最新进展对抗肿瘤研究具有重要的意义。

膀胱癌及膀胱癌细胞株中斑点型锌指结构蛋白表达研究

目的观察斑点型锌指结构蛋白(SPOP)在膀胱癌组织及细胞株中表达情况。方法采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法分别检测膀胱癌组织与正常膀胱黏膜组织,不同膀胱癌细胞株与正常膀胱黏膜上皮细胞株SPOP mRNA表达量和SPOP蛋白表达量,比较分析两者表达情况。结果膀胱癌细胞株5637,T24,J82及正常膀胱细胞株SV-HUC-1中SPOP mRNA表达量分别为1.02±0.78,1.12±0.49,1.07±0.28,0.96±0.28;SPOP蛋白表达水平分别为0.44±0.16、0.38±0.27、0.14±0.33,0.72±0.24,膀胱癌细胞株与正常膀胱细胞株在SPOP mRNA水平表达差异无统计学意义(P>0.05)。而SPOP蛋白表达水平在膀胱癌细胞株与正常膀胱细胞株间差异有统计学意义(P<0.05)。SPOP mRNA表达水平在膀胱癌组织与正常膀胱黏膜组织间表达量差异无统计学意义(P>0.05),而SPOP蛋白表达水平在膀胱癌组织与正常膀胱黏膜组织间表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SPOP在膀胱癌组织中表达降低,在膀胱癌发生发展中可能起到抑制作用。SPOP可能通过转录后机制调控膀胱癌进程。

斑点型锌指结构蛋白在体外负性调控HepG2细胞的转移

目的探索斑点型锌指结构蛋白(SPOP)在体外对HepG2细胞迁移和侵袭的影响。方法利用质粒过表达和shRNA技术构建稳定过表达和敲低SPOP的稳定转染细胞,Western blotting检测SPOP过表达和敲低效果,然后利用体外Transwell实验检测SPOP对HepG2细胞的迁移和侵袭能力的影响,最后利用划痕实验再次检测SPOP对HepG2细胞迁移能力的影响。结果稳定转染HepG2中SPOP过表达和敲低效果明显;Transwell实验结果显示,过表达SPOP后HepG2细胞的迁移和侵袭能力明显下降,敲低后其迁移和侵袭能力明显上升。划痕实验结果显示,SPOP对HepG2细胞的迁移能力影响与Transwell实验一致。结论 SPOP在体外可以负性调控HepG2细胞的转移能力。

斑点型锌指结构蛋白在膀胱癌中的表达

目的 探讨斑点型锌指结构蛋白（SPOP）在膀胱癌中的表达及意义.方法 选择清华大学第一附属医院2012年12月至2014年3月行膀胱根治术及经尿道切除的膀胱尿路上皮癌标本32例,另选癌旁距离肿瘤组织5 cm以上的正常组织及部分前列腺手术时取出的正常膀胱黏膜20例作为正常对照,采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测膀胱癌组织与正常膀胱组织中SPOP表达情况.采用蛋白免疫印迹法定性检测膀胱癌细胞株5637、T24、J82及正常膀胱细胞株SV-HUC-1中SPOP的表达水平.结果 SPOP在膀胱癌组织中表达阳性率为65.6％ （21/32）,低于正常膀胱组织[100％ （20/20）],膀胱癌组织中SPOP表达水平明显低于正常膀胱组织（0.21 ±0.08比0.73 ±0.06,P＜0.01）.膀胱癌细胞株5637、T24、J82中SPOP表达水平均明显低于正常膀胱细胞株SV-HUC-1（0.43 ±0.05、0.14 ±0.06、0.03±0.01比0.72±0.14,P＜0.01）.结论 SPOP可能是一种膀胱癌的分子标记物,与膀胱癌的发生、发展相关.

E3泛素连接酶斑点型锌指结构蛋白调控RLR信号通路抑制肠道病毒71型复制

目的探讨斑点型锌指结构蛋白[speckle-type POZ(pox virus and zinc finger protein)protein,SPOP]在肠道病毒71型(EV71)感染中的作用。方法免疫共沉淀分析SPOP对EV71非结构蛋白2A蛋白酶(2Apro)泛素化水平的影响,Western blot检测干扰素调节因子3(IRF3)蛋白磷酸化水平,过表达或敲低细胞中SPOP后感染EV71,RT-qPCR分析IFN-β转录水平,RT-qPCR和Western blot检测EV71结构蛋白VP1的转录水平及蛋白质水平。结果过表达HA-SPOP后感染EV71,发现EV71感染RD细胞受抑,同时EV71-2Apro的泛素水平呈HA-SPOP梯度依赖增多。转染shSPOP质粒进行内源性SPOP敲低后,黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、接头蛋白线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)水平呈剂量依赖地减少,而转染HA-SPOP质粒后,MDA5、MAVS、p-IRF3蛋白质水平呈剂量依赖地增加。SPOP高、低表达促进或降低EV71感染的细胞表达IFN-βmRNA,同时抑制和增加VP1在mRNA或蛋白质水平表达。结论SPOP可提高EV71-2Apro的泛素化水平从而促进2Apro降解,推测SPOP可通过抑制2Apro对视黄酸诱导基因蛋白-Ⅰ(RIG-Ⅰ)样受体(RLR)信号通路中关键分子MAVS和MDA5的降解,从而上调IRF3磷酸化水平促进IFN-β释放,最终活化宿主细胞抗病毒固有免疫抑制EV71复制。

斑点型锌指结构蛋白在前列腺癌组织的表达

目的 探讨在不同前列腺组织中斑点型锌指结构蛋白（SPOP）的表达,及其表达与前列腺癌分期、分级的关系.方法 收集我院正常前列腺组织（NP）12例、前列腺增生组织（BPH）12例、前列腺癌旁组织（PC）12例以及前列腺癌组织（PCa）46例.经常规处理后,应用免疫组织化学法检测SPOP表达.结果 PCa组中SPOP表达28例（28/46）, NP、PC组表达均为阳性;BPH组11例表达阳性（11/12）;PCa组与NP组（P=0.009）、BPH组（P=0.043）及PC组（P=0.009） 比较,差异均有统计学意义.Gleason评分≥8分组（2/11）与2-4分组（9/12, P=0.006）、5-7分组（17/23, P=0.002）比较,SPOP表达阳性率差异有统计学意义. T3（4/11）与T1（6/7）期（P=0.040）、T3（4/11）与T2（14/16）期（P=0.006）、T4（4/12）与T1（6/7）期（P=0.027）、 T4（4/12）与T2（14/16）期（P=0.003）、T3＋T4（8/23）与 T1＋T2（20/23）期（P=0.000）组间比较差异均有统计学意义.SPOP表达阳性率在转移组（3/12）与非转移组（25/34）比较差异有统计学意义（P=0.003）.结论 PCa组织中SPOP表达明显低于其他类型前列腺组织,并与PCa评分、分期明显相关.

斑点型锌指结构蛋白在肿瘤中的作用

斑点型锌指结构蛋白(speckle-type POZ protein,SPOP)是E3泛素连接酶的底物接头蛋白,介导众多靶蛋白的泛素化修饰,从而参与调控细胞的多种功能。SPOP可以通过泛素-蛋白酶体途径降解下游靶蛋白,如PDK1、CDCA5、SLC7A1、ZBTB3、LATS1等,对肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等进行调控;也可以通过非降解型泛素化修饰的方式作用于对应底物从而改变底物在癌症发生发展中的功能。鉴于SPOP在肿瘤中的重要作用,本文介绍了SPOP的结构,简述了肿瘤中SPOP基因表达调控的研究进展,回顾了近年来关于SPOP突变与异常表达在肿瘤中的功能研究。综上,SPOP可作为癌症药物治疗的潜在靶点。

E3泛素连接酶接头蛋白SPOP介导的底物非降解型泛素化修饰

蛋白质的翻译后修饰是保证其能正常行使功能的前提,泛素化修饰是维持细胞正常蛋白质水平和活性的重要翻译后修饰类型。近年来,大量研究发现,E3泛素连接酶斑点型锌指结构蛋白(speckle-type POZ protein,SPOP)在诸多肿瘤与遗传疾病中存在突变,这些突变主要集中在识别底物的MATH结构域影响了与底物之间的结合,进而影响底物的蛋白质水平、定位及活性,并扰乱正常生理功能从而诱发疾病。野生型SPOP能正常结合底物,这些底物绝大多数由SPOP泛素化后进入蛋白酶体途径降解,而也有个别重要底物泛素化后仅是影响其功能改变而并非蛋白质水平的变化。鉴于SPOP在细胞内的重要功能,本文将对SPOP的底物泛素化修饰类型及功能进行详细介绍。包括:泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS),SPOP的结构、功能和作用途径以及SPOP的非降解型泛素化修饰。重点围绕SPOP的3个非降解底物:髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)介导的NF-κB信号通路、组蛋白macroH2A1(macroH2A.1 histone,macroH2A1)的X染色体沉默信号通路,以及成蛋白INF2(inverted formin 2)介导的线粒体分裂融合等信号通路,将其抑制肿瘤发生发展的分子机制进行总结,以期为肿瘤精准靶向治疗提供新思路。

前列腺癌中TMPRSS2-ERG融合基因作用机制的研究进展

前列腺癌在欧美国家男性中是最常见的恶性肿瘤,近年来我国的发病率、病死率及其造成的疾病负担呈现明显增加趋势,但前列腺癌的发生发展机制仍未完全明确。跨膜丝氨酸蛋白酶2(transmembrane serine protease 2,TMPR SS2)与成红细胞病毒E26致癌物(E26 oncogene,ERG)融合基因在前列腺癌中具有特异性,在前列腺癌发生发展过程中发挥重要作用,其作用机制复杂,且与多个基因相互作用,因此深入了解TMPRSS2-ERG融合基因在前列腺癌中的作用机制至关重要,可以为前列腺癌的诊疗提供帮助。

前列腺癌细胞内TMPRSS2-ERG融合基因产物转录调控机制研究进展

前列腺癌在欧美国家男性中是最常见的恶性肿瘤,但前列腺癌的发生发展机制还未完全明确。在前列腺癌中,TMPRSS2-ERG融合基因具有较高的发生率,其促进ERG过表达,引起相应的靶基因和信号通路改变,如雄激素受体、斑点型锌指结构蛋白、Notch通路等。深入了解前列腺癌细胞中TMPRSS2-ERG融合基因产物转录调控机制,可以为前列腺癌的治疗提供新的药物作用靶点。