鼠疫F1单克隆抗体的胶体金标记及斑点渗滤法检测F1抗原方法的建立

目的建立斑点渗滤法快速检测鼠疫F1抗原的方法。方法粗提鼠疫F1单克隆抗体,在pH8.2下对其进行胶体金标记,以兔抗F1抗体与金标记的单克隆抗体建立斑点渗滤快速检测鼠疫F1抗原的方法,并对该方法进行特异性与敏感性试验。结果成功建立斑点渗滤法快速检测鼠疫F1抗原的方法,该检测可在15min内完成,敏感性为3.12mg/L,对假结核、小肠结肠炎等近缘菌的特异性实验未发现交叉反应。结论该方法可作为鼠疫快速诊断的手段,但实验敏感性有待进一步提高。

检测血浆D-二聚体的新金标斑点渗滤法试剂盒的临床适用性

目的比较2种金标斑点渗滤法(DIGFA)试剂盒在测定D-二聚体浓度中的临床适用性。方法同时采用NycoCard公司与国产奥普D-二聚体检测试剂盒(D-D DOT)对234份血浆样本进行测试,比较2种方法的一致性。结果D-D DOT线性范围内相关系数(r)=0.998;总批内、批间变异系数(CV)分别为10.77%和12.81%;总回收率为101.3%。配对χ2检验、Kappa检验(0.95)及Spearman系数(0.87)均显示D-D DOT与NycoCard检测结果有良好的一致性。结论新的DIGFA D-二聚体检测试剂盒与进口NycoCard试剂盒有良好的一致性,能够满足临床需要。

金免疫斑点渗滤法检测日本血吸虫抗体的应用

建立了检测血吸虫病人血清抗体的金免疫斑点渗滤法 (DIGFA)。以该法检测 1 0 7份粪检阳性血吸虫病人血清 ,阳性率为 96.2 %。 1 1 9份健康人血清均为阴性。与常规 ELISA对照 ,符合率达 99.1 %。显示两法敏感性和特异性相近 ,但 DIGFA操作更为简便快速。

斑点渗滤免疫金标法诊断结核病的评价

目的 评价斑点渗滤免疫金标法 (澳大利亚 TB— DOT)对结核病的临床诊断价值 ,探讨结核病血清学诊断的临床意义。 方法 采用回顾性调查法 ,对 382例结核病人血清 TB— DOT结果进行分析 ,并与痰涂片、Bactec96 0快速培养细菌学检查对比分析。 结果 382例结核病人血清抗体阳性 2 78例 ,总的敏感性为 72 .8% ,特异性为 94 .4 %。 结论 斑点渗滤免疫金标法对结核病的诊断敏感性高 ,特异性好 ,值得临床特别是基层防痨机构进一步推广 。

金标免疫斑点渗滤试验在肺结核诊断中的应用

肺结核病的诊断主要是根据临床表现、胸部X线检查及痰涂片检查.胸部X线检查缺乏特异性,痰菌检查的阳性率又较低,痰培养虽可提高诊断的阳性率,但费时较长(6～8周),且阳性率仍较低(50%).因此,探测更为简便的结核病诊断方法已引起人们普遍关注.近年来兴起的抗结核分支杆菌抗体的血清学诊断方法日益受到重视.

用快速斑点免疫金渗滤法检测抗精子抗体

用纯化的精子膜包被硝酸纤维膜．用胶体金标记葡萄球菌A蛋白（SPA）建立滴金免疫法（滴金法）。经与酶免疫法对比，二者阳性率各为44．4％、37．0％．前者明显高于后者（P＜0.01）．且具有敏感、快速的优点，适用于各级医疗单位。

斑点金标渗滤法检测猪囊虫病

以亲和层析原理为基础,用猪囊虫纯化抗原作为检测用抗原,胶体金直接标记抗原,建立了斑点金标渗滤法诊断猪囊虫病的方法。其中囊虫抗原与胶体金溶液结合的最佳pH值为7.5,最佳浓度为52 mg/mL,检测时血清的最佳稀释度为1∶10。建立的斑点金标渗滤法检测猪囊虫病血清均为阳性,正常猪及其他病猪血清均显示为阴性,整个检测时间只需要5 min左右。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪囊虫病的临床诊断和流行病学调查。

应用斑点免疫金渗滤法检测旋毛虫病患者血清IgG

目的 研究应用斑点免疫金渗滤法 (DIGFA)快速检测旋毛虫病患者血清抗旋毛虫IgG抗体。 方法 采用旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原 ,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体 ,以颜色深浅为判断阳性标准。 结果 纯化的旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原与患者血清中特异性抗旋毛虫IgG抗体通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应 ,1 0min内即可直接观察结果。在 76份患者血清的检测中 ,阳性率为 94 .74 % ,与ELISA法的检出阳性率 86 .84 %相比差异无显著性 ( χ2 =2 .83,P >0 .0 5)。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。

斑点免疫金渗滤法同时检测猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征抗体的研究

在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征单重斑点免疫金渗滤法的基础上,建立能同时检测HC和PRRS的双重斑点免疫金渗滤法。将提纯的HC和PRRS抗原同时包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,当猪血清中含有HC、PRRS抗体时,则相应的点会显现红色(呈红色斑点),结果易于判断。且操作简单,耗时短,与猪细小病毒、口蹄疫和猪伪狂犬病毒阳性血清不发生交叉反应。

斑点金免疫渗滤法快速检测禽肉中金霉素残留

研究斑点金免疫渗滤法快速检测禽肉中金霉素残留,将制备的金霉素多克隆抗体点在硝酸纤维素膜上,用以竞争捕获胶体金标记的金霉素-牛血清白蛋白结合物和样品中的游离金霉素,通过可见的颜色深浅判断结果。结果表明,本方法的检测限为0.4μg/ml,在金霉素浓度为0.6～1μg/ml范围内可实现定量分析。结果与酶联免疫方法的测定结果一致(相关系数r为0.970)。该法可应用于禽肉中金霉素残留的快速检测。

斑点免疫金渗滤试验检测绵羊脑多头蚴病的研究

为了寻找一种快速、简便诊断绵羊脑多头蚴病的新方法 ,应用自行配制的胶体金探针标记 SPA,建立了斑点免疫金渗滤试验 (DIGFA)。该法同 EL ISA具有良好的相符性。将抗原、待检血清滴加于膜上进行反应 ,数分钟内即可用肉眼进行结果判定。本法具有操作简单、反应快速、敏感性强、重复性好、不需要贵重仪器等优点 ,适合于基层推广应用。

斑点金免疫渗滤法快速诊断布鲁杆菌病的研究

目的建立一种布鲁杆菌病快速免疫诊断方法。方法以硝酸纤维素膜为载体,胶体金标记蛋白为显示剂,通过最佳实验条件的选择及稳定性、重现性、敏感性、特异性和交叉反应试验,建立斑点金免疫渗滤法(DIGFA)快速检测布鲁杆菌病。结果 DIGFA快速检测布鲁杆菌病具有很好的重现性和稳定性;敏感性、特异性分别达到98％和100％;未发现与肺结核患者、乙肝患者及幽门螺杆菌感染者血清有交叉反应。结论 DIGFA快速检测布鲁杆菌病快速、简便,测试过程1-2 min内完成,试剂敏感、特异、稳定,非常适合布鲁杆菌病的诊断及流行病学调查。

斑点金免疫渗滤法检测血清抗精子抗体

目的建立检测血清抗精子抗体的斑点金免疫渗滤法 (dot im munogold filtration assay,DIGFA)。方法 采用经 Sephadex G- 75 -抗人全血清柱亲和层析纯化的人精子抗原和胶体金标记的 SPA,根据免疫渗滤原理 ,建立抗精子抗体(ASAb)的斑点金免疫渗滤法检测法。结果 纯化的人精子抗原具有较好的特异性 ;斑点金免疫渗滤法与 EL ISA法比较 ,符合率为 97.7%。特异性为 96 .2 % (TN/ TN+ FP× 10 0 % ) ,敏感性为 88.9% (TP/ TP+ FN× 10 0 % ) ,阳性预测值 84.2 % (TP/TP+ FP) ,阴性预测值 97.2 % (TN/ TN+ FN) .结论 斑点金免疫渗滤法方法检测血清抗精子抗体有较好的特异性和敏感性 ,重复性好 ,试剂稳定 ,操作简便快速 。

斑点免疫金渗滤法检测鸭肝炎病毒的研究

用胶体金标记提纯后的兔抗鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）ＩｇＧ，建立了一种以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金为标记物的检测ＤＨＶ的斑点免疫金渗滤法（ＤＩＧＦＡ），并确定了最佳试验条件。该法既可定性，亦可定量，对纯化ＤＨＶ的最小检测量为４．１２ｎｇ／点，其敏感性为抗原斑点试验（ＡＳＴ）的２倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＤＩＧＦＡ检测ＤＨＶ具有较高的特异性。对ＤＨＶ鸡胚尿囊液ＤＩＧＦＡ法检出率为１００％。ＤＩＧＦＡ和ＡＳＴ法对３６份临床样本检测阳性率分别为８３．３％和７５％，其阳性符合率为８６．７％。随机抽样的６份ＤＩＧＦＡ阳性肝脏样本经人工发病试验后电镜检查，均发现大量直径３０～４０ｎｍ的病毒粒子。实验结果表明，ＤＩＧＦＡ法是一种微量、敏感、特异、快速、简便的检测ＤＨＶ方法。

快速斑点免疫金渗滤法检测血清中囊虫抗体的研究

为建立一种快速敏感、适于基层应用的检测囊虫抗体的方法 ,将囊尾蚴抗原点于硝酸纤维素膜 (NC)上 ,用来检测血清中囊虫抗体 ,通过胶体金标记的金黄色萄萄球菌A蛋白(SPA)直接显色 ,阳性者出现红色斑点 ,结果易于判断。结果表明 ,整个试验过程仅需 5分钟 ,操作简单 ,用该法与酶联免疫吸附试验对比检测 5 7份囊虫患者血清标本 ,2法均阳性为 5 4份 ,2法均阴性为 1份 ,总符合率为 95 %。结果提示斑点免疫金渗滤法简便、快速、适于基层应用 。

斑点金免疫渗滤法在检测囊虫抗体中的应用

目的 将斑点金免疫渗滤法用于检测囊虫抗体 ,以制备囊虫病诊断试剂盒。方法 经透析的猪囊尾蚴囊液作为检验抗原 ,对 71份囊虫病患者、90份正常人和 2 0份其他病患者血清进行了斑点金免疫渗滤法检测并与酶联免疫吸附法比较。结果 斑点金免疫渗滤法的敏感性为 90 .1% (6 4 / 71) ,特异性为 95 .6 % (86 / 90 ) ,其他病患者血清反应中仅 1例脑肿瘤患者血清阳性 ,其余为阴性。斑点金免疫渗滤法和酶联免疫吸附法的符合率为94 .4 % (15 2 / 16 1)。

量子点标记的斑点免疫渗滤分析定量检测cTnI

利用量子点良好的光谱特征和光化学稳定性,结合免疫分析技术,对心肌肌钙蛋白I(cTnI)特异性进行定量检测.用量子点标记cTnI的单克隆抗体(2F11),通过SDS-PAGE电泳证明标记成功.斑点免疫膜渗滤法证明标记后的2F11仍具有良好的生物学活性,再将标记并纯化后的2F11与NC膜上不同浓度的cTnI进行免疫反应,使用Im ageM aster图像分析软件对膜上荧光斑点图像进行定量分析.应用此方法测得cTnI的浓度和斑点处相对荧光值有良好的线性关系(R2=0.9966),最低检出值为120 ng.

斑点免疫金渗滤法定量测定血清淀粉样蛋白A方法的建立及性能评估

目的建立斑点免疫金渗滤法(DIGFA)定量测定血清淀粉样蛋白A(SAA)并评估其分析性能。方法选用2株商品化抗SAA单克隆抗体,分别结合于硝酸纤维素膜和胶体金,制备免疫金渗滤试剂板条(SAADOT)以定量检测SAA。按照EP文件,评估SAA-DOT的分析性能(检测限、精密度、准确性、线性范围等)。结果SAA-DOT最低检测限为5 mg/L;10和100 mg/L的批内变异系数(CV)分别为9.07%和10.21%,天间CV分别为11.33%和11.53%;线性范围为5～230 mg/L;SAA-DOT的测定结果与商品化乳胶增强速率散射比浊法(LERN)试剂具有良好的相关性(r=0.995,P<0.05)。表观健康者血清SAA浓度中位数为5.7 mg/L,95%可信区间为0～9.6 mg/L。结论基于DIGFA的SAA-DOT简便、快速,能在5 min内完成检测,各项分析性能指标达到国家食品药品监督管理局(SFDA)对体外诊断试剂的要求,可用于临床患者血清标本的检测。

斑点免疫金渗滤法检测赤羽病抗体的研究

以亲和层析原理为基础,将提纯的AKAV抗原包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,建立了斑点免疫金渗滤法诊断赤羽病抗体的方法。其中最佳点样抗原质量浓度是0.099mg/mL,封闭液选择含1%BSA,0.5%Tween-20的0.01mol/LpH7.2的PBS缓冲液,SPA胶体金最佳稀释度为1∶4。特异性试验表明,该方法特异性好,与牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎、牛白血病、口蹄疫、蓝舌病等阳性血清不发生交叉反应。将DIGFA与ELISA进行对比,差异不显著。研究结果表明,该方法操作简单,结果易于判断,适用于赤羽病的临床诊断和流行病学调查。

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记SPA,建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色,阳性者出现红色斑点,结果易于判断。整个试验过程仅需5min,操作简单,与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot-ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较,符合率达98.4％和98.9％。说明该法微量、特异、敏感可靠,检测时间短,效果直观,非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。