新疆维吾尔自治区阿克苏地区牛羊体表蜱携带斑点热群立克次体调查

[目的]对新疆维吾尔自治区阿克苏地区牛羊体表蜱携带斑点热群(spotted fever group Rickettsia,SFGR)立克次体情况进行调查。[方法]从阿克苏地区阿克苏市(n=344)、温宿县(n=93)、沙雅县(n=98)、乌什县(n=39)随机采集牛羊体表蜱574只,以立克次体外膜蛋白B基因(ompB)和细胞表面抗原1基因(sca1)为靶基因,运用PCR方法检测立克次体携带情况,确定所属的SFGR基因型。选择2个基因的强阳性样本进行测序,将获得的序列与GenBank数据库中已登录的相关基因序列进行同源性比对,并构建系统发育树。比较4个县(市)蜱的立克次体感染率差异。[结果]对牛羊体表蜱携带的立克次体进行检测,发现存在3种SFGR基因型,分别为暂定巴布瑞立克次体(Candidatus Rickettisa barbariae)、西伯利亚立克次体(Rickettisa sibirica)、马赛立克次体(Rickettisa massiliae)。蜱样本中立克次体的总体阳性率为15.16%(87/574),温宿县的立克次体阳性率最高,为23.66%(22/93)。在检出的3种SFGR基因型中,暂定巴布瑞立克次体为优势种(Dr=44.83%,39/87)。4个县(市)蜱的立克次体感染率存在显著差异(P=0.001,χ2=15.834)。[结论]阿克苏地区是蜱及立克次体流行区,建议加强蜱及蜱传疾病的防控。

四川省炉霍县牦牛源蜱传斑点热群立克次体和无形体分子检测及遗传进化分析

【目的】了解四川省炉霍县牦牛体表寄生蜱的种类及其斑点热群立克次体(Spotted fever group Rickettsia,SFGR)和无形体的感染情况。【方法】在炉霍县6个乡采集牦牛体表的蜱,经形态学初步鉴定后提取蜱基因组DNA,采用PCR技术分别扩增蜱ITS⁃2、SFGR OmpB和无形体16S rRNA基因部分片段,对阳性产物进行测序、比对及构建进化树,从而确定蜱的种类及其SFGR和无形体的感染情况。【结果】在820份蜱样本中,只包含青海血蜱(Haemaphysalis qinghaiensisus,29/820)和微小扇头蜱(Rhipicephalus micro⁃plus,791/820)。总共有408份蜱样本被检出SFGR,只检出Candidatus Rickettsia longicornii 1种SFGR,总感染率为49.8%(408/820)。本次调查的6个乡均检出SFGR,不同乡之间SFGR感染率的差异极显著(χ^(2)=111.524,P=0.000<0.01)。青海血蜱和微小扇头蜱的SFGR感染率分别为44.8%(13/29)和49.9%(395/791),差异不显著(χ^(2)=0.292,P=0.589>0.5)。有5个乡检出无形体,共检出Anaplasma bovis、A.marginale、A.platys和A.phagocytophilum 4种无形体,总感染率为30.9%(253/820),不同乡之间蜱样本无形体感染率差异极显著(χ^(2)=139.825,P=0.000<0.01)。青海血蜱和微小扇头蜱的无形体感染率分别为6.9%(2/29)和31.7%(251/791),差异极显著(χ^(2)=8.087,P=0.004<0.01)。SFGR与无形体混合感染率为18.8%(154/820)。【结论】炉霍县存在青海血蜱和微小扇头蜱,还携带SFGR和多种无形体,应做好当地蜱传斑点热群立克次体和无形体的防治工作。

我国西部地区蜱类携带斑点热群立克次体现状

近几十年来,蜱传疾病已经成为一个全球性的健康问题。在世界范围内斑点热群立克次体(SFGR)被认为是重要的蜱传病原体。伴随着全球一体化进程的加快,近年来在我国西部地区多次发现蜱传新发再发病原体。本文主要针对我国西部地区蜱虫携带斑点热群立克次体现状进行了简要概述,以期为我国西部地区蜱传斑点热群立克次体疾病的系统研究和综合防控提供参考信息。

云南省大理市鼠、蜱中检测出斑点热群立克次体DNA

目的 了解鼠、蜱中自然感染斑点热群立克次体状况。方法 用PCR法检测鼠类脾脏和蜱类中的斑点热群立克次体DNA序列片段。结果 在云南省大理市下关野外山地捕获鼠类 9种 5 1只 ,从大足鼠 (1/ 15 )、大绒鼠 (1/ 7)和短尾 (1/ 8)各检出阳性 1份 ,其他鼠种均为阴性 ,总阳性率为 5 .88%。从采自弥渡县的 2 0 8只勐突血蜱中检出阳性 5份 ,阳性率为 2 .40 %。结论 初步认为云南省大理地区存在斑点热疫源地。

从病人血液分离的斑点热群立克次体H-5株的鉴定

目的1996年5～6月在黑龙江省绥芬河、东宁地区进行斑点热病的调查。方法采用micro-IF、病原分离及PCR／RFLP等方法。结果（l）发现被蜱叮咬后斑点热临床指征的疑似病人7例，其中血清检测有4例早期与恢复期血清抗SFG立克次体lgM、IgG抗体滴度≥4倍升高;（2）从病人血液分离到1株SFG立克次体H-5株，经鉴定显示该分离株和黑龙江省立克次体54株一致，和SFG各标准株有明显差异。结论该患者为SFG黑龙江立克次体感染，从病原学角度证实该立克次体对人具有致病性。

从福建首次分离出斑点热群立克次体

本文报道自福建省宁化县林区野兔身上寄生的越原血蜱（Ｈａｅｍａｐｂｙｓａｌｌｉｓｙｅｎｉ）中分离到一株斑点热群立克次体，经特异性免疫荧光检查初步确定为西伯利亚立克次体（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｓｉｂｉｒｉ－ｃａ），这是在我国南方分离出来的第一株斑点热群立克次体。

斑点热群立克次体新种──虎林－93株的分离和鉴定

本文用鸡胚卵黄囊培养法及实验动物感染法从黑龙江省虎林县境内采集的嗜群血蜱中分离到了一株立克次体。命名为ＨＬ－９３株立克次体。经形态学及血清学试验证实为斑点热群立克次体。分别用微量免疫荧光法、十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳法、单克隆抗体免疫酶斑点法、单克隆和多克隆抗体免疫印迹法、聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析法对该分离株进行鉴定并同已知国际标准株、国际及国内参考株进行比较。结果表明；ＨＬ－９３株立克次体无论在抗原性多肽上，还是在基因水平上在斑点热群立克次体中都是独特的。根据目前立克次体分类法，ＨＬ－９３株立克次体可以考虑是斑点热群立克次体的新种。

部分省区啮齿动物中斑点热群立克次体的检测

目的了解我国部分省区啮齿动物中斑点热群立克次体的自然感染情况,比较南北地区不同鼠种带菌率的差异。方法在黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州5省(自治区)共捕获鼠473只,用聚合酶链反应检测鼠脾脏中的斑点热群立克次体DNA序列片段。结果共检测鼠473只,69只阳性,阳性率为14.6%;在黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州省(自治区)都检测出阳性标本,阳性率分别为3.1%、21.6%、30.0%、10.8%和21.4%。结论我国黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州省(自治区)的鼠中都存在斑点热群立克次体的感染,南北地区鼠的带菌率差异无统计学意义(P>0.05)。

吉林省林区家畜中斑点热群立克次体与莱姆病螺旋体复合感染的血清学调查

目的了解吉林珲春地区家畜中斑点热、莱姆病及其复合感染的情况。方法应用间接免疫荧光法检测家畜血清中斑点热群立克次体和伯氏疏螺旋体的IgG抗体。结果牛血清中斑点热感染率为18.0%,莱姆病感染率为27.5%,复合感染率为9.5%;羊血清中斑点热感染率为19.2%,莱姆病感染率为31.5%,复合感染率为12.8%。结论吉林珲春地区家畜中广泛存在斑点热和莱姆病的复合感染。

黑龙江林区野鼠中斑点热群立克次体的核酸检测与序列分析

目的：了解黑龙江林区野鼠中斑点热群立克次体的感染情况。方法：运用聚合酶链反应方法对黑龙江地区采集的啮齿动物标本扩增斑点热群立克次体外膜蛋白A（OmpA）基因。阳性标本送测序并应用Mega5．0软件进行序列分析。结果：共检测鼠标本514份，斑点热群立克次体的阳性率为9．3％（95％CI：7．1％～12．2％），牡丹江、绥芬河、同江和东宁四个地区斑点热群立克次体的阳性率分别为12．4％（39／314），5．3％（3／57），2．0％（1／51），5．4％（5／92），地区间阳性率差异有统计学意义（P=O．023）。感染斑点热群立克次体的有仓鼠、大仓鼠、大林姬鼠、褐家鼠、黑线姬鼠、红背鼠平、鼠句黯、棕背鼠平、东方田鼠、明纹花松鼠10种，鼠种间阳性率差异有统计学意义（P=O．002）；棕背肝的阳性率最高，为22．1％（21／95）。测序结果显示鼠感染的斑点热群立克次体基因型是黑龙江立克次体基因型和一种新的未定种基因型。结论：黑龙江地区存在鼠感染黑龙江立克次体，同时可能存在未定种的新的斑点热群立克次体。

190kDR.rOmpA基因序列对斑点热群立克次体的检测

目的为探讨190 kD R.rOmpA 基因序列对斑点热群立克次体的检测作用。方法从立氏立克次体190 kD 外膜蛋白 A(R.rOmpA)基因序列设计引物,利用 PCR 检测的方法,检测了683只蜱类标本和146个鼠类脏器标本,并随机抽取1株森林革蜱阳性扩增产物进行克隆与序列测定。结果从蜱类标本和鼠类脏器标本中检测出了斑点热立克次体 DNA 片段;所测序列的分型结果表明与前苏联的 DnS 14株型别一致,与我国曾经检测出的斑点热立克次体株差异较大。结论 190kD 外膜蛋白 A 基因序列可用于斑点热立克次体检测,并可用于斑点热群立克次体基因型或亚型之间的鉴别。

斑点热群立克次体中国分离株rOmpA基因片段的克隆和序列分析

用Rr190.70p-602n引物扩增了斑点热群立克次体（spottedfevergrouprickettsiae，SFGR）中国分离株（BJ－90株、Ha－91株和HLJ－054株）及SFGR国际标准株西伯利亚立克次体（Rickettsiasibiricu）246株和派克立克次体（R.parkeri）的rOmpA基因片段，将PCR产物克隆入pGEM－T载体中，用双脱氧法进行序列测定，并与SFGR的rOmpA基因已知序列进行了比较。结果表明，SFGR国际标准株间rOmpA基因片段的核苷酸同源性为90.06%～96.62%，推定氨基酸的同源性为83.05％～94.35％，中国分离株与国际标准株及参考株rOmpA基因片段比较的结果发现：BJ－90株及Ha－91株与西伯利亚立克次体标准株的核苷酸同源性分别为99．06％和98．31％，推定氨基酸的同源性则为98.87％和96.61％，HL－93株和HLJ-054株与日本立克次体（R.japonica）核苷酸同源性较高，分别为96.62％和95.68％，推定氨基酸的同源性为92．09％和89．27％。在中国分离株内，BJ-90株和Ha－91株的核昔酸同源性高达99．20％，推定氨基酸的同源性为97．74％，HIJ－054株和HL－93株rOmpA基因片段的核苷酸及推定氨基酸的同源性分别为98.12％，94.92％。因此认为在中国广阔的地域内，除HLJ-054株和HL-93株可能为SFGR的新成员外。

黑龙江立克次体054株单克隆抗体对斑点热群立克次体抗原结合位点及特性的分析

本文利用三株黑龙江立克欢你054株（HLJ－054）的单克隆抗体对四株斑点热群立克次体西伯利亚种（R．s．）246株、精河株（JH－74），立氏立克次体（R.r．）R株及HLJ-054株进行了血清学反应，对其蛋白组成及单抗结合抗原特性等方面进行了研究。结果表明：JH-74林与246株在上述三个方面完全一致，不同于HLJ－054及R．r．R株；HLJ－054株与R．r．R株与三株单抗血清学反应高度交叉．但二者在蛋白组成及与单抗反应的抗原组成上均存在差异。该结果支持黑龙江立克次体054株为斑点热群立党次作的一个新成员。单抗F7针对的抗原结合表位为蛋白多肽；而单抗2E1、4G2结合的抗原表位可能为精蛋白。

气相色谱-质谱法对斑点热群立克次体——中国分离株的识别研究

本文报告应用气相色谱-质谱法分析了13株斑点热群立克次体(7株中国分离株和6株国际标准株)泛影葡胺密度梯度离心纯化物的全细胞脂肪酸成分。结果表明,各被检测的立克次体株所含主要脂肪酸成分百分含量有区别,所得色谱图经多元聚类法处理的7株中国分离株与国际标准株中的西伯利亚立克次体相近,而与其它国际标准株则有明显区别。

斑点热群立克次体中国分离株HL-93和HLJ-054亲缘关系的研究

目的 通过斑点热群立克次体 (spottedfevergrouprickettsiae ,SFGR)rOmpA基因片段的序列分析对HL 93和HLJ 0 5 4的亲缘关系进行研究。方法 用PCR分段扩增rOmpA基因重复区后 1 9kb片段 ,PCR产物直接测序 ,用WinstarDNA分析软件包进行同源性比较、进化树分析及酶切位点的分析。 结果 HL 93株和HLJ 0 5 4株核苷酸及推定氨基酸的同源性均在 99%以上 ,在树形图上单独聚为一类。常用酶的酶切位点完全一致。结论 HL 93株和HLJ 0 5 4株为同一种SFGR ,建议均命名为黑龙江立克次体 ,但可能存在株间差异性。

斑点热群立克次体广东分离株OmpA基因片段的克隆及序列分析

目的 鉴定斑点热群立克次体广东分离株GDFK5 8- 2 0 0 0和GDFK5 9- 2 0 0 0种属类型。方法 用PCR方法扩增GDFK5 8- 2 0 0 0和GDFK5 9- 2 0 0 0的OmpA基因起始部位 5 33bp片段 ,克隆于pMD18-T载体并进行测序 ,测序结果与Genbank中其它斑点热群立克次体相应基因片段的核苷酸进行比较 ,用DNASTAR软件分析结果。结果 GDFK5 8- 2 0 0 0、GDFK5 9- 2 0 0 0和西伯利亚立克次体之间的核苷酸同源性为 99 6 %～ 99 8% ,推断的氨基酸同源性为 99 6 %～ 99 8% ,常用于分类鉴定的酶切位点完全一致。结论 两株广东分离株属于斑点热群立克次体的西伯利亚立克次体种。

斑点热群立克次体分子生物学研究进展

斑点热群(Spotted Fever Group,SFG)立克次体是引起斑点热的病原体。该群立克次体是立克次体目中最复杂的一群。目前已定论并记载在《Bergey’s细菌学鉴定手册》第九版上的有8种,即:引起落矶山斑点热的立氏立克次体(Rickettsia rickettsii),引起北亚热的西伯利亚立克次体(R.sibiria),引起钮扣热的康氏立克次体(R.conorii)。

应用PCR技术检测斑点热群立克次体特异性DNA

作者对不明热患者血液，立克次体细胞培养物，疫区的微小牛蜱，野鼠脾脏等标本，应用Ｒｒ．１９０．７０ｐ和Ｒｒ．１９０．６０２ｎ引物对，进行ＰＣＲ扩增，检测斑点热群立克次体特异性ＤＮＡ。检测结果１．２０份不明热患者或疑似立克次体病患者血液标本，检出阳性结果的有７份（７／２０阳性）。２．２７份不明热患者或疑似立克次体病患者血液标本的细胞分离培养物，检出阳性结果的有１４份（１４／２７阳性）。３．７组微小牛蜱有２组检出阳性结果（２／７阳性）。４．４７组野鼠脾脏８组检出阳性（８／４７阳性）。