筛选和制备单或多克隆抗体进行间日疟疾免疫诊断研究——Ⅱ、单抗筛选检测方法—斑点免疫结合试验的建立

比较间日疟、恶性疟和食蟹猴疟原虫可溶性抗原不同蛋白包被浓度、酶结合物稀释度以及几种混合纤维素膜的测定结果,建立和稳定DIA(斑点免疫结合试验)方法,用以检测和筛选单克隆抗体获得较好效果。与常规IFAT(免疫荧光抗体试验)比较,DIA敏感性高,抗原用量小,可用肉眼判定结果。

血清滤纸斑点免疫结合试验诊断棘球蚴病

以定性滤纸吸附血清样品,保存于室温和4℃冰箱内, 3和6个月后对所保存的血清滤纸进行生物素抗生物素系统斑点免疫结合试验,以检测血清样品中抗棘球蚴抗原的抗体.结果表明2种条件下保存的干血清滤纸的检测结果与新鲜血清样品检测结果基本一致(P>0. 05).证明在生物素抗生物素系统斑点免疫结合试验检测棘球蚴病患者免疫应答时,干血清滤纸法可作为患者血清样品的保存方法.

生物素抗生物素系统斑点免疫结合试验检测棘球蚴病患者的免疫应答

建立了生物素抗生物素系统斑点免疫结合试验 (BAS DIBA) ,并以此法研究了棘球蚴病患者对细粒棘球蚴 (Echinococcusgranulosus)抗原的免疫应答 .79例棘球蚴病患者血清、6 9例非棘球蚴病患者血清和 119例健康人血清的BAS DIBA试验结果为 :两试验检测抗棘球蚴抗原抗体的敏感性分别为 97.4 5 %和 92 .4 1% ;特异性分别为 98.4 0 %和 98.94 % ;在 91.14 %的棘球蚴病患者血清中 ,BAS DIBA试验较DIBA法敏感 ;两法同为阳性的棘球蚴病患者血清中 ,BAS DIBA检出的抗体效价的几何均数为DIBA法的 5 .4 8倍 ;4例DIBA试验阴性的棘球蚴病患者血清在BAS DIBA法中为阳性 .证实所建立的BAS DIBA法是检测棘球蚴病患者免疫应答敏感性高、特异性强的方法 ,特别是对于低抗体水平的棘球蚴病患者可能具有更高的应用价值 .

斑点免疫结合试验诊断囊虫病

1988年,我们用斑点免疫结合试验(DIA)诊断囊虫病,与间接血凝试验(IHA)比较,结果满意。1.受检对象:实验组受检血清共137份,脑脊液共77份。受检患者为皮肌型囊虫病40例,单纯脑囊虫病47例,混合型脑囊虫病47例,眼囊虫病3例。对照组受检血清共285份,脑脊液64份。其中健康者血清91份。

斑点免疫结合法检测3种植物病毒

研究了改进的斑点免疫结合法在检测芜菁花叶病毒、烟草花叶病毒和小西葫芦黄化花叶病毒中的应用 .无论是使用全抗血清还是纯化的免疫球蛋白 ,检测感染组织粗汁液中的病毒或纯化的病毒 ,均获得了满意的结果 .同时进行的斑点免疫结合试验、酶联免疫吸附试验和免疫吸附电子显微术等的比较结果表明 :无论是检测纯化病毒还是感染组织粗汁液中的病毒 ,斑点免疫结合法的检测敏感性均优于后 2种方法 ,病毒的可测感度芜菁花叶病毒为 0 .6 5ng ,烟草花叶病毒为0 .39ng ,小西葫芦黄化花叶病毒为 0 .4 5ng ;应用碱性磷酸酶标记抗体及羟基吲哚磷酸盐和氮兰四唑为底物较为合适 ,这种底物可在室温下长期保存 ,并且反应产物为不褪色的紫色 。

结核感染T细胞斑点试验用于辅助诊断不典型淋巴结核1例

1病例资料 病例1：患者,女,43岁。因间断咳嗽2月入院。曾于2011年8月1日9因＂双侧胸膜炎＂、胸腔穿刺抽出＂血性胸水＂至上海中山医院查PET/CT示：心包壁层胸膜弥漫性增厚伴多发糖代谢异常增高结节,

用斑点免疫结合法测定登革病毒单克隆抗体亲和力

建立斑点免疫结合法（ＤＩＡ）测定抗体相对亲和力。用此法出定了登革病毒Ⅱ型非结构蛋白ＮＳ１四株单克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）的相对亲和力，４株ＭｃＡｂｓ对ＮＳ１的亲和力各不相同。按５０％最大结合浓度分析，抗体株６─１／Ｃ为０．０５μｇ／ｍｌ．１─７／Ｆ为０．６７μｇ／ｍｌ．５Ｄ为２５．００μｇ／ｍｌ，３─１１／Ｃ为５７．００μｇ／ｍｌ。以上结果为应用这些单克隆抗体提供了依据。同时，说明用ＤＩＡ法测定ＭｃＡｂ相对亲和力的可行性。

猪胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白B F190A突变及免疫原性

猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)是造成猪肺炎和胸膜炎的重要病原菌之一,其病死率高达80%~100%。为了寻找APP转铁结合蛋白B(transferrin binding protein B,TbpB)与猪转铁蛋白(transferrin,Tf)相互作用的关键氨基酸,以达到为APP铁摄取机制研究及相关疫苗开发奠定基础的目的,本研究在对野生型TbpB进行序列分析、三维结构建模、克隆的基础上,通过GRAMM-X分子对接软件在线预测APP TbpB与猪Tf结合的关键氨基酸,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术构建突变质粒,ZYM-5052半乳糖自诱导培养基诱导大肠杆菌表达该突变蛋白后与猪Tf进行斑点结合试验,野生型TbpB、突变TbpB以及PBS分别免疫小鼠,采用间接ELISA法检测不同阶段小鼠血清中特异性抗体的水平。分子对接结果显示,预测的关键氨基酸为第190位苯丙氨酸,质粒测序结果显示,已成功将编码190位苯丙氨酸的密码子突变为编码丙氨酸的密码子;斑点结合试验结果显示,突变TbpB与猪Tf不再发生结合反应;小鼠免疫试验结果表明与野生型TbpB相比,突变TbpB可诱导产生更高水平的抗体;APP TbpB 190位苯丙氨酸在与猪Tf反应中起着关键作用,突变TbpB具有良好的免疫原性,为进一步研究TbpB的功能、结构以及开发相关疫苗奠定了理论基础。

快速斑点免疫结合试验检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染

采用新型斑点免疫结合技术,以特异性沙眼衣原体(chlamydia trachomatic,CT)单克隆抗体为基础建立快速定性检测方法,对533例性病门诊患者泌尿生殖道标本进行CT的检测,结果CT检出率为21.2％(113/533),男性CT检出率为18.9％(54/286);女性CT检出率为23.9％(59/247)。提示泌尿生殖道的CT感染在本地区STD高危人群中流行,应引起高度重视。

灰飞虱体内Wolbachia的感染与其携带水稻条纹病毒的相关性分析

使用斑点免疫结合试验(DIBA)和PCR法分别对灰飞虱体内水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)和沃尔巴克氏体(Wolbachia)的感染特点进行研究。结果发现:灰飞虱体内广泛存在Wolbachia感染,但是灰飞虱体内Wolbachia的感染与其体内携带RSV的特点不存在明显的相关性,同时二者在经卵传播过程中也没有明显的相关性。这暗示了RSV和Wolbachia在灰飞虱体内虽然都可以垂直传播给下一代,但是二者在传播方式上或者在传播过程中可能是两个相对独立、相互间没有明显影响的过程。

用完整恶性原疟虫作抗原进行DIA诊断恶性疟

应用培养的完整恶性疟原虫虫体抗原代替可溶性抗原进行DIA,检测52例恶性疟病人血清,阳性率为94,2％,与用可溶性抗原DIA对同一批病人检测的阳性率为96.2％,两者无显著差异(p>0.05),但比ELISA的检测效果80.8％明显为高。48名健康人血清均未出现假阳性反应。此法与黑热病、肺吸虫病、姜片虫病和日本血吸虫病均无交叉反应。此法操作简便,适于一般实验室应用。

钩端螺旋体L型的鉴定

目的为鉴定钩端螺旋体Ｌ型菌株。方法用电镜检查、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及斑点免疫结合试验（ＤＩＢＡ）鉴定一株自钩体脑动脉炎患者血及脑脊液标本中分离到菌株。结果电镜显示该菌株细胞壁有缺陷，形态呈多形性，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示该菌株表达的蛋白质带型与钩体的相似，缺失了部分条带，无新的蛋白带出现 ＳＤＩＢＡ显示该菌株弱阳性。结论 多种方法均鉴定该菌株为钩端螺旋体Ｌ型。

DIA与ELISA和IFA诊断恶性疟的比较观察

对53份恶性疟病人血清同时用DIA、ELISA和IFA进行了检测比较,前者的阳性符合率最高,为96.2％,IFA和ELISA分别为83.0％和79.20％。在IFA和ELISA漏检的大多数血清样本,DIA可出现阳性,多数患者血清稀释度1:5120时DIA仍呈阳性。表明DIA检测恶性疟抗体的效果较ELISA和IFA的为高。

棘球蚴抗原纯化对免疫球蛋白IgG免疫应答的影响

以纯化的棘球蚴抗原和未经纯化的粗抗原用于棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原的特异性免疫球蛋白IgG水平的检测试验,结果表明,当血清稀释度为1∶200时,使用纯化抗原可以获得较高的特异性(98.9%),并可保持在使用粗抗原及血清稀释度为1∶400时获得的较高的敏感性(93.7%),提示在棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原特异性免疫球蛋白IgG水平的检测中,使用纯化棘球蚴抗原和粗抗原均可获得较高的敏感性(93.7%)和较高的特异性(98.4%,98.9%),使用纯化抗原时的特异性略高,但在统计学上并无显著差异.

临床分离的金黄色葡萄球菌产肠毒素血清型分布及意义

金黄包葡萄球菌肠毒素(SE)引起的疾病,越来越受到人们的重视。检测SE并对其分型,对于临床诊断和预防以及医院内交叉感染的调查有着重要的实际意义。本成果对采自北京、济南和西安7所医院临床分离的138株金葡菌菌株,通过玻璃纸覆盖培养基的膜培养法产毒,以斑点免疫结合试验检测培养液中不同血清型的SE,同时以琼脂免疫扩散试验平行对比。

结核感染T细胞检测对COPD并肺结核患者的临床诊断意义

目的:探讨结核感染T细胞检测在慢性阻塞性肺病(COPD)并肺结核患者诊断中的临床价值。方法:选择我院2013年1月-2016年4月收治的85例疑诊或待排肺结核的COPD患者为观察对象,抽取外周血分别进行结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)和结核菌素试验(TST),比较2种方法对COPD并肺结核的临床诊断效果。结果:T-SPOT.TB试验诊断COPD并肺结核的敏感度为88.68%,特异性为90.63%,假阳性率为9.38%,假阴性率为11.32%;TST对COPD合并肺结核的阳性率为39.62%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:T-SPOT.TB试验在COPD合并肺结核患者的临床诊断中具有准确率高、敏感度高、特异性强的优点和较强的应用价值。

T-SPOT TB联合IL-10、IL-27对结核性胸膜炎的诊断价值

目的评价T-SPOT TB联合IL-10、IL-27检测对结核性胸膜炎的诊断价值。方法纳入结核性胸膜炎患者42例和恶性胸腔积液患者44例,抽取患者胸腔积液进行T-SPOT TB检测,并用ELISA法检测IL-10和IL-27的表达水平。结果结核性胸膜炎组患者中T-SPOT TB阳性39例,阴性3例,阳性率92.86%;恶性胸腔积液组患者中T-SPOT TB阳性2例,阴性42例,阳性率4.55%。与后者相比,结核性胸膜炎组患者T-SPOT TB检测阳性率较高,且二者差异有统计学意义(P<0.01)。结核性胸膜炎患者胸腔积液IL-10(142.86±33.12)和IL-27(418.20±63.4)表达水平,显著高于恶性胸腔积液组IL-10(96.18±13.41)和IL-27(127.33±32.86),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 T-SPOT TB联合测定IL-10、IL-27表达水平在结核性胸膜炎的诊断和鉴别诊断中具有重要价值。