基于酵母重组人细胞核抗原的多种自身抗体复合斑点胶体金法的研发与评价

目的建立一种简便快速的自身免疫抗体复合斑点胶体金法。方法将7种人细胞核抗原Sm D1、Sm B′、SSA52、SSA60、SSB、U1RNP 70K、Jo-1用毕赤酵母表达纯化后,点样于硝酸纤维素膜(NC)上,以此检测血清中相应的多种自身抗体,用SPSS 11.0统计软件分析,总符合率及7个组间符合率的比较用χ~2检验。结果与欧蒙自身抗体酶联免疫吸附法(ELISA)检测为不同自身免疫性疾病阳性血清291份和正常人血清60份比对,复合斑点胶体金法阳性符合率分别为:抗Sm D1 93.7%(59/63),抗Sm B′91.7%(55/60),抗SSA52 91.0%(81/89),抗SSA60 90.5%(76/84),抗SSB 98.6%(70/71),抗U1RNP 70K 93.6%(73/78),抗Jo-1 91.1%(51/56);阴性符合率为100%(60/60);总符合率为92.8%(465/501),统计学检验均无显著性差异(P<0.05)。结论复合斑点胶体金法简便、快速、准确,可满足临床对自身免疫性疾病联合诊断的需求。

检测副溶血弧菌TDH斑点免疫胶体金渗滤法的研究

目的:制备特异性检测副溶血弧菌TDH的斑点免疫胶体金渗滤测试盒(Dot immunogold filtration assay,DIG-FA)。方法:T6D4和T9H4两株抗体分别标记于金颗粒和点样于硝酸纤维素膜,通过双抗体夹心法来开发斑点免疫胶体金渗滤测试盒,并对测试盒的特异性、重复性、稳定性做了分析。结果:研制的斑点免疫胶体金渗滤测试盒能够特异性检测副溶血弧菌TDH,其最低检测限达到250 ng/ml TDH,该测试盒在4℃恒温条件下保存12周后仍表现出准确和稳定的检测结果。结论:成功制备了检测副溶血弧菌TDH的斑点免疫胶体金渗滤测试盒,对现场快速检测TDH提供了可靠的测试工具。

免疫胶体金渗滤斑点试验对抗精子抗体的检测

目的 :建立一种快速鉴定抗精子抗体的新方法。方法 :用化学试剂提纯精子抗原 ,将其结合于硝酸纤维素膜上 ;以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体 ,建立检测人血清抗精子抗体的免疫胶体金渗滤斑点试验。结果 :抗原抗体通过渗滤在膜上反应 ,10min肉眼即可观察到结果 ,10 0例临床血清标本的检测结果 ,本法与ELISA法基本相符。结论 :免疫胶体金渗滤斑点试验可快速测定抗精子抗体 。

斑点免疫胶体金渗滤法、免疫层析法联合酶联免疫法检测结核抗体诊断结核病的应用价值分析

目的本文旨在探讨斑点免疫胶体金渗滤法(TB-DOT)、免疫层析法(TB-IgG)和酶联免疫法(TB-SA)检测结核抗体诊断结核病的应用价值。方法选取本院2017年3月~2019年5月收治的100例结核病患者作为结核组,另选取同期的100例非结核病肺部疾病患者作为对照组。比较三种不同检查方法对结核病的诊断符合率和特异性。结果三种检查方式诊断结核病的阳性检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05);三种检查方式诊断结核病的特异性和敏感性比较,差异无统计学意义(P>0.05);三项联合检查诊断结核病的阳性检出率为95.00%,明显高于两项检查(88.00%)和任一单项检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三种检测方式联合检测结核抗体诊断结核病阳性率高,可为临床诊断提供参考依据。

胶体金斑点免疫渗滤法检测HBsAg实验研究

应用胶体金为标记物系统、微孔滤膜为固相载体建立的双抗体夹心检测HBsAg的胶体金斑点免疫渗滤法(DIGFA)。此法测定尤其简便快速,检测只需1～3min,斑点显色清晰分明。替代试验、中和试验证明本法具有良好的特异性:其敏感性虽稍逊于ELISA,但临床206份血清标本测定与ELISA完全相符。实验中采用pharmacia Sephaeryl S-400层析柱代替密度梯度超速离心对金标抗体进行分离纯化,消除了超速离心后的聚集倾向,提高了制剂的稳定性。为病毒性肝炎的快速诊断建立了一种新的方法,也将为舰艇部队提供更加简便有效的单兵诊断试剂。

结核病的诊断中应用免疫层析法、斑点免疫胶体金渗滤法联合酶联免疫法检测结核抗体的应用价值

分析对于结核病的诊断实施免疫层析法、斑点免疫胶体金渗滤法联合酶联免疫法检测结核抗体的临床价值。方法:选入我院于2018年1月-2019年1月收治的50例结核病患者(试验组)以及同期收治的非结核病患者(参照组),所有的患者均进行免疫层析法、斑点免疫胶体金渗滤法联合酶联免疫法检测。对比和分析两组患者采用三种检验方式对结核病的阳性检出率,采用三种检验方式联合检查诊断试验组结核病的阳性检出率。结果:两组患者采用三种检验方式对结核病的阳性检出率无差异性(p>0.05),组间不存在统计学意义(P<0.05);三种检验方式联合检查诊断结核病的阳性检出率高于两项检出率,组间比较具有差异性(P<0.05)。结论:对于结核病的诊断应用免疫层析法、斑点免疫胶体金渗滤法联合酶联免疫法检测准确率更高,为临床后续治疗提供有效的参考依据。

免疫胶体金技术检测猪繁殖与呼吸综合征

采用斑点胶体金技术建立一种快速、简便、准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法。运用RT-PCR技术克隆出PRRSV核衣壳蛋白基因,经原核表达与蛋白纯化获得重组的核衣壳蛋白,作为诊断抗原。采用柠檬酸三钠还原法制备了直径为18~20 nm的胶体金,对兔抗猪Ig G抗体进行标记后,进一步组装成斑点胶体金免疫检测试剂。经猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)阴性和阳性血清检测,斑点胶体金免疫检测试剂仅与阳性血清发生反应,特异性强,反应30~40 min内就可以在硝酸纤维膜上出现清晰的红色斑点,其灵敏度和Dot-ELISA法相仿。该检测方法可广泛应用于PRRS的临床诊断和流行病学调查,也可作为研究兽医快速诊断的技术基础。

两种肺炎支原体快速检测方法的比较研究

目的研究肺炎支原体(MP)快速鉴定培养基法及胶体金免疫斑点法检测MP抗体法,在快速诊断MP感染中的临床价值。方法选择解放军306医院呼吸科病房522例急性呼吸道感染病人,分别取同一患者咽拭子样本用快速鉴定培养基法进行MP培养,并取血清用胶体金免疫斑点法进行MP抗体检测,对两种方法的结果做出评价。结果两种方法的检测结果有较好的一致性。受检患者中,136例MP快速培养法为阳性,阳性率为26.1%;而123例用胶体金免疫斑点法检测MP抗体为阳性,阳性率为23.6%;两种检测结果之间差异无统计学意义(P=0.105,P>0.05)。结论应用此两种方法快速诊断感染MP均较方便、快速,但快速培养法能在发病早期就得到结果,有更好的临床应用价值。

包虫病特异性抗体检测试剂盒诊断效能评价及结果判定优化

为评价3种包虫病特异性IgG抗体诊断试剂盒的临床诊断效能,并针对其特异度差的问题进行优化,为包虫病免疫学诊断提供检测结果优化判定的策略,本研究共收集87例包虫病确诊病人血清,78例经排查为非包虫病就诊病人血清。每份血清同时采用3种试剂盒进行检测,对结果进行统计分析,评价各方法的诊断效能。通过受试者工作特征(ROC)曲线寻找各方法最佳诊断界值。采用胶体金免疫渗滤斑点法(DIGFA)对酶联免疫吸附法(ELISA)或胶体金免疫层析法(GICA)所得检测结果低于最佳诊断界值的阳性样本进行重新测定,以DIGFA法最佳诊断界值为结果判定标准。比较结果优化前后的诊断效能。结果显示,3种诊断方法的灵敏度在90.8%~94.3%之间,特异度在75.7%~83.3%之间。ROC曲线所得最佳诊断界值均高于试剂盒的cutoff值。检测结果经优化后,灵敏度保持在90.3%以上,特异度提升至88.5%以上。结果表明,3种诊断方法的特异度均不理想,本次研究通过对检测结果的优化判定,在不影响灵敏度的前提下可减少该部分血清假阳性结果的误判,提高方法的特异度,为包虫病临床诊断提供更为可靠的信息。

抗双链DNA抗体不同检测方法的对比分析及临床应用研究

目的探讨胶体金斑点法(DIGFA)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体的临床应用价值。方法采用DIGFA法和ELISA法同时检测系统性红斑狼疮(SLE)患者(n=80)及健康对照者(n=50)血清中抗dsDNA抗体。并将ELISA法的定量检测结果与SLE患者的临床指标进行相关分析。结果 ELISA法检测抗dsDNA抗体的特异性、阳性预测值均高于DIGFA法,但敏感性略低于后者。ELISA法检测的抗dsDNA抗体水平与SLE患者疾病活动性指数、血沉、血清C3及24小时尿蛋白定量结果呈明显相关性。结论 ELISA法检测抗dsDNA抗体水平较DIGFA法准确性更高,并且是监测SLE病情转归的重要实验室指标之一。

三种检测方法检测抗dsDNA抗体的临床意义

目的探究将绿蝇短膜虫间接免疫荧光法、欧蒙酶免疫斑点法以及胶体金快速斑点法应用于检测抗双链DNA(dsDNA)抗体中的效果。方法120例系统性红斑狼疮患者,根据病情不同分为疾病活动组及疾病稳定组,每组60例;同时选取60例健康体检者作为对照组。分别采用绿蝇短膜虫间接免疫荧光法、欧蒙酶免疫斑点法以及胶体金快速斑点法对三组研究对象的抗双链DNA抗体进行检测,分析三种检测方式的检测阳性率。结果绿蝇短膜虫间接免疫荧光法对疾病活动组患者抗双链DNA抗体的检测阳性率为95.00%(57/60),对疾病稳定组患者的检测阳性率为71.67%(43/60),对对照组的检测阳性率为5.00%(3/60);欧蒙酶免疫斑点法对疾病活动组患者抗双链DNA抗体的检测阳性率为76.67%(46/60),对疾病稳定组患者的检测阳性率为61.67%(37/60),对对照组的检测阳性率为10.00%(6/60);胶体金快速斑点法对疾病活动组患者抗双链DNA抗体的检测阳性率为80.00%(48/60),对疾病稳定组患者的检测阳性率为65.00%(39/60),对对照组的检测阳性率为8.33%(5/60)。三种检测方法对疾病活动组患者抗双链DNA抗体的检测阳性率高于疾病稳定组、对照组,疾病稳定组高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);绿蝇短膜虫间接免疫荧光法对系统性红斑狼疮患者抗双链DNA抗体的检测阳性率为83.33%(100/120),均高于欧蒙酶免疫斑点法的69.17%(83/120)、胶体金快速斑点法的72.50%(87/120),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论三种诊断方式对于抗双链DNA抗体均具有较高的诊断阳性率,并且在对患者的各个时期进行诊断时,产生的诊断效果较为良好,而三种诊断方式应用于患者的诊断中,可以选择联合诊断,这样有助于避免误诊或者漏诊。