核桃青皮提取物对苹果斑点落叶病菌抑菌活性研究

【目的】采用不同提取剂提取核桃果实青皮,研究核桃青皮提取物对苹果斑点落叶病菌的抑菌活性,为核桃青皮资源的再利用提供理论支持。【方法】以苹果为试验材料,选用不同浓度梯度(25%、50%、75%、100%)的不同溶剂(乙醇、乙酸乙酯、石油醚、甲醇)对果实成熟期的核桃青皮进行浸提,测定核桃青皮提取物对苹果斑点落叶病菌生长的影响。【结果】结果表明,在离体抑菌试验中,使用浓度为0.625、1.25、2.5、5、10 mL/L的核桃青皮提取物均对苹果斑点落叶病菌表现出抑菌效果,以50%甲醇提取物在浓度为5 mL/L时的抑制效果最显著,抑制率高达80.71%,EC_(50)值为0.001 643 6。【结论】试验可为核桃青皮提取物防治苹果斑点落叶病菌研究提供依据,为核桃青皮资源的再利用提供理论支持。

戊唑醇对苹果斑点落叶病菌及轮纹病菌的毒力和药效评价

采用菌丝生长速率法测定了戊唑醇对苹果斑点落叶病菌Alternaria mali和苹果轮纹病菌Physalospora piricola的毒力并进行了田间药效试验。室内测定结果表明：戊唑醇抑制苹果斑点落叶病菌菌丝生长的EC50和EC90值分别为0.034和0.587μg/mL,抑制苹果轮纹病菌菌丝生长的EC50和EC90值分别为0.019和0.394μg/mL。43%戊唑醇悬浮剂61-86mg/L（5 000-7 000倍液）对苹果斑点落叶病的防效为84.6%-88.8%,108-143mg/L（3 000-4 000倍液）对苹果轮纹病的防效为73.8%-86.4%,且该药剂在本试验剂量范围内对苹果树安全。

多菌灵与代森锰锌混配对梨黑星病菌和苹果斑点落叶病菌的增效研究

采用孢子萌发法和生长速率法分别测定了多菌灵与代森锰锌混配对梨黑星病菌和苹果斑点落叶病菌的增效作用。结果表明 ,5种不同比例的多菌灵与代森锰锌混配制剂对 2种病原菌均具有显著增效作用 ,多菌灵∶代森锰锌为 1∶ 1～ 1∶ 4的混配组合均表现出协同增效作用 ,SR值均 >1.5 ,仅 1∶ 5的混配组合 SR值 <1.5 ,表现为相加作用。研究结果初步还表明 ,病原菌抗药性水平愈高 ,混剂增效比率值越大 ,增效作用越显著。从降低产品的生产成本和克服病菌的抗药性方面考虑 ,应以 1∶ 1～ 1∶ 3的配比组合较为合理。

9种杀菌剂对苹果斑点落叶病菌和轮纹病菌的毒力比较

在室内比较测定了己唑醇等9种杀菌剂对苹果斑点落叶病菌和苹果轮纹病菌的抑菌毒力。结果表明:苹果斑点落叶病菌对三唑类杀菌剂己唑醇、戊唑醇、腈菌唑、氟硅唑和苯醚甲环唑的敏感性依次下降,EC50值均在1μg/mL以下,EC90值均低于10μg/mL;上述药剂与异菌脲的毒力相当,高于多氧霉素。苹果轮纹病菌对供试5种三唑类杀菌剂的敏感性略低于斑点落叶病菌,其中仍以己唑醇毒力最高,其次是戊唑醇、氟硅唑、腈菌唑、苯醚甲环唑,异菌脲与苯醚甲环唑的毒力水平相当,表明上述药剂对轮纹病有兼治作用,而多氧霉素对该病菌的毒力相对较低。2种病菌对甲氧基丙烯酸酯类的醚菌酯敏感性均较低,而硫酸铜的抑菌毒力最低。

苹果斑点落叶病菌的分离及其对杀菌剂的敏感性

为明确苹果斑点落叶病菌的抗药性现状,采用组织分离法从罹病苹果叶片分离出病原菌,并测定了其对四种杀菌剂的敏感性。结果表明:苹果斑点落叶病菌对扑海因、速克灵和乙磷铝相对较敏感,其平均EC50值分别为0 2885μg·mL-1、1 2483μg·mL-1和5 9912μg·mL-1;而对代森锰锌相对不敏感,平均EC50达40 4997μg·mL-1。

苹果感染斑点落叶病菌后几种酶活性的变化

研究了苹果品种秦冠(高抗)和富士(高感)接种斑点落叶病菌(A lternaria a lternata f.sp.m a li)后叶片内5种酶活性的变化。结果表明,苹果接种斑点落叶病菌后超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和多酚氧化酶(PPO)变化趋势相似,都是先升高后降低;苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)活性变化差别较大,秦冠的POD活性峰值是富士的182%,PAL活性峰值是富士的478%,均达到极显著差异。初步认为PAL和POD在抗斑点落叶病中有很大的作用。

苹果斑点落叶病菌形态及侵染行为的超微结构研究

利用电子显微镜技术，对分离培养的苹果斑点落叶病病原菌及其在寄主细胞组织中的侵染行为进行了观察研究。结果表明，菌丝体在生长旺盛期，寄主细胞中含有丰富的细胞器，生长后期，细胞内出现质膜内陷及分泌小泡。分生孢子梗和分生孢子细胞中则储存了大量脂滴状物质，并且细胞壁加厚。其侵染机制是以病原菌产生的寄主特异性毒素为始动因子，使寄主细胞受到某种生理障碍后，菌丝直接由细胞壁侵入细胞内部和叶片中。

苹果斑点落叶病菌抗戊唑醇突变体细胞膜透性及麦角甾醇含量研究

为明确苹果斑点落叶病菌抗戊唑醇突变体的生理生化特性,探讨其抗性机理,比较了敏感菌株和抗性突变体的渗透压敏感性、细胞膜透性及药剂处理后细胞内甾醇含量的差异。结果表明:1)敏感菌株与各抗性突变体对不同渗透压的敏感性没有规律性,且突变体抗性水平与渗透压敏感性之间没有直接联系;2)戊唑醇处理后各菌株之间电导率的变化表明,低抗菌株细胞膜透性较敏感菌株低,而中抗菌株膜透性则较敏感菌株高,能在相同时间内渗出更多电解质;3)细胞内麦角甾醇含量测定结果表明,药剂处理后,敏感菌株甾醇含量显著降低,低抗菌株甾醇含量没有显著变化,而中抗菌株甾醇含量显著升高。研究结果表明苹果斑点落叶病菌对戊唑醇产生抗药性时,伴随其他理化特性的改变,为进一步研究该病菌对戊唑醇的抗药性奠定了基础。

基于Eaxent生态位模型预测苹果斑点落叶病菌在云南省的潜在分布

[目的]了解苹果斑点落叶病菌(Alternaria mali Roberts)在云南省的适生区范围。[方法]利用苹果斑点落叶病菌在云南省的分布点数据和环境数据建立了Maxent生态位模型,并通过将其投影到地理空间预测了该病菌在云南省的潜在分布范围。[结果]苹果斑点落叶病菌在云南的潜在分布区为云南省中部和北部的大部分地区。最冷月份最低温对该病原菌的预测分布有重要影响,最冷季度平均温度次之。经ROC曲线分析法验证得出AUC值为0.998,表明预测结果是可靠的。[结论]为防止苹果斑点落叶病菌的传播和科学评估其危害提供了参考。

聚六亚甲基双胍盐酸盐与氟环唑对苹果斑点落叶病菌的联合毒力

为明确聚六亚甲基双胍盐酸盐(Polyhexamethylene biguanidine hydrochloride,PHMB)与氟环唑(epoxiconazole)混配对苹果斑点落叶病菌(Alternaria alternata f.sp.mali)的联合作用类型及最佳配比,本研究采用菌丝生长速率法测定了聚六亚甲基双胍盐酸盐与氟环唑混配对苹果斑点落叶病菌的毒力。结果显示:聚六亚甲基双胍盐酸盐、氟环唑对苹果斑点落叶病菌的EC50分别为30.604、0.621 mg/L,二者以10:1、7:1、4:1、1:1、1:4、1:7、1:10这7个配比混合对苹果斑点落叶病菌的增效系数分别为1.41、1.55、1.59、1.57、1.09、1.12和1.14。氟环唑对苹果斑点落叶病菌的室内生物活性明显高于聚六亚甲基双胍盐酸盐。聚六亚甲基双胍盐酸盐与氟环唑以7:1、4:1、1:1这3个配比组合的增效系数均大于1.5,它们对苹果斑点落叶病菌均有增效作用。

醚菌酯和百菌清的混配对苹果斑点落叶病菌的毒力测定

采用菌丝生长速率法测定了7种复配剂(30%醚菌酯和95.2%百菌清按照不同体积混配,其浓度梯度均为0微克/毫升、0.1微克/毫升、1微克/毫升、5微克/毫升、10微克/毫升、50微克/毫升)对苹果斑点落叶病菌进行毒力测定。结果表明:相对于醚菌酯或百菌清单剂,混配后均表现出增效作用,其中醚菌酯和百菌清按照体积比为3∶1的增效作用最为明显,EC50为1.4716微克/毫升,共毒系数为410.12。因此在对苹果斑点落叶病菌的防治中,建议使用醚菌酯与百菌清混配药剂防治效果最佳。

生防菌BS-315对苹果斑点落叶病菌的防治作用

[目的]研究生防菌BS-315对苹果斑点落叶病菌(Alternaria mali)的抑菌活性、在苹果叶片上的定殖能力以及一些化学农药对生防菌的影响。[方法]采集松本锦苹果健叶,进行离体叶片试验、定殖试验,并进行不同农药对生防菌的影响试验。[结果]枯草芽孢杆菌BS-315对苹果斑点落叶病菌表现出较强的抑制作用,在叶片上涂抹菌体1 d后接病原菌,3 d后抑制效果在90%以上。BS-315能够在松本锦苹果叶片中定殖,定殖量在接种3 d后最大。4种杀菌剂浓度均为田间使用浓度,其中嘧菌酯和多抗霉素对BS-315的生长有一定的促进作用,而多菌灵和丙环唑则完全抑制BS-315的生长。[结论]该研究可为生防制剂的研发和合理使用提供理论依据。

酚菌酮铜络合物的合成及其对苹果斑点落叶病菌的生物活性研究

该研究以酚菌酮、氯化铜和氨水为主要原料,合成了酚菌酮铜络合物,收率97.6%;采用生长速率法(平皿法)研究酚菌酮铜络合物对苹果斑点落叶病菌生长抑制作用。结果表明,酚菌酮铜络合物对苹果斑点落叶病菌有较高的毒力,使用浓度以400~500mg/L为宜。

异菌脲与戊唑醇、吡唑醚菌酯复配对苹果斑点落叶病菌的联合毒力

为了筛选异菌脲与戊唑醇、吡唑醚菌酯对苹果斑点落叶病菌(Alternaria mali)毒力增效的最佳配方,采用菌丝生长速率法测定异菌脲与戊唑醇、异菌脲与吡唑醚菌酯不同比例混剂对苹果斑点落叶病菌的毒力,并通过田间试验验证。室内毒力测定结果表明:异菌脲与戊唑醇质量比4∶1对抑制菌丝生长为增效作用,增效系数为1.57,其他配比均表现为不同程度的相加作用;异菌脲与吡唑醚菌酯的混剂对苹果斑点落叶病菌均表现为相加作用。田间防效试验结果表明,异菌脲与戊唑醇质量比4∶1的复配剂对苹果斑点落叶病防效为70.77%~78.90%,与单剂相比防治效果更好,并且用药量更低。

不同矿物源药剂对苹果斑点落叶病菌室内防效评价

【目的】筛选低毒且不易产生抗药性的矿物源药剂.【方法】试验采用菌落生长速率法和离体叶片接种法,测定了4种矿物源药剂对苹果斑点落叶病菌的抑制作用和对离体叶片的保护效果.【结果】4种矿物源药剂对苹果斑点落叶病菌生长均具有一定的抑制作用.处理后第5天,当氧化亚铜质量浓度为0.17μg/mL时对苹果斑点落叶病菌的抑制效果最好,抑菌率高达93.38%;氢氧化铜和波尔多液抑制效果次之;硫酸铜钙效果最差,其质量浓度为1.28μg/mL时抑制率为81.22%.离体叶片试验结果表明,氧化亚铜保护效果最佳,处理10 d后对苹果斑点落叶病保护效果高达92.35%.【结论】综合4种药剂对菌落的抑制效果和对离体叶片的保护效果,氧化亚铜可作为防治苹果斑点落叶病的最佳矿物源药剂.

苹果斑点落叶病菌对戊唑醇敏感基线建立及抗性突变体适合度

本研究测定了苹果斑点落叶病菌对戊唑醇的敏感性,并建立了敏感基线;在此基础上,室内筛选获得了9株抗戊唑醇突变体,对其适合度进行了测定,为指导戊唑醇防治苹果斑点落叶病提供理论依据。在山西省5个地市未使用过戊唑醇及同类药剂的果园中采集分离得到64株苹果斑点落叶病菌,敏感性测定结果表明,其EC50值在0.768 7~2.673 8μg·mL^(-1)之间,平均值为1.622 4±0.558 2μg·mL^(-1),呈连续性单峰曲线,可作为苹果斑点落叶病菌对戊唑醇的相对敏感基线。通过紫外线(UV)诱导获得低抗突变体6株,药剂驯化获得中抗突变体3株。2株中抗突变体抗药性可稳定遗传;低抗突变体在无药剂胁迫时,药剂敏感性上升。抗性突变体适合度测定结果显示,突变体菌丝生长速率、产孢量、孢子萌发率及分生孢子竞争力均低于敏感菌株。突变体在无药情况下致病力比敏感菌株弱。

几种杀菌剂对苹果斑点落叶病菌的室内毒力及田间防效

测定了14种杀菌剂对苹果斑点落叶病菌的室内毒力,选出抑菌效果较好的5种进行田间药效试验,最终确定对苹果斑点落叶病有较好防效的杀菌剂。10%苯醚甲环唑WG、10%己唑醇ME、50%异菌脲WP、43%戊唑醇SC对菌丝生长有明显的抑制作用;60%吡唑醚菌酯.代森联WG、70%丙森锌WP、3%多抗霉素WP对孢子萌发有较强的抑制作用;3%多抗霉素WP和50%异菌脲WP在保定清苑和望都两地田间试验中表现出良好的防效。研究表明,3%多抗霉素WP和50%异菌脲WP对苹果斑点落叶病防效显著,可作为防治该病的首选药剂。

苹果叶片受斑点落叶病菌侵染过程中细胞Ca^(2+)定位及MdCPK的表达

以苹果感病品种‘红星'和抗病品种‘红玉'为材料,研究了苹果与斑点落叶病菌(Alternaria alternata apple pathotype)互作过程中超微结构,细胞Ca^(2+)分布,以及在钙信号转导途径中具有重要作用的钙依赖蛋白激酶基因(CDPK)的表达,探讨钙信号在苹果防御斑点落叶病菌侵染中的作用。结果表明,在未接种状态下,叶肉细胞结构完好,叶绿体呈卵圆形沿细胞边缘排列,Ca^(2+)主要分布在细胞间隙和液泡中,‘红玉'细胞间隙Ca^(2+)密度比‘红星'大。接种斑点落叶病菌8h,‘红星'叶肉细胞中的Ca^(2+)沉淀主要分布在胞质中,而液泡等细胞器中减少;‘红玉'的Ca^(2+)沉淀主要集中在胞质和筛管分子中,液泡和细胞间隙中减少,且趋向于在细胞壁外围和液泡膜上沉积。接种18 h,‘红星'叶肉细胞间隙Ca^(2+)沉淀密度增加,而‘红玉'中的Ca^(2+)沉淀主要集中在叶肉细胞的胞质和液泡,以及筛管分子中。接种24 h,‘红星'叶肉细胞结构已发生形变,质膜发生裂解,筛管壁木质化加厚,Ca^(2+)沉淀主要分布在液泡中;‘红玉'叶片细胞结构完好,Ca^(2+)沉淀主要分布在液泡和胞质中。接种36 h,‘红星'叶肉细胞受到菌丝入侵,结构和形态遭到破坏,在未受损叶肉细胞中Ca^(2+)沉淀主要集中在液泡中,在受损的细胞中Ca^(2+)沉淀无序地散布在受损细胞周围及细胞间隙;此时‘红玉'叶肉细胞中Ca^(2+)沉淀主要集中在胞质和液泡中,并且能够保持Ca^(2+)动态平衡。在接种后不同阶段,‘红星'和‘红玉'叶片中MdCPKs基因呈现不同的表达特点:大多MdCPKs在‘红玉'中的表达量在24 h达到最高值;‘红星'中在36 h达到表达峰值,且表达量也比‘红玉'中低得多。上述结果表明,钙信号响应斑点落叶病菌侵染,在抗病苹果品种‘红玉'中,Ca^(2+)内流是细胞质Ca^(2+)上升的主要来源;在感病品种‘红星'中,细胞器Ca^(2+)释放是细胞质Ca^(2+)的主要来源。‘红玉'苹果MdCPKs基因响应病菌侵染比‘红星'苹果早而且强烈。

水杨酸和壳聚糖诱导苹果叶片对斑点落叶病抗性的研究

采用喷雾接种的方法测定了不同浓度的水杨酸和壳聚糖对苹果斑点落叶病菌(Alternaria mali Roberts)的室内抑菌作用、诱导抗病效果及诱导苹果叶片后各种抗病性物质含量的变化。结果表明,不同浓度的水杨酸和壳聚糖对A.mali均无明显的抑制作用,其中100μg/mL的水杨酸和500μg/mL的壳聚糖对A.mali的抑制率较低,仅为5.33%和4.73%,但诱导抗病效果较显著,分别达到70.90%和77.77%。两种药剂诱导叶片后,叶片中POD、PAL活性以及木质素积累量明显高于对照,且随时间的增长,POD和PAL酶活性先升高后降低,在第3天,POD和PAL酶活性均达到峰值;而壳聚糖诱导后PPO活性随时间的增长呈升高的趋势,但水杨酸对PPO酶活性变化的影响较小。

苹果内生细菌动态分布及其对斑点落叶病的拮抗作用

采用常规分离法对不同生长季节苹果树的不同部位进行了内生细菌分离.结果表明,内生细菌的分离几率和数量不同.通过平板对峙培养和发酵液抑菌活性测定,在所分离的118个菌株中,筛选出7株对苹果斑点落叶病菌(Alternaria alternata f. sp. Mali)具有较强拮抗作用的菌株,其中菌株B86和B91的发酵滤液在活体上对苹果斑点落叶病的防治效果显著,分别为73.72%和75.32%.两菌株培养滤液对病菌分生孢子萌发具有抑制作用,并造成芽管畸形膨大,呈泡囊状,泡囊消解破裂;两菌株产生的抑菌物质具有热稳定性.表明B86和B91菌株具有一定的生防潜力.