用斑点酶免疫法诊断孕妇巨细胞病毒感染

用斑点酶免疫法诊断孕妇巨细胞病毒感染俞红吉①潘培根①吴泰相①曾蓉②彭先凤②杨继虞②血清中人巨细胞病毒的ＩｇＧ型抗体（ＨＣＭＶ－ＩｇＧ）的检测，对孕妇巨细胞病毒感染的诊断十分重要。目前用微孔板ＥＬＩＳＡ检测血清中的（ＨＣＭＶ－ＩｇＧ）诊断孕妇的巨细胞病...

硝酸纤维素膜上化学药物交联抗原在斑点酶免疫法中的应用

在硝酸纤维素膜上用４０％酒精直接交联方式和自然渗滤吸附方式固定抗原后，分别作斑点酶免疫法检测血清中的ＨＣＭＶＩｇＧ。结果显示：前者的重复性（ＣＶ＝６７％）优于后者（ＣＶ＝２５５％）。酒精交联抗原斑点酶免疫法与ＥＬＩＳＡ法比较，血清中ＨＣＭＶＩｇＧ检测的一致率为９３２％，阳性血清、弱阳性血清和阴性血清的检测率无显著性差异。以ＥＬＩＳＡ法为金标准，酒精交联抗原班点酶免疫法的敏感性、特异性、诊断指数和诊断效率分别为１００％、９６６％、１９６６％和９８７％，这些质量指标均达到实际应用标准。酒精交联抗原操作简便，快速，重复性好，节省材料，质量指标高。

基因重组HCV抗原斑点酶免疫法检测血清中抗-HCV

目的 建立检测抗 - HCV的斑点酶免疫法。方法 将基因重组 HCV核心、NS3/NS4 、NS5抗原和马抗人 Ig G、人 Ig G以最佳浓度固定在硝酸纤维膜条带上 ,用辣根过氧化酶和改进的底物进行斑点酶免疫反应。结果 检测了 1 4份经 ORTHO第三代抗 - HCV EL ISA检测的血清 ,符合率为 1 0 0 % ;72份经UBI第三代抗 - HCV ELISA监测的血清 ,符合率 95.83% ;1 0 3份经国产厦门新创抗 - HCV EL ISA监测的血清 ,符合率 95.1 4%。 54份自然人群血清 ,阳性率 3.47%。 89份阳性标本中 ,三种抗体同时阳性的占30 .34% ,两种抗体阳性占 69.66% ,没有检出单一抗体阳性标本。核心抗体检出率最高 87.64% ,NS3/NS4 抗体次之 76.40 % ,NS5抗体最低 61 .80 %。结论 用基因重组抗原建立的斑点酶免疫法与国内外广泛应用的 ELISA试剂有较高的符合率 ,对进一步研究 HCV感染诊断的确认试剂有意义。

单抗免疫酶斑点法检测GGT-Ⅱ在肝癌诊断中的价值

背景与目的:肝癌特异性γ-谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ(gamma-glutamyltransferaseisoenzymeⅡ,GGT-Ⅱ)被认为是甲胎蛋白(AFP)以外的最佳肝癌标志物,但目前尚无简便的检测方法。本研究目的是探讨单克隆抗体免疫酶斑点法检测GGT-Ⅱ对肝细胞癌的诊断价值。方法:纯化GGT-Ⅱ同工酶,免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用免疫酶斑点法与电泳法同步检测123例肝癌和164例不同良性肝病患者血清中GGT-Ⅱ。结果:单克隆抗体免疫酶斑点法检测GGT-Ⅱ对肝细胞癌的诊断阳性率(71.5%)与电泳法(76.4%)相比无明显差异。但免疫酶斑点法假阳性率(肝硬化23.7%,慢性肝炎27.1%)高于电泳法(肝硬化10.0%,慢性肝炎8.4%)。结论:单克隆抗体免疫酶斑点法检测GGT-Ⅱ对肝细胞肝癌诊断有一定价值,但诊断特异性有待提高。

酶联免疫斑点法检测鼻咽癌患者放疗前后T细胞对EB病毒肽段的特异性反应

目的用酶联免疫斑点法(ELISPOT法)检测鼻咽癌患者放射治疗前后免疫反应性的变化,寻找与疗效相关的细胞免疫反应指标。方法选择新疆医科大学附属肿瘤医院2007年6月～2008年12月由病理确诊的鼻咽癌初治患者41例,用ELISPOT法检测放射治疗前及治疗后3月患者外周血中CTL细胞对LMP1、LMP2、EBNA1和EBNA3多肽反应性的差异,并分析其与近期疗效的关联性。结果放射治疗后CR36例,PR4例,PD1例;放射治疗后3月,外周血中对LMP1抗原多肽产生特异性反应的CTL细胞频数显著增加(P=0.004),对LMP2、EBNA1和EBNA3多肽反应性无统计学意义。不同疗效组之间放射治疗前后对LMP1抗原多肽产生特异性反应的CTL细胞频数差异有统计学意义。结论鼻咽癌患者放射治疗前及放射治疗后3月,应用ELISPOT法,检测外周血LMP1抗原相关多肽的变化可能有助于临床疗效的判定,为今后个体化免疫治疗方案的实施提供实验室依据。

斑点酶免疫渗滤法定量检测雌三醇的实验研究

目的 制备高特异性的抗雌三醇（E3）单克隆抗体（mAb）, 建立操作简便、敏感、快速适用于基层使用的E3检测方法。方法 采用活化酯法制备偶联物E3-HRP、E3-BSA、3-OVA。应用mAb技术制备抗E3的mAb; 以硝酸纤维素膜为固相载体, 抗E3 mAb为包被抗体, 建立竞争抑制模式的斑点酶免疫渗滤法。结果 筛选出5株可分泌特异性抗E3 mAb的杂交瘤细胞株。mAb效价为1×10^5～5×10^5, 亲和常数为5.1×10^8～5.2×10^9 L/mol。检测敏感度为2 ng/mL, 检测范围2～200 ng/mL。结论 建立了检测速度快、灵敏度高、应用方便的斑点酶免疫渗滤法。

酶联免疫斑点法检测慢性乙型肝炎患者HBcAg特异性分泌γ-干扰素细胞及其临床意义

目的观察免疫应答不同期的慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血中HBcAg特异性γ-干扰素（IFNγ）分泌细胞数，探讨其在评价患者体内非溶细胞机制清除乙型肝炎病毒（HBV）能力中的临床意义。方法采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测83例免疫耐受期、49例免疫清除期患者和18名健康人HBcAg特异性IFNγ分泌细胞。结果健康人HBcAg特异性IFNγ分泌细胞数为11—19个／4×10^5个外周单个核细胞（PBMC），62．2％的免疫耐受期CHB患者低于正常值，44．9％的免疫清除期CHB患者高于正常值。HBcAg特异性IFNγ分泌细胞数与HBV DNA水平未发现有相关性，而HBcAg特异性IFNγ分泌细胞数与HBeAg S／N值在一定范围内有正相关趋势。13例免疫耐受期患者经乙型肝炎疫苗及草分枝杆菌制剂治疗3—6个月后，12例患者HBcAg特异性IFNγ分泌细胞数有不同程度提高。结论采用ELISPOT测定HBcAg特异性IFNγ分泌细胞数可从一个侧面反映大多数CHB患者免疫应答能力，并可以作为治疗效果的评价指标。

血清丙型肝炎病毒抗原的免疫酶斑点法检测

目的建立一种可筛查早期HCV感染者的简单快捷方法。方法制备特异性的抗HCV核心蛋白和抗HCVNS3的单克隆抗体(mAb)酶标记物,应用免疫酶斑点法检测各种类型肝炎患者和正常人血清中的HCV-Ag,并与双抗体夹心ELISA检测HCV-Ag及RT-PCR检测HCVRNA的结果进行比较。结果免疫酶斑点法检测表明,HCV-Ag的检出率在抗HCV抗体阳性、乙肝和非甲非戊肝炎患者中,分别为15.4%(8/52)、1.73%(19/1099)和1.03%(1/97);在81例甲肝和67例戊肝患者及50例正常人中均未检出。免疫酶斑点法与双抗体夹心ELISA及RT-PCR的检测的结果没有显著性差异,但其与RT-PCR检测结果有一定的相关性。结论免疫酶斑点法特异性强,操作简便快捷,不需要特殊仪器设备,为HCV的早期诊断和常规筛查提供了有效的方法。

酶联免疫斑点法诊断结核性脑膜炎临床研究

目的探讨酶联免疫斑点法(enzyme linked immune spo tassay,ELISpot)对结核性脑膜炎的诊断价值。方法选取我院根据临床表现疑为结核性脑膜炎的患者26例,以ELISpot检测分泌IFN-γ的结核分枝杆菌ESAT-6及CFP-10抗原特异性T细胞水平。结果在所有入组患者中,根据诊断标准,明确诊断为结核性脑膜炎者15例,诊断为非结核性中枢神经系统感染者11例,ELISpot检测的敏感度为80.00%[95%可信区间(confidence interval,CI)51.9%～95.7%],特异度为100%(95%CI71.5%～100.0%);阳性预测值为100%(95%CI73.5%～100.0%),阴性预测值为78.6%(95%CI49.2%～95.3%)。结论ELISpot对结核性脑膜炎有较高的诊断价值。

初探酶联免疫斑点法检测T细胞免疫功能质控要点

恶性肿瘤逐渐成为影响人类健康的主要因素，在传统治疗手段的基础上，人们开始关注免疫功能在疾病发生过程中的变化情况，而肿瘤细胞在人体中的免疫反应主要以细胞免疫为主，如何高效、准确地检测特异性细胞免疫功能的变化成为研究的热点［1］。在诸多的免疫检测方法中，酶联免疫斑点法（ELISPOT）由于其灵敏度高、特异性强、操作简便而受到重视。该方法可以有效检测特异性抗体分泌细胞的数量和功能，可以在单细胞水平测定分泌特定细胞因子的功能和细胞数量，广泛应用于人类免疫缺陷病毒疫苗、病毒感染相关疾病及肿瘤等方面的研究中［2‐5］。目前本实验室应用ELISPOT 技术检测 EB 病毒（EBV）感染的鼻咽癌患者放射治疗前后特异性T 细胞免疫功能的变化情况，筛选特定的多肽，并致力于为生物治疗提供临床依据，已经取得初步的结果［6‐7］。由于ELISPOT 技术的高敏感性，实验的结果容易受到诸多因素的影响，为了得到真实、准确的结果，严格规范实验流程，加强实验室的质量控制是确保实验结果的关键。经过近年来对ELISPOT 技术的应用及总结，现将ELISPOT 技术的质控要点总结如下。

免疫酶斑点法快速检测小鹅瘟病毒

至今,有关小鹅瘟病毒(GPV)的快速诊断尚未找到一种较为理想的方法,Malkinson(1974)和Peleg(1974)发现牛精子能被GPV所凝集,但为非特异反应,难以说明问题;Dosz-kow,K.I.等(1982)用酶组化法技术测定细胞培养和小鹅组织中的抗原;Bondarerke(1982)用免疫扩散技术测定鹅胚绒毛尿囊液中的抗原,然而,前者所用的抗体是常规血清,非特异性反应较强,后者需高效价血清及多倍浓缩的尿囊液,且灵敏度不高,这些方法在实际应用上均有一定的困难。1981年徐为燕等和1989年孙怀昌等用反向间接血凝技术检测鹅胚尿囊液及组织中的GPV。

诊断结核感染的新方法——酶联免疫斑点法技术

酶联免疫斑点法(ELISPOT)技术作为一种新的免疫学检测方法用于结核感染的诊断,其主要原理是应用结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6与CFP-10刺激患者外周血T淋巴细胞使T细胞活化释放干扰素γ,根据活化T细胞数来判定是否存在结核感染,此技术因不受机体免疫力及卡介苗接种的影响,而较皮肤结核菌素试验具有更高的特异性及敏感性,现就ELISPOT的技术原理、发展简史、操作步骤及应用进行综述。

应用免疫酶斑点法检测HBsAg

本文用免疫酶斑点法(IEDA)检查血清中HBsAg获得了满意的结果。与Abbott药盒检测结果比较,总符合率为97.2％,灵敏度为93.9％。实验结果证明用硝酸纤维素膜作载体经济、简便、快速,且在膜上显色的结果可长期保存。

酶联免疫斑点法检测鼻咽癌病人特异性细胞毒细胞

目的 了解鼻咽癌病人细胞免疫状况 ,为鼻咽癌的细胞免疫治疗提供实验依据。方法 用酶联免疫斑点法 (Enzyme linkedimmunospotassay ,Elispot)检测 19例鼻咽癌病人及 11例正常人EB病毒LMP2 (EBV LMP2 )特异性细胞毒细胞 (CTL)。结果 鼻咽癌病人组仅部份肽特异CTL阳性 4例 ,全部肽特异CTL无一例阳性 ,阳性率 2 1%。正常人组全部肽特异CTL阳性 8例 ,部份肽特异CTL阳性 3例 ,阳性率 10 0 %。两组比较 χ2 =17.37,P <0 0 1。结论 鼻咽癌病人对EB病毒特异性细胞免疫功能低下 。

免疫酶斑点法快速诊断小鹅瘟

小鹅瘟的实验诊断方法较多，但都存在各自的优缺点。黄牛精子能被ＧＰＶ所凝集，但该凝集属于非特异性的，难以说明问题。琼脂扩散试验，灵敏度不高且需要高效价抗血清及多倍浓缩尿囊液。免疫荧光诊断法虽快速、敏感、特异，但需要有荧光显微镜，现阶段难于常规应用。因此...

超声造影联合酶联免疫斑点法在附睾结核早期诊断中的临床应用

目的:探讨超声造影联合酶联免疫斑点法在附睾结核早期诊断中的应用价值。方法:对123例手术治疗且病理结果证实为附睾结核的患者进行回顾性分析,分为酶联免疫斑点法组(59例)和超声造影联合酶联免疫斑点法组(64例),分析超声造影联合酶联免疫斑点法在附睾结核早期诊断中的临床价值。结果:酶联免疫斑点法检查阳性率72.9%(43/59),超声造影联合酶联免疫斑点法检查阳性率92.2%(59/64)。结论:超声造影联合酶联免疫斑点法检查能提高附睾结核的早期诊断水平,可为早期治疗提供一定的依据。

甲型流感病毒核壳蛋白在BALB/c小鼠中酶联免疫斑点法表位的筛选及其与CTL表位的相关性研究

目的:利用甲型流感病毒A/Johannesburg/33/94(H3N2)核壳蛋白(NP)全长肽库筛选BALB/c(H-2d)小鼠中NP酶联免疫斑点法(ELISPOT)表位,研究其和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位的一致性关系,为使用ELISPOT评价流感病毒NP疫苗的细胞免疫效果提供实验依据。方法:以甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)(PR8)感染BALB/c(H-2d)小鼠后,通过检测T细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)的ELISPOT法和体内CTL法检测NP所诱发的细胞免疫反应,综合分析ELISPOT和CTL表位肽之间的关系。结果:Pep36(NP第141～155位氨基酸残基,SNLNDTTYQRTRALV)和Pep37(NP第145～159位氨基酸残基,DTTYQRTRALVRTGM)可以诱发较强的ELISPOT反应,根据Pep36和Pep37共有序列合成的Pep147-155(NP第147～155位氨基酸残基,TYQRTRALV)可以诱发与这2条多肽相同强度的ELISPOT反应,表明Pep147-155为NP诱发ELISPOT反应的最强表位,体内CTL也表明它是最强的CTL表位;Pep95(NP第377～391位氨基酸残基,STLELRSRYWAIRTR)、Pep96(NP第381～395位氨基酸残基,LRSRYWAIRTRSGGN)和其他表位肽诱发的ELISPOT反应较弱,体内CTL反应也较弱。结论:BALB/c(H-2d)小鼠中,甲型流感病毒NP诱发ELISPOT反应和CTL反应的表位肽高度相关;实验结果为使用ELISPOT评价流感病毒NP疫苗的细胞免疫效果提供了实验依据。

酶联免疫斑点法在新发传染病疫苗研究中的应用

酶联免疫斑点法(ELISPOT)是一项具有较高敏感性和特异性的细胞免疫学检测技术,目前常用于疫苗开发中评价疫苗诱发的细胞免疫效应。我们就ELISPOT技术的原理、具体实验操作、技术优势,及其在新发传染病疫苗研究中的应用等进行综述。