斑节对虾杆状病毒(MBV)病诊断研究

对潮阳县古埕村养殖斑节对虾Penaeus monodon的成体病虾在光学显微镜下作病理组织诊断表明,被病原体感染的肝胰脏腺泡管和导管的上皮细胞核肥大,其内包含一些近似圆球形的包涵体,分别用苏木精-曙红、姬姆舍、孚尔根和Brown and Breen's Gram等染色剂作比较染色。致病细胞发育分:(1)指环期;(2)未成熟包涵体期;(3)成熟包涵体期。该病毒包涵体的形状、大小和形成部位、致病细胞发育期和组织病理初步分析等均与Lightner等对斑节对虾杆状病毒(MBV)的描述一致。

斑节对虾杆状病毒(MBV)PCR和核酸探针检测方法的建立与应用

从感染斑节对虾杆状病毒（MBV）的斑节对虾仔虾肝胰腺中纯化MBV，经抽提后以之为模板进行聚合酶链反应（PCR），引物根据苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（AcNPV）多角体蛋白基因序列的高度保守区设计并合成．PCR扩增得到650b单一核苷酸片段．PCR产物部分序列分析表明此PCR产物与AcNPV多角体蛋白基因序列有约60％的同源性．以此650pDNA片段为探针作打点杂交，探针能与受MBV感染的斑节对虾肝胰腺和消化道中抽提的总DNA杂交，不能与其它组织中抽提的总DNA杂交．应用PCR方法检测MBV的组织特异性，得出与打点杂交相同的结果；检测斑节对虾各生长阶段及卤虫感染MBV情况，认为MBV可能为水平传播；PCR检测方法与组织学方法比较，认为前者更加敏感．

斑节对虾杆状病毒的超微结构

应用超薄切片技术，研究班节对虾卵细胞和各变态期病毒及其包涵体的分布和超微结构。在糠虾前期各期未找到病毒，而糠虾后期各期的肝和中肠上皮细胞核中则有典型的病毒及其包涵体存在。这提示着ＭＢＶ可能不经由卵细胞传播给子代。病毒粒子单个散在于核质和包涵体基质中，一端钝圆，另一端稍尖，形似葵花子，而不是如文献所言的长圆柱体，长度２７０—３００ｎｍ，直径平均７５ｎｍ，由囊膜、衣壳和核心三部分组成，囊膜上无纤突。这与文献上报道的斑节对虾杆状病毒（ＭＢＶ）相仿，因此，所观察到的病毒应是ＭＢＶ。这表明ＭＢＶ分布地域波及我国大陆南方沿海。此外，作者所见的核衣壳是偏心位置，而非居中排列，并指出这有利于核衣壳更快进入靶细胞。ＭＢＶ包涵体呈圆形或卵圆形，直径２—９μｍ，外无被膜，基质裸露，是由等达六角形组成的蜂窝状和晶格线彼此平行排列的蛋白质构成。笔者认为这是由于切割平面不同造成。此外，笔者在显微、超微和分子水平上，较详细描述了文献上未报道过的ＭＢＶ包涵体形成过程，指出斑节对虾多角体蛋白颗粒、核型多角体与ＭＢＶ粒子各组份的合成和组装是分别同时进行的，以靶细胞核出现病毒发生基质为开始，以完整ＭＢＶ粒子进入多角体为终止的一个连续过程。

几种理化因子对斑节对虾白斑杆状病毒(WSBV)感染力的影响

将部分纯化的WSBV暴露于不同理化条件下 ,通过人工感染的方法测定WSBV的感染力。结果表明 ,病毒在纯水中1h能保持感染活性,但在3mol/LNaCl的高盐溶液中1h失去感染力 ;WSBV在30℃中4h感染活性丧失 ,在70～90℃中10min均失去感染力 ;当环境 pH值为5以下或12.6以上时 ,WSBV在1h后丧失感染活性 ;NP 40,TritonX 100,ClO2

斑节对虾杆状病毒感染度与水体理化因子关系模型的修订

根据生产实践的观察和水体理化因子与斑节对虾Penaeusmonodon杆状病毒感染度关系的进一步分析 ,对斑节对虾杆状病毒感染度与水体理化因子关系模型进行了修订 。

斑节对虾杆状病毒感染率与感染度的动态变化

应用石蜡切片法调查了不同龄期养殖斑节对虾 (Penaeusmonodon)的斑节对虾杆状病毒 (Penaeusmonodonbaculovirus ,MBV)感染率和感染度 .结果表明 :各龄期养殖斑节对虾的MBV感染率达 10 0 %或接近 10 0 % .MBV感染度以养殖早期较高 (最高可达 142 317‰ ) ,养殖中期下降 (最低为 11 334‰ ) ,养殖后期又呈上升趋势 .这与对虾的免疫状况及环境的改变有关 .

实验感染白斑杆状病毒(WSBV)的斑节对虾血液病理学研究

:用光镜观察经人工感染白斑杆状病毒 (WhiteSpotBaculovirus,WSBV)后患典型白斑病的斑节对虾Penaeusmonodon的血淋巴涂片 ,研究了WSBV导致的淋巴细胞数量及结构异常 ;通过检测感染WSBV后患病虾与健康虾的血清主要生化指标 ,首次揭示了两者的主要差异及WSBV在宿主体内增殖的时间过程。结果表明 :患病虾淋巴细胞明显减少 ,无颗粒细胞难以找到 ,颗粒细胞和小颗粒细胞分别为健康虾的 1 1 .7%和 4% ;颗粒细胞内出现深染区、空白区或异样突起。血涂片上偶尔发现有大型固定性吞噬细胞。在患病虾血清主要生化指标中 ,Ca2 +含量比健康虾显著升高 ,患病虾为 1 5.93mmol·L- 1 ,健康虾为 1 0 .71mmol·L- 1 ;相反 ,患病虾血清中总蛋白 (Tp)、总磷 (PB)及乳酸脱氢酶 (LDH)均比健康虾个体低 ,3者含量依次为 :52 .0 7g·L- 1 ,0 .34mmol·L- 1 和 35.2 7IU·L- 1 ,在健康虾个体血清中为 :66.2 9g·L- 1 ,0 66mmol·L- 1 及 82 .36IU·L- 1 ;而K+,Mg2 +含量无显著差异。血清中Ca2 +,PB及TP的含量可以作为斑节对虾感染WSBV后出现白斑病的血清生化特征。斑节对虾感染WSBV后不同时间内血清主要生化指标显示其增殖的时间顺序可能为 :2 4h内主要进行核酸复制 ,2 4—48h主要进行囊膜蛋白质的合成 ,病毒从入侵宿主细胞到从细?

斑节对虾虾苗白斑综合症杆状病毒的检测和养殖跟踪

利用 2步 PCR检测技术对湛江和阳西地区的虾苗进行白斑综合病杆状病毒 ( WSSV)检测。在仔虾 2日龄最早检测到病毒 ,有 2 5%的虾苗带有 WSSV病毒。带病毒虾苗和不带病毒虾苗分别在不同养殖模式的养殖过程中跟踪。前者在湛江湖光镇普通虾塘跟踪养殖 ,它们在变化的环境中容易发病 ,p H、盐度和温度是重要的诱发因子 ,在养殖 50～ 60 d时发病死亡 ;后者在高位池和普通池养殖跟踪 ,它们对变化的环境有较大的适应性 ,养殖时间为 80～ 1 1 0 d,在相对优良的养殖技术条件下大部分可望养殖成功。环境中有 WSSV病原传入 ,不带病毒虾苗在养殖后期可以带有 WSSV病毒 ,出现白斑虾。跟踪的普通池有爆发病害 ,但是时间延后 ,跟踪的高位池没有爆发病害。

斑节对虾杆状病毒病的药物防治研究

通过广东省廉江市龙营围对虾养殖场的现场试验 ,对 3种防治虾病的药物进行了比较研究 .结果显示 ,各处理组斑节对虾杆状病毒 (Penaeusmonodonbaculovirus ,MBV)感染率与用药前及对照组比较均无显著性差别 (P >0 0 5) .MBV感染度各处理组与用药前及对照组比较均有显著性差异 (P <0 0 5～P <0 0 0 1) .其中以 2号药物的作用较明显 ,但各处理组之间无显著性差别 (P >0 0 5) .对照组与用药前比较无显著性差别 (P >0 0 5) .研究表明 ,3种药物均能降低MBV的感染度 ,起到预防MBV病发作的作用 .鉴于 2号药物价格较昂贵 ,而 1号药物和维生素C则药源丰富 ,价格便宜 ,其作用和 2号药物无显著性差别 ,故主张 1号药物和维生素C合用 ,作为预防MBV病发作的首选药 .

斑节对虾杆状病毒与肝胰腺细小样病毒在三种对虾中的感染率

应用石蜡切片技术对斑节对虾杆状病毒（ Ｍ Ｂ Ｖ） 和肝胰腺细小样病毒（ Ｈ Ｐ Ｖ） 在斑节对虾、日本对虾和中国对虾中的感染情况进行了研究结果表明： Ｍ Ｂ Ｖ 在斑节对虾的仔虾、稚虾及养成期虾中的感染率均接近１００ ％ ；在日本对虾养成期虾中平均感染率为７５０ ％ ；中国对虾仔虾未检出 Ｍ Ｂ Ｖ 包涵体 Ｈ Ｐ Ｖ 在中国对虾仔虾中感染率为５６００ ％ ；在斑节对虾仔虾中感染率为２８７５ ％ ，稚虾为３６１１ ％ ，养成期虾平均为６５２５ ％ ；日本对虾养成期虾的平均感染率为２０００ ％  Ｍ Ｂ Ｖ 与 Ｈ Ｐ Ｖ 在斑节对虾中可出现合并感染的情况，其合并感染率为：仔虾２８５７ ％ ，稚虾３５６８ ％ ，养成期虾６４５４ ％ 日本对虾和中国对虾中未发现 Ｍ Ｂ Ｖ 与 Ｈ Ｐ Ｖ 合并感染的现象结果表明， Ｍ Ｂ Ｖ 是斑节对虾的主要病原体，而 Ｈ Ｐ Ｖ

斑节对虾杆状病毒感染对脂肪代谢的影响

目的 :为了探究斑节对虾杆状病毒 (MBV)感染对脂肪代谢的影响 ,指导虾病的防治 .方法 :利用索氏 (Soxhlet)提取法对养殖健康斑节对虾和MBV感染斑节对虾的中肠腺脂肪含量进行了检测 .结果 :健康对虾中肠腺脂肪占干重平均 34 2 8% ,占湿重平均 9 60 % ,含水率平均 71 0 6% .MBV轻度感染的中肠腺脂肪占干重平均 31 52 % ,占湿重平均 9 58% ,含水率平均 69 31% ,三者与健康对虾比较均无显著性差异 (P >0 30、P >0 90和P >0 4 0 ) .MBV重度感染的中肠腺脂肪占干重平均 56 4 2 % ,占湿重平均 2 4 14% ,两者均明显高于健康虾和MBV轻度感染虾 (均为P <0 0 0 1) ;含水率平均 57 2 2 % ,明显低于健康虾和MBV轻度感染虾 (均为P <0 0 0 1) .结论 :严重感染MBV的斑节对虾可出现脂肪代谢紊乱 ,造成脂肪堆积 。

对虾白斑杆状病毒(WSBV)对斑节对虾的实验感染与病理学研究

用取自发病虾塘患典型白斑病的病虾为毒源 ,对健康斑节对虾Penaeusmonodon进行人工感染 ,按Koch氏法证实了对虾白斑杆状病毒 (WSBV)是白斑病的病原。对人工感染WSBV后患典型白斑病的斑节对虾的胃、肠及皮下结缔组织进行石蜡切片和超薄切片 ,研究WSBV引起的组织病理变化和宿主细胞感染WSBV后的超微病变过程。结果表明 :感染WSBV后病虾的不同组织均存在广泛的变性、坏死 ,上皮细胞大量解体、脱落 ;部分细胞核肿大、游离 ;结缔组织糜烂 ,呈现空泡化 ;未发现包涵体。透射电镜照片显示 :感染WSBV后的病虾在感染前期 ,靶细胞核膨胀 ,核仁消失 ,核外膜破损 ,染色质靠边分布 ,内质网断裂 ,核糖体脱落 ,线粒体肿胀 ,高尔基体萎缩 ,溶酶体空泡化 ;感染中期 ,病毒粒子在细胞核内大量复制 ,直至充满整个核 ,细胞核内无结构化 ,核膜及质膜皱缩 ;感染后期 ,核胀破 ,病毒粒子从核内释放 ,细胞核呈空囊状 ,胞质内髓样结构明显 ,细胞器解体 ,细胞功能丧失。

斑节对虾杆状病毒发生基质的超微结构研究

斑节对虾杆状病毒发生基质的超微结构研究陈细法，陈平（厦门大学抗癌研究中心病理室，厦门３６１００５）对虾病毒研究至今才２０年，是起步较晚，但发展迅速的领域，目前已先后发现１０多种对虾病毒。斑节对虾杆状病毒（Ｐｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎｂａｃｕｌｏｖｒｕ...

斑节对虾杆状病毒感染与水体理化因子

通过二造虾塘水体理化因子的检测和斑节对虾杆状病毒感染的调查，发现水体理化因子可影响斑节对虾杆状病毒的感染度，其中影响最大的是氨氮，其次是盐度和亚硝酸氮．氨氟和pH值有协同作用，硫化物可诱发斑节对虾杆状病毒病，亚硝酸氮可明显地抑制对虾的生长．

斑节对虾白斑综合症杆状病毒致病性及组织细胞特异性研究

班节对虾白斑综合症杆状病毒（Whitespotsyndromebaculoviruses，WSSBV）感染胃上皮细胞，胃环肌和纵肌细胞，海绵结缔组织细胞；鳃下皮细胞；触角腺分泌型和非分泌型上皮细胞，触角腺体胶囊上皮细胞；造血组织细胞；心脏心肌细胞，随体细胞，结统组织细胞；神经系统胶质细胞，神经膜细胞，神经细胞和球形细胞；甲壳表皮细胞、肌细胞．WSSBV对中肠和中肠育囊上皮细胞，肝胰腺上皮细胞，雄性生殖系统精原细胞，输精管上皮细胞等不敏感．人工肌注感染，WSBV有3d内可致斑节对虾90％，甚至100％死亡．感染斑节对虾鳃经电镜观察发现了3种杆状病毒，2种为无包涵体细胞核杆状病毒，其中一种大小为（119～136）um×（289～306）um，核农壳（98～105）nm×（265～272）um，另一种大小为（101～112）um×（391～420）um，核衣壳（78～85）nm×（276～298）um；1种为细胞质杆状病毒，大小为（102～112）nm×（326～340）um，核衣壳（71～78）nm×（306～308）um．

斑节对虾白斑综合症杆状病毒(WSBV)的形态和感染的组织病理研究

应用光镜和电镜研究斑节对虾白斑综合症杆状病毒（ ＷＳＢＶ） 的形态和感染的组织病理，结果证实ＷＳＢＶ 感染的细胞解体坏死．电镜观察对虾肝胰腺细胞未发现病毒粒子，而鳃上皮细胞和甲壳表皮细胞感染３ 种杆状病毒，分别称之为细胞质杆状病毒，细胞核Ⅰ型杆状病毒，细胞核Ⅱ型杆状病毒，病毒粒子大小分别为（１０２ ～１１２） ｎｍ ×（３０８ ～３２６）ｎｍ ，（９８ ～１０５） ｎｍ ×（２６５ ～２７５） ｎｍ ，（１０１ ～１１２） ｎｍ ×（３９１ ～４２０） ｎｍ ．病毒不形成包含体．负染后病毒粒子还可见细端有一乳头状结构，大小约４０ ～５０ ｎｍ ，后带有一宽约１８ ｎｍ 、长约３４０ ｎｍ 的尾．

斑节对虾白斑综合症杆状病毒(WSSV)感染的组织特异性

应用光镜和电镜研究斑节对虾白斑综合症杆状病毒 ( WSSV)感染的组织特异性 ,结果证实 WSSV组织特异性差 ,感染外胚层和中胚层来源的各种组织细胞的细胞核 ,如甲壳表皮细胞、鳃上皮细胞、神经细胞、造血组织细胞、胃上皮细胞、心肌细胞及其随体细胞、触角腺上皮细胞、胃和消化管的肌细胞和结缔组织细胞等 ,以甲壳表皮细胞、胃上皮细胞、结缔组织细胞和造血组织细胞最为显著 ,细胞解体环死 .电镜观察对虾中肠和肝胰细胞未发现病毒粒子 .

斑节对虾杆状病毒病的组织病理观察

斑节对虾杆状病毒感染斑节对虾肝胰腺和前中肠上皮细胞。组织病理变化表现为肝胰腺上皮细胞核肥大,为正常细胞核直径的2～6倍,细胞坏死,脱落。

斑节对虾杆状病毒超微结构的研究

斑节对虾杆状病毒超微结构的研究伦璇１）杨宝华２）（１）华南农业大学电镜室５１０６４２，广州；２）深圳动植物检疫总局５１０８１０，深圳）关键词：杆状病毒；超微结构；斑节对虾中图分类号：Ｓ４３２．４４对虾的致病原因有很多，其中生物性病原包括病毒、细菌、真...