斑蝥素酸镁通过ERK1/2信号通路对肝癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨斑蝥素酸镁抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖及其裸鼠皮下移植瘤生长的作用。方法体内外实验随机分为空白对照组、斑蝥素酸镁组、ERK1/2激动剂组(EGF组)、ERK1/2抑制剂组(SCH772984组)、斑蝥素酸镁+EGF组、斑蝥素酸镁+SCH772984组。CCK-8法、流式细胞术分别检测各组细胞增殖、周期及凋亡变化,Western blot法检测各组细胞周期蛋白(Cdc25C、Cdc2、p-Cdc2)、ERK1/2蛋白磷酸化表达及凋亡蛋白(Bad、cleaved caspase-3和Bcl-2)表达;观察各组裸鼠皮下移植瘤的生长及质量变化,Western blot法检测裸鼠移植瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)表达及裸鼠移植瘤组织ERK1/2蛋白磷酸化表达。结果斑蝥素酸镁+EGF组、斑蝥素酸镁+SCH772984组SMMC-7721细胞增殖率、p-ERK1/2、Cdc25C、Cdc2、Bcl-2蛋白表达分别低于EGF组、SCH772984组(P<0.01),而G 2/M期细胞比例、凋亡率、p-Cdc2、Bad、cleaved caspase-3蛋白表达分别高于EGF组、SCH772984组(P<0.01)。并且斑蝥素酸镁+EGF组、斑蝥素酸镁+SCH772984组裸鼠移植瘤平均体积、质量以及PCNA和p-ERK1/2蛋白表达均分别低于EGF组、SCH772984组(P<0.01)。结论斑蝥素酸镁通过抑制ERK1/2通路,降低Cdc25C表达,使Cdc2抑制位点磷酸化活性升高,导致细胞发生G 2/M期阻滞;与此同时,促进凋亡相关蛋白Bad、cleaved caspase-3表达,抑制Bcl-2蛋白表达,进而诱导肝癌细胞发生凋亡,最终发挥抗肝癌作用。

斑蝥素酸镁阻断MAPK信号通路抑制SMMC-7721人肝癌细胞增殖

目的观察斑蝥素酸镁对SMMC-7721肝癌细胞丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,探讨斑蝥素酸镁的抗癌机制。方法使用蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性检测试剂盒分别检测斑蝥素酸镁和冈田酸(OA)对PP2A活性的影响。实时定量PCR检测斑蝥素酸镁、OA对SMMC-7721人肝癌细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p38MAPK、c-Jun N末端激酶1/2(JNK1/2)mRNA表达水平的影响;Western blot法检测斑蝥素酸镁、OA对SMMC-7721细胞ERK1/2、p38MAPK、JNK蛋白表达以及蛋白磷酸化水平的影响。结果 0.283μmol/L斑蝥素酸镁对PP2A活性无明显抑制作用,0.567μmol/L斑蝥素酸镁能显著抑制PP2A活性,且随着药物浓度的增加,抑制作用愈趋明显;同时0.059 nmol/L OA对PP2A活性也有显著抑制作用。与空白对照组比较,0.283μmol/L斑蝥素酸镁组ERK1、ERK2 mRNA表达量无明显变化,当浓度为0.567μmol/L时,ERK1、ERK2mRNA表达量显著下降,且随着药物浓度的增加下降更明显;而0.059 nmol/L OA组ERK1、ERK2 mRNA表达量却显著升高。0.059 nmol/L OA和不同浓度斑蝥素酸镁组的p38MAPK、JNK1、JNK2 mRNA表达量均显著升高。与空白对照组比较,0.283μmol/L斑蝥素酸镁组ERK1/2磷酸化水平无明显变化,高于0.567μmol/L斑蝥素酸镁处理显著下调ERK1/2磷酸化水平,其下调程度具有浓度依赖效应;而0.059 nmol/L OA组ERK1/2磷酸化水平却显著上调。0.059 nmol/L OA和不同浓度斑蝥素酸镁组的p38MAPK、JNK磷酸化水平均显著上调。结论斑蝥素酸镁可能是通过抑制PP2A活性进而抑制ERK1/2通路来实现对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用。

斑蝥素酸镁对肺癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨斑蝥素盐类衍生物——斑蝥素酸镁在体外对肺癌细胞增殖的抑制作用。方法采用磺酰罗丹明染色法(SRB法)考察斑蝥素酸镁对H-1299和A-549两种人肺腺癌细胞的体外抗肿瘤活性;采用流式细胞术测定斑蝥素酸镁对H-1299细胞周期的影响;利用细胞集落形成实验,检测斑蝥素酸镁对单个肿瘤细胞形成克隆的影响。结果斑蝥素酸镁对H-1299、A-549两株肿瘤细胞具有比较明显的抑制效果,其半数抑制浓度(IC50)分别为1.59μg.ml-1、1.39μg.ml-1,且抑制率随药物浓度的增加而升高,呈剂量效应关系。细胞周期实验显示H-1299细胞在受试药物的作用下S期和G2/M期的细胞比例呈明显减少(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期。细胞集落形成实验结果表明,当斑蝥素酸镁的浓度达到2.10μg.ml-1时,肿瘤克隆就不能形成。结论斑蝥素酸镁对肺腺癌细胞具有非常明显的抗肿瘤活性,可做进一步研究。

斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721 ERK1/2通路和G_2/M期调控蛋白的影响

目的探讨斑蝥素酸镁对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路和周期相关蛋白的影响。方法将不同浓度的斑蝥素酸镁作用于人肝癌细胞SMMC-7721,免疫印迹法检测ERK1/2通路和周期相关蛋白表达的变化。结果与对照组比较,0.895、1.79μmol/L浓度组的ERK1/2蛋白磷酸化水平明显下降,同时周期相关蛋白Cdc25C、Cdc2表达显著下调。结论推测斑蝥素酸镁可能是通过抑制ERK1/2通路,进而调控Cdc25C、Cdc2的表达下调,使细胞发生G_2/M期阻滞,最终诱导细胞凋亡。

斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响

建立人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤模型,实验组每只裸鼠瘤周注射斑蝥素酸镁6.26×10-5mmol,对照组给予相同容积的无菌生理盐水瘤周注射。给药22 d后,观察斑蝥素酸镁对皮下移植瘤增殖的影响,并在此基础上,利用HE染色观察药物对人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织形态学特征的影响。实验发现斑蝥素酸镁组移植瘤细胞体积变小、胞浆固缩、嗜酸性变,细胞核固缩、碎裂。透射电镜观察人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织超微结构的改变,镜下见斑蝥素酸镁组移植瘤细胞核膜基本消失、核染色质聚集成团等改变。免疫组化二步法检测人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织中bcl-2、bax的表达水平,结果显示斑蝥素酸镁组瘤组织中bcl-2的表达低于生理盐水组,而bax的表达高于生理盐水组(P<0.05)。本实验提示斑蝥素酸镁能明显抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤的增殖,并能诱导移植瘤细胞发生凋亡,其机制可能与上调bax和下调bcl-2表达有关。

斑蝥素酸镁对人星形胶质瘤细胞U-251MG生长、凋亡和侵袭的影响及机制研究

目的探讨斑蝥素酸镁对人星形胶质瘤细胞U-251MG生长、凋亡和侵袭的影响及机制。方法体外培养人星形胶质瘤细胞U-251MG,分为空白组(Control组)、低剂量斑蝥素酸镁组(Canthardin 5μM组)、中剂量斑蝥素酸镁组(Canthardin 10μM组)和高剂量斑蝥素酸镁组(Canthardin 20μM组)。采用克隆形成实验检测细胞增殖情况;Hocest染色检测细胞凋亡情况;Transwell法检测细胞侵袭情况;Western blot检测相关蛋白表达情况。结果平板克隆实验结果显示,斑蝥素酸镁可以明显抑制人星形胶质瘤细胞U-251MG的增殖,且呈剂量依赖性(P<0.05);Hocest染色结果显示,斑蝥素酸镁可以明显促进人星形胶质瘤细胞的凋亡,且呈剂量依赖性(P<0.05);Transwell小室实验显示,斑蝥素酸镁可以显著抑制细胞的侵袭,且呈剂量依赖性(P<0.05);Western blot检测结果显示,斑蝥素酸镁处理后,人星形胶质瘤细胞中PCNA蛋白、VEGF蛋白、Bax蛋白及p-AKT蛋白表达均显著降低(均P<0.05),Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05),AKT总蛋白表达无显著差异(P>0.05)。结论斑蝥素酸镁可以通过调控Akt信号通路抑制人星形胶质瘤细胞U-251MG的增殖和侵袭,并促进其凋亡,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。

斑蝥素酸镁对人肝癌细胞株SMMC-7721转录组的影响

目的通过RNA-seq分析斑蝥素酸镁对肝癌细胞转录组的影响,为阐明斑蝥素酸镁对肝癌细胞增殖的抑制效应提供分子信息,以期为临床上利用斑蝥素酸镁治疗肝癌提供相关理论基础。方法体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721,用不同浓度(0、0.895、1.790、2.685μmol/L)的斑蝥素酸镁干预48 h后,利用MTT检测细胞抑制率;采用illumina Hiseq2500测序平台对1.790μmol/L处理组和对照组(0μmol/L)进行RNA-seq分析;根据RNA-seq结果,利用qRT-PCR检测了磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)等基因的表达水平。结果不同浓度(0.895、1.790、2.685μmol/L)的斑蝥素酸镁干预48 h后,与对照组(0μmol/L)比较,均能显著抑制SMMC-7721细胞增殖(t=33.48、90.30、151.01,P<0.01)。通过RNA-seq分析,斑蝥素酸镁干预后,共导致150个基因表达发生显著变化,82个基因显著下调(P<0.01),68个基因显著上调(P<0.01),这些差异基因涉及Ribosome、Hippo signaling pathway、MAPK signaling pathway、PI3K signaling pathway、mTOR signaling pathway等通路,影响肝癌细胞的增殖、代谢及凋亡;通过qRT-PCR检测,1.790μmol/L斑蝥素酸镁能够显著降低PI3K、Akt及ERK1/2的转录水平,抑制细胞增殖。结论通过RNA-seq检测及分析,PI3K、AKT和ERK信号通路的抑制可能在斑蝥素酸镁抑制肝癌细胞增殖中发挥作用。

斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制

目的探讨斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制。方法磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测不同浓度(1.668、3.336、5.004、6.672μmol/L)斑蝥素酸镁对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用,将细胞随机分为空白对照组、斑蝥素酸镁组(2.43、4.86、9.72μmol/L)、冈田酸组(0.072 nmol/L)。作用24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧(ROS)、线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞色素c、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、ERK1/2蛋白磷酸化表达。结果斑蝥素酸镁能明显抑制BEL-7402人肝癌细胞的增殖,呈剂量-效应关系,其IC50为4.86μmol/L;与对照组比较,斑蝥素酸镁组凋亡率、细胞内活性氧(ROS)水平、Cyt-C、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01),线粒体膜电位、ERK1/2蛋白磷酸化表达显著降低(P<0.01)。结论斑蝥素酸镁可能通过抑制ERK1/2磷酸化水平来反向调节线粒体凋亡途径,最终诱导BEL-7402人肝癌细胞发生凋亡。

斑蝥素酸镁对SMMC-7721肝癌细胞Warburg效应的影响

目的探讨斑蝥素酸镁对SMMC-7721肝癌细胞Warburg效应的影响及其机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,并将其分为空白对照组、冈田酸组、斑蝥素酸镁(1/2IC 50)组、斑蝥素酸镁(IC 50)组、斑蝥素酸镁(2IC 50)组,分别干预24 h后,收集细胞。葡萄糖摄取率、乳酸水平检测试剂盒检测葡萄糖摄取率和乳酸生成量,Western blot检测葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、乳酸脱氢酶(LDHA)蛋白表达及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化表达。结果与空白对照组比较,斑蝥素酸镁组葡萄糖摄取率和乳酸生成量降低,具有浓度依赖性(P<0.01),而冈田酸组葡萄糖摄取率和乳酸生成量升高(P<0.01)。斑蝥素酸镁组GLUT1、LDHA蛋白表达低于空白对照组(P<0.01),并具有浓度依赖性,而冈田酸组两者蛋白表达高于空白对照组(P<0.01)。与空白对照组比较,斑蝥素酸镁组的PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化表达下调(P<0.01),并具有浓度依赖性,而冈田酸组3种蛋白磷酸化表达上调(P<0.01)。结论斑蝥素酸镁可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号转导通路,下调GLUT1和LDHA,减少葡萄糖的摄取和糖酵解代谢产物乳酸生成量,使Warburg效应减弱,最终抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖。

斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721及其裸鼠皮下移植瘤的影响

【目的】探讨斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721及其裸鼠皮下移植瘤的影响。【方法】1、采用磺酰罗丹明染色法(SRB法)检测不同浓度斑蝥素酸镁在体外对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用;2、流式细胞术检测斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721细胞周期和细胞凋亡的影响;3、Hoechst33342染色观察斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721细胞形态的影响;4、透射电镜观察斑蝥素酸镁作用后人肝癌细胞SMMC-7721超微结构的变化;5、建立人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤模型,实验组每只裸鼠瘤周注射斑蝥素酸镁6.26×10?5 mmol,对照组给予相同容积的无菌生理盐水瘤周注射,计算抑瘤率;6、原位末端标记染色(TUNEL)法检测人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织细胞凋亡情况。【结果】1、斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721有比较明显的抑制作用,抑制率随药物浓度的增加而升高,呈剂量效应关系,其半数抑制浓度(IC50)为1.79?mol/L;2、流式细胞检测结果显示:人肝癌细胞SMMC-7721在斑蝥素酸镁的作用下,G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增加,细胞出现G2/M期阻滞;细胞凋亡率随斑蝥素酸镁浓度加大而逐渐增加;3、Hoechst33342染色镜下显示:斑蝥素酸镁作用后人肝癌细胞SMMC-7721出现凋亡细胞形态特征;4、透射电镜观察:斑蝥素酸镁作用后人肝癌细胞SMMC-7721出现细胞核异形、染色质聚集成团、边集,见凋亡小体;5、斑蝥素酸镁组肿瘤体积、重量显著小于生理盐水组(P﹤0.05),抑瘤率为49%;6、TUNEL法提示斑蝥素酸镁组移植瘤组织细胞凋亡率显著高于生理盐水组(χ2=92.609,P﹦0.000)。【结论】斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721在体内外均有抑制增殖作用,并可以诱导肿瘤细胞凋亡,其凋亡的发生与细胞分裂期阻滞有关。

斑蝥素、斑蝥酸钠和斑蝥酸镁抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的研究

目的比较斑蝥素、斑蝥素酸钠和斑蝥素酸镁对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,筛选出最佳斑蝥素类抗肿瘤药物。方法将斑蝥素、斑蝥素酸钠及斑蝥素酸镁作用于人胃癌细胞SGC-7901;采用CCK-8法检测上述三种药物对SGC-7901细胞的生长抑制率。结果斑蝥素、斑蝥素酸钠和斑蝥素酸镁均对SGC-7901细胞有抑制作用,且呈效应-剂量关系。上述三种药物的半数抑制浓度分别为18.591、17.676、4.105μmol·L-1。结论斑蝥素、斑蝥素酸钠和斑蝥素酸镁均能抑制人胃癌细胞生长,其中斑蝥素酸镁的抗肿瘤活性最佳。

斑蝥素酸镁与斑蝥酸钠对喉癌Hep-2细胞抑制活性比较的初步研究

目的:探讨自主研发产物--斑蝥素酸镁对人喉癌上皮细胞的增殖抑制活性是否好于临床抗癌药物斑蝥酸钠。方法:采用磺酰罗丹明染色法(SRB法)、细胞集落形成实验分别考察斑蝥素酸镁和斑蝥酸钠对人喉癌上皮细胞Hep-2的影响。结果:与斑蝥酸钠相比,斑蝥素酸镁作用喉癌Hep-2细胞的效果更加显著。其IC50仅为2.19μmol·L-1,远低于斑蝥酸钠的IC50(15.75μmol·L-1)。细胞集落形成实验显示,与斑蝥酸钠相比,斑蝥素酸镁明显阻止细胞集落的形成,最低有效浓度为1.75μmol·L-1,远低于斑蝥酸钠的最低有效浓度(3.50μmol·L-1)。结论:与斑蝥酸钠相比,斑蝥素酸镁对喉癌Hep-2细胞具有更加显著的抑制效果,可进行更加深入的研究。

三种斑蝥素盐类物质对肝癌QGY-7703细胞生长的抑制作用

目的考察斑蝥素酸镁、斑蝥素酸钠及斑蝥素酸钾,三种斑蝥素的盐类物质对肝癌QGY-7703细胞增殖的抑制作用。方法采用WST-1比色法测定三种斑蝥素盐类物质对肝癌QGY-7703细胞的生长抑制率。结果三种斑蝥素盐类物质对肝癌QGY-7703细胞的生长具有显著的抑制作用,抑制率随药物浓度升高其抑制作用增强,呈剂量效应关系。其半数抑制率IC50分别为9.48、33.80、35.04μmol/L。结论斑蝥素酸镁对肝癌QGY-7703细胞的抑制作用明显好于斑蝥素酸钠和斑蝥素酸钾,具有开发潜力。

芫菁体内结合斑蝥素对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用

本文考察了芫菁体内结合斑蝥素和人工合成的斑蝥素盐类衍生物斑蝥素酸镁的体外抗肿瘤活性。采用WST-1法检测两者在体外对人胃腺癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用。实验结果显示两者对SGC-7901细胞均表现出明显的抑制效果,且随药物浓度升高其抑制作用增强,呈剂量效应关系;其半数抑制浓度(IC50)分别为10.86和8.65μmol/L。此外,通过流式细胞术检测表明,结合斑蝥素能引起SGC-7901细胞G0～G1期阻滞;斑蝥素酸镁则引起SGC-7901细胞S期阻滞,两者均能通过干预SGC-7901细胞的周期来抑制其增殖。

3种斑蝥素碱土金属盐类衍生物对HepG2人肝癌细胞生长的抑制作用

目的比较3种斑蝥素碱土金属盐类衍生物对人肝癌细胞HepG2的抑制增殖及促凋亡作用。方法采用3种斑蝥素盐类衍生物分别对体外培养的肝癌细胞HepG2进行干预,磺酰罗丹明染色法(SRB法)检测细胞增殖抑制作用;相差显微镜结合Hoechst33342染色观察细胞形态学变化;流式细胞技术检测细胞凋亡。结果 3种斑蝥素盐类衍生物均呈浓度依赖性抑制人肝癌细胞HepG2的生长,尤以斑蝥素酸镁的抑制效应最强(P<0.05);斑蝥素酸镁对人肝癌细胞HepG2的形态影响比斑蝥素酸钙和斑蝥素酸锶明显;Hoechst 33342染色显示斑蝥素酸镁致HepG2细胞出现凋亡细胞形态特征比斑蝥素酸钙和斑蝥素酸锶明显;流式细胞术检测结果表明,同一浓度3μg/mL的斑蝥素酸镁的促进凋亡作用明显高于斑蝥素酸钙和斑蝥素酸锶(P<0.05)。结论 3种斑蝥素盐类衍生物均具有抑制人肝癌细胞HepG2增殖并促其凋亡的作用,但斑蝥素酸镁的作用明显强于斑蝥素酸钙和斑蝥素酸锶。