应用核素标记相对和绝对定量技术结合纳升液-质联用筛选养血清脑颗粒对斑马鱼神经损伤预后的生物标志物

目的分析斑马鱼神经元模型损伤给药治疗前后总蛋白差异,寻找养血清脑颗粒对斑马鱼神经元损伤预后的生物标记物及其作用机制。方法采用核素标记相对和绝对定量技术结合纳升液相色谱和串联质谱(Nano LC-MS/MS)对给药前后斑马鱼药效模型总蛋白进行分离并分析肽段,采用Proteinpilot 4.2软件对蛋白进行鉴定和定量分析,对获得的差异蛋白进行生物信息学分析,应用蛋白印迹法对可能的生物标记物进行验证。结果通过Nano LC-MS/MS分析鉴定出置信度>95%的蛋白质共1 933种,其中总差异表达蛋白质130种,模型组与模型给药组表达量上调≥1.5倍的蛋白质有9种,下调≤0.70倍的蛋白质有23种。通过GO分析显示,差异蛋白的分子功能主要集中在神经元离子通道的翻译和代谢过程;Western blot结果显示,与模型组相比,差异表达蛋白Ef1-α(elongation factor 1-alpha)和α-6-F(Na^+/K^+ transporting ATPase alpha 1 polypeptide)在给药后表达量下调,差异具有统计学意义(P<0.05),且与质谱结果一致。结论 iTRAQ联合Nano LC-MS/MS技术能高通量地筛选斑马鱼神经元损伤相关蛋白,初步阐述养血清脑颗粒对斑马鱼神经元损伤预后的作用机制。

基于化学成分和生物效应的栝楼桂枝汤质量评价研究

该研究采用超高效液相色谱-串联质谱的方法,分析测定栝楼桂枝汤中的24种化学成分,在此基础上,结合吗替麦考酚酯诱导的斑马鱼神经元损伤药效模型对栝楼桂枝汤进行神经保护生物活性评价,旨在探讨建立一种综合化学成分与生物效应的栝楼桂枝汤质量评价模式,研究结果表明建立的方法可行,基本稳定可靠,可为中药复方的质量控制研究提供参考。