α-三联噻吩致斜纹夜蛾SL细胞氧化损伤的研究

【目的】研究光敏剂α-三联噻吩（α-terthienyl，α-T）对斜纹夜蛾（Spodoptera litura，SL）细胞的毒杀活性及其机理。【方法】MTT法测定α-T对离体培养的SL细胞的细胞毒力，并与鱼藤酮进行比较。用硫代巴比妥酸（TBA）法测定细胞内丙二醛（MDA）的生成量，5，5′-二硫代双-（2-硝基）苯甲酸（DTNB）法测定细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）的相对含量，通过透射电子显微镜观察α-T对SL生物膜及细胞器的影响。【结果】光活化后的α-T对SL细胞48h的IC50值为0.21μg·ml-1，而鱼藤酮为12.25μg·ml-1。同时发现α-T光照处理后细胞内MDA生成量与药剂浓度呈正相关，表明细胞受到α-T的氧化损伤，而GSH相对含量与α-T浓度呈负相关。透射电镜显示，α-T光照处理后SL细胞膜和核膜缺损、肿胀，内容物外泻，胞内出现不明深色颗粒，线粒体膨大，膜和亚细胞器结构受到严重破坏。【结论】SL细胞受到α-T的氧化损伤后，MDA生成量显著增加，GSH含量下降，细胞的抗氧化能力减弱，透射电镜结果显示SL细胞在α-T的试验剂量下受到了严重的氧化损伤。

番荔枝内酯化合物布拉它辛对斜纹夜蛾的杀虫活性及对SL细胞的致凋亡作用

为了明确番荔枝内酯化合物布拉它辛的杀虫活性和探索杀虫作用机理,本研究采用浸叶法测定该化合物对斜纹夜蛾Spodoptera litura幼虫的生物活性,采用MTT检测法和流式细胞术,研究该化合物对斜纹夜蛾离体培养卵巢细胞（SL细胞）的细胞毒力和致细胞凋亡作用,以及对SL细胞线粒体膜电位的影响。结果表明：布拉它辛不仅对斜纹夜蛾幼虫具有良好的拒食活性,处理后24h,对2龄和3龄幼虫的AFC50值分别为60.25μg/mL和86.73μg/mL,还对幼虫生长有良好的抑制作用。布拉它辛处理SL细胞后24h和48h,IC50值分别为22.32μg/mL和10.03μg/mL。流式细胞仪检测结果表明,布拉它辛对SL细胞具有明显的致凋亡作用,可导致SL细胞线粒体膜电位显著下降。本研究表明布拉它辛对斜纹夜蛾幼虫具有良好的拒食活性与生长抑制作用,并且该化合物能明显抑制SL细胞的增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位。因此,布拉他辛具有广阔的研究应用前景。

血啉甲醚对斜纹夜蛾SL细胞的氧化损伤

通过研究血啉甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME）对斜纹夜蛾Spodoptera litura（SL）细胞的增殖抑制率IC50、处理后细胞内丙二醛（malondialdehyde,MDA）的生成量、细胞内还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平和细胞器超微结构的变化,明确血啉甲醚对SL细胞的氧化损伤,并探讨将血啉甲醚及其衍生物拓展应用到农业害虫防治领域的可行性。用MTT法测定血啉甲醚光照处理下对SL细胞24h和48h的IC50值分别为8.35μg/mL和7.66μg/mL。硫代巴比妥酸（TBA）法测定表明,血啉甲醚光活化后能导致胞内MDA含量明显升高,且MDA的生成量与其浓度呈正相关;当血啉甲醚浓度为50.000μg/mL,光照处理48h时,细胞内MDA生成量达到173.08±3.51nmol/L。5,5′-二硫代双-（2-硝基）苯甲酸（DTNB）法对处理后细胞内GSH水平测定结果表明,光活化后的血啉甲醚处理SL细胞能导致细胞内还原型GSH相对含量随血啉甲醚浓度升高而显著降低;当血啉甲醚浓度为50.000μg/mL,处理48h时,光照处理组细胞内GSH相对含量较之同浓度黑暗处理下降了39.59%。扫描电镜观察显示,6.250μg/mL的HMME处理细胞并光照后,细胞膜表面出现了明显的孔洞,有的细胞出现了花样皱褶和内陷。这些结果表明在血啉甲醚的试验剂量下,SL细胞受到了氧化损伤。

α-三联噻吩对斜纹夜蛾SL细胞线粒体膜电位及细胞周期的影响

【目的】研究α-三联噻吩（α-T）对斜纹夜蛾（Spodoptera litura）SL细胞线粒体膜电位及细胞周期的影响。【方法】通过Rhodamine123染色和流式细胞术（flow cytometry,FCM）研究α-T处理SL细胞24 h和48 h后细胞线粒体膜电位的变化,并通过PI染色和FCM,测定α-T处理SL细胞24 h和48 h后细胞周期各时相百分率的变化。【结果】光活化后的α-T处理SL细胞24 h后,0.0625 μg·mL^-1浓度和0.1250 μg·mL^-1浓度处理组细胞线粒体膜电位的变化幅度不大,而0.5000 μg·mL-1浓度处理组细胞线粒体膜电位明显升高,48 h后高浓度处理组（1.0000 μg·mL^-1）导致线粒体膜电位明显去极化;处理24 h后,低浓度（0.0625 μg·mL^-1）处理组细胞被阻滞于S期,而高于此浓度的光照处理组细胞被阻滞于G2/M期,48 h后,浓度≤0.1250 μg·mL^-1的光照处理细胞被阻滞于G2/M期,而浓度＞0.1250 μg·mL^-1的光照处理组细胞被阻滞于S期。【结论】SL细胞经α-T处理后,细胞处于一系列复杂的动态变化中。当细胞本身不能扭转ROS造成的氧化损伤时,细胞线粒体膜电位和细胞周期时相即出现较大幅度的变化,这种变化决定着细胞的受损程度和细胞的死亡途径。