植物精油对鱼藤酮和辣椒碱在斜纹夜蛾离体培养细胞系SL-1中活性的影响

应用流式细胞术研究了24种常用植物精油对斜纹夜蛾Spodoptera litura离体培养细胞系(SL-1)细胞膜通透性的影响,采用MTT法研究精油对2种植物源农药鱼藤酮和辣椒碱的细胞活性的影响.试验结果表明:与对照相比,50μg·mL-1芸香油处理SL-1细胞24 h后,细胞内荧光染料碘化丙啶(PI)的荧光强度增加了53.04%,其次是松节油和当归油,细胞内PI荧光强度分别增加了34.23%和33.67%;100μg·mL-1广藿香油、松节油、芸香油、当归油、香茅油、生姜油处理SL-1细胞后,细胞内PI荧光强度增加率超过40%.鱼藤酮和辣椒碱对SL-1细胞的抑制中浓度(IC50)分别为34.97和35.92μg·mL-1,而与100μg·mL-1芸香油联用时IC50分别为12.69和13.26μg·mL-1,与100μg·mL-1松节油联用的IC50分别为14.56和11.392μg·mL-1,均小于鱼藤酮和辣椒碱单剂用量,芸香油、松节油能够显著提高鱼藤酮和辣椒碱对SL-1细胞的细胞活性.

杀菌剂对斜纹夜蛾SL细胞系和幼虫的生物活性

以MTT法筛选了19种杀菌剂对斜纹夜蛾Spodoptera litura SL细胞的毒杀活性,并以该方法研究了三唑类杀菌剂对SL细胞的毒力。结果表明：福美双、烯唑醇、己唑醇、氟硅唑、苯霜灵、苯醚甲环唑、戊唑醇和腈菌唑等杀菌剂对SL细胞具有优异的毒杀活性。三唑类杀菌剂腈菌唑、烯唑醇、己唑醇和戊唑醇处理SL细胞48h后,LC50值分别为21.94μg/mL、23.80μg/mL、33.16μg/mL和47.63μg/mL。以考马斯亮蓝G250法研究了腈菌唑对SL细胞中蛋白质含量和乳酸脱氢酶（LDH）漏出率的影响,20μg/mL腈菌唑处理12h、24h、48h和72h后,SL细胞中蛋白质含量分别降低8.55%、25.95%、42.95%和67.05%;处理24h和48h后,SL细胞的LDH漏出率分别为30.66%和32.05%。以浸叶喂食法处理斜纹夜蛾3龄幼虫,三唑类杀菌剂可显著抑制试虫体重增长。以0.5μg/头、1.0μg/头和2.0μg/头剂量的腈菌唑注射处理72h后,斜纹夜蛾4龄幼虫血细胞数量分别降低12.31%、25.96%和25.73%;腈菌唑注射处理48h和72h后,对斜纹夜蛾幼虫的LD50值分别为1.59μg/头和1.53μg/头。结果显示以离体培养细胞为对象,从现有杀菌剂中寻找新的杀虫剂先导化合物具有良好的研究潜力。

植物源物质诱导的斜纹夜蛾细胞凋亡

为了研究植物源物质对斜纹夜蛾Spodoptera litura离体培养细胞系SL-1的凋亡诱导作用,采用倒置相差显微镜观察了印楝素、喜树碱等9种物质各自对SL-1凋亡小体的浓度效应及时序性。结果表明：印楝素0.1～5.0μg/mL和喜树碱0.5～20.0μmol/L处理SL-1,24～48h后均产生大量典型的凋亡小体;茶皂素、蓖麻碱、黄樟油、丹皮酚、烟碱、苦参碱和博落回碱0.1～20.0μg/mL处理SL-1后,整个观察期72h内均无明显凋亡小体出现,凋亡诱导作用不明显。印楝素0.75μg/mL诱导SL-1细胞凋亡,从凋亡小体判断,处理后0～36h属细胞凋亡早期,36～60h属细胞凋亡中期,60h后为细胞凋亡晚期。喜树碱5.0μmol/L诱导SL-1细胞凋亡,处理后0～24h属细胞凋亡前期,24～54h属细胞凋亡中期,54h后进入细胞凋亡晚期。初步认为印楝素和喜树碱对SL-1有凋亡诱导作用,并具有一定的浓度依赖性和时序性。

斜纹夜蛾核型多角体病毒DNA诱导同源昆虫细胞的凋亡

发现野生型斜纹夜蛾核型多角体病毒 (Spodopteralituranuclearpolyhedrosisvirus ,SpltNPV)DNA转染SL 1细胞能诱导细胞凋亡 .SpltNPV DNA转染其同源细胞系斜纹夜蛾核SL 1细胞 6h后 ,光镜下即可见细胞膜表面突出或形成小泡 ,细胞碎裂成凋亡小体 ,18h后 ,细胞 10 0 %碎裂成凋亡小体 .DAPI荧光染色显示感染细胞核渐呈半月形 ,直至碎裂被凋亡小体包裹 .被转染的SL 1细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型梯形谱带 .野生型SpltNPV病毒粒子感染的SL 1细胞既无多角体的出现 ,也无凋亡现象的发生 .

虫螨腈对斜纹夜蛾细胞的毒力及对线粒体膜电位的影响

以MTT法测定了虫螨腈等杀虫剂对斜纹夜蛾（Spodoptera litura,SL）细胞的毒力,并用流式细胞仪测定了虫螨腈对SL细胞线粒体膜电位的影响。结果表明：100μg/mL的氟虫腈、丁醚脲、虫螨腈处理SL细胞24h后,对细胞增殖的抑制率依次为14.57%、22.91%、52.53%;虫螨腈对SL细胞24和48h的IC50值分别为57.56和2.60μg/mL;50、100、200μg/mL虫螨腈处理细胞24h后,与对照相比,SL细胞线粒体膜电位分别降低46.87%、57.17%、73.31%,其下降值与药剂浓度呈正相关。

杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡的初步研究

Microscopic examination of Spodoptera litura(SL-1)cell infected with AcMNPV or SfaMNPV revealed progressive cell blebbing starting at 8h～12h postinfection and culminating in total cell destruction at 24h postinfection.The fragmentation of the infected cell nuclei was observed by stained with the specific fluorescent dye DAPI.Agarose gel electrophoresis analysis of the DNA extracted from infected cells show typical DNA ladder. All these supported that both viruses infected SL-1 cells undergo apoptosis.Through lipofectin transinfection,we observed that only the DNA of AcMNPV or SfaMNPV can also induce apopotosis of SL-1 cell.Virus titer analysis revealed that neither viruses can duplicate in SL-1 cells.

杆状病毒反式激活蛋白IE-1诱导昆虫细胞凋亡及几种抑制剂对AcNPV诱导细胞凋亡的影响

为了探讨杆状病毒诱导细胞凋亡的机制 ,用含AcNPV - ie- 1基因的重组质粒 pGAM -ie- 1转染斜纹夜蛾细胞SL - 1和粉纹夜蛾细胞Tn - 5B1。转染后 2 4h通过光镜观察、DAPI荧光染料染色、DNA琼脂糖凝胶电泳等发现 ,SL - 1发生了典型的凋亡 ,而同样的现象并没有在Tn - 5B1细胞中出现。利用放线菌酮 (cycloheximide,CHX)、莫能菌素 (Monensin)及蚜栖菌素 (aphidicolin)处理AcNPV感染的SL - 1细胞 ,发现细胞凋亡被莫能菌素及蚜栖菌素抑制 ,被放线菌酮推迟。此结果为进一步研究杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡的机制等奠定了基础。

利用MTT法以茼蒿素类似物对昆虫细胞毒力筛选及测定

用ＭＴＴ法对１９种茼蒿素类似物进行了离体细胞筛选，并对２０号化合物和鱼藤酮进行了细胞毒力测定。结果表明，２０号化合物对斜纹夜蛾细胞的毒杀效果最好，在１００ｍｇ·Ｌ＾－１处理细胞２０ｈ细胞的死亡率达到４５．５２％；２０号化合物、鱼藤酮细胞毒力测定的ＬＣ５０分别为１０９．５８和１６８．９７ｍｇ·Ｌ＾－１。

雷帕霉素对二种鳞翅目昆虫细胞自噬和凋亡的影响

以2种鳞翅目昆虫细胞为材料,采用雷帕霉素进行处理,初步研究自噬作用与昆虫细胞凋亡的关系。结果表明:雷帕霉素能够提高家蚕细胞系BMN-e细胞的自噬水平,并能诱导BMN-e细胞发生凋亡;自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤能抑制雷帕霉素诱导的BMN-e细胞凋亡。相反,雷帕霉素虽能诱导斜纹夜蛾细胞系SL-HP细胞的自噬水平提高,但不能诱导斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)细胞发生凋亡;雷帕霉素的预处理能抑制放线菌素D诱导的斜纹夜蛾细胞系SL-HP细胞发生凋亡;自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对放线菌素D诱导的细胞凋亡没有影响。因此家蚕Bombyx mori细胞自噬水平的提高与细胞凋亡具有正相关性,而斜纹夜蛾细胞自噬水平的提高与细胞凋亡不相关,相反还对细胞凋亡的诱导具有一定的抑制作用。

海洋微生物杀虫活性筛选方法比较

采用活体昆虫浸渍法和细胞毒性测定法对海洋微生物发酵液进行了杀虫活性比较,从294株供试菌株中,共筛选出7株活性较好的菌株;对Lv7-1、02AB8 a、T31和BBY-9四株菌株,在不同时间的生物量、发酵液pH值与细胞毒活性等方面的关系进行了研究。

CSA对SfaMNPV诱导SL-1细胞凋亡的影响

检测线粒体膜通透性转运孔(MPT)的开放抑制剂环孢菌素A(CSA)对芹菜夜蛾核型多角体病毒(Syngrapha falcifera multiplenuclear polyhedrosis virus,SfaMNPV)诱导诱导斜纹夜蛾(Spodoptera litura Cells,SL-1)细胞凋亡的影响。用不同浓度CSA和SfaMNPV单独或联合处理SL-1细胞,通过细胞形态学观察、DNA凝胶电泳法、PI染色流式细胞仪鉴定细胞凋亡,应用罗丹明123(Rh123)染色流式细胞仪测定线粒体跨膜电位(ΔΨm)。CSA明显抑制了SfaMNPV诱导的SL-1细胞凋亡,CSA还抑制了SfaMNPV诱导的SL-1细胞线粒体膜电位(ΔΨm)下降。CSA抑制了SfaMNPV诱导SL-1细胞的ΔΨm下降,可能是亲环素-D(CyP-D)与CSA的结合导致MPT的关闭,从而抑制细胞凋亡。