断体地龙再生期提取液对成纤维细胞增生作用的研究

目的:通过研究断体地龙再生期不同时间点提取液对成纤维细胞增生作用的差异,筛选出活性最强的提取液,阐明地龙再生期促进创伤愈合作用的物质差异。方法:将活体地龙进行断体,刺激其产生修复物质,在不同时间点于断体处1 cm(8～12体节)取材,匀浆并抽提24 h,得到地龙断体后1～14 d的提取液,并以碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)为阳性对照,采用MTS法分析各提取液对小鼠成纤维细胞增生作用的影响,筛选出活性最强的提取液。结果:地龙断体后第3 d的提取液活性最强。结论:地龙断体后会产生促进成纤维细胞增生作用的物质,且在地龙修复期的不同时间段产生的修复物质存在一定的差异,其中断体第3 d该物质含量较高,为进一步探求地龙中促进创伤愈合作用物质奠定基础。

断体地龙提取液促进小鼠创伤愈合作用研究

目的:在前期实验研究和"断体地龙假说"的基础上,探究断体地龙中活性成分促进创伤愈合的机制。方法:采用小鼠皮肤切除性创伤模型,制备地龙提取液,通过苏木精-伊红(HE)染色和免疫组化测定伤后创面愈合率及创面组织中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(b FGF)、转化生长因子(TGF-β1)的表达。结果:1.断体地龙提取液给药组与空白对照组相比创面愈合率更大,且HE染色后发现其能明显改善创面组织的愈合。2.地龙药物组VEGF、TGF-β1 2种因子的表达与生理盐水组差别不大,无统计学意义(P>0.05)。3.地龙药物组b FGF与生理盐水组相比,药物组b FGF的表达提前到达峰值,且持续时间较长;地龙药物组b FGF的表达第1天到达峰值,与对照组同一时间点阳性表达得分相比,具有显著性差异(P<0.05)。结论:地龙提取液外涂对小鼠皮肤切除性创伤的愈合有促进作用,其机制可能与VEGF、TGF-β1的表达无关,而与炎症期和增殖期创伤部位b FGF的表达增高有关系。

断体地龙成分分离及促进创伤愈合活性研究

目的:研究断体三天的地龙提取液(DL3)对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)增殖作用的影响。方法:制备断体三天的地龙提取液,盐析后得到四个组分(简称为S1、S2、S3、S4),以给药后成纤维细胞的增殖率为筛选指标,采用CCK-8试剂盒测定成纤维细胞的增殖率,观察不同组分对成纤维细胞增殖作用的影响,筛选出活性最强的组分。结果:在一定范围内,细胞增殖率随着蛋白浓度的增加呈依赖上升趋势。当蛋白浓度在6~8μg/m L之间时,各组间细胞增殖率均达到最大值,分别为113.62%、108.58%、117.03%和111.26%,其中S3对成纤维细胞增殖的促进作用最强。结论:断体再生期的地龙含有促进成纤维细胞增殖的活性组分,为进一步研究断体地龙中促进创伤愈合的物质奠定基础。

断体地龙促进创伤愈合活性成分筛选研究

目的:从断体地龙提取液中筛选其促进创伤愈合的活性成分。方法:采用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析对断体地龙提取液进行分离纯化,通过CCK-8法测定不同洗脱液对NIH3T3细胞增殖的作用,筛选活性较强的组分。结果:离子交换层析梯度洗脱后得到5个洗脱峰。在一定浓度范围内,五种成分对NIH3T3细胞均有促进增殖作用,细胞增殖率随着蛋白浓度增大呈依赖上升趋势。当蛋白浓度为1.5μg/m L时,各组细胞增殖率均达到最大值,其中3号洗脱液作用的细胞增殖率最大。结论:断体地龙提取液经离子交换层析后得到的3号洗脱液促进NIH3T3细胞增殖作用最强,表明其可能含有促进创伤愈合的潜在活性成分,有待进一步研究。

断体地龙提取液对结肠炎相关性结肠癌COX-2/PGE_2/β-catenin信号通路的影响

目的:观察断体地龙提取液对结肠炎相关性结肠癌小鼠COX-2/PGE_2/β-catenin信号通路的影响。方法:60只C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组、模型组、断体地龙提取液低、中、高剂量组和柳氮磺吡啶组。除空白组外,其余5组均采用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠法复制结肠炎相关性结肠癌模型。连续治疗15d后光镜下观察结肠组织病理学改变,并观察小鼠DAI评分、结肠器官重量及结肠组织成瘤率;Western-blot法检测结肠组织中COX-2、PGE_2和β-catenin蛋白的表达。结果:断体地龙提取液能够显著改善CACC小鼠结肠黏膜的病理学形态,降低小鼠DAI评分及结肠质量,减少结肠中瘤体的形成,明显优于模型组(P<0.05);断体地龙提取液能够显著降低结肠组织中COX-2、PGE_2、β-catenin蛋白的表达,与模型组比较明显优于模型组(P<0.05)。结论:断体地龙提取液能够通过抑制COX-2/PGE_2/β-catenin信号通路的激活,从而抑制结肠炎诱发的结肠癌的发生。

基于ICP-MS研究断体地龙对大鼠创面无机元素含量的影响

目的建立微波消解-ICP-MS测定大鼠创面皮肤中无机元素含量,考察断体地龙促创面愈合作用与无机元素的关系。方法采用HNO3体系-微波消解法对样品进行前处理,ICP-MS对大鼠创面皮肤中钾、镁、钙、锰、铁、钴、镍、铜、锌、砷、硒、镉、碲、铅14种无机元素进行测定和分析。结果在优化的实验条件下,元素在0~250μg·L^-1内回归方程系数r≥0.999;方法的检出限(3σ,n=10)为0.02~13.04μg·L^-1;加样回收率(n=6)为85.4%~119.0%。断体地龙可明显提高创面组织中钾、钙、镁、铜、铁、锌、硒的含量,且未增加重金属元素的含量。结论该方法简便快速、灵敏度高、准确性好,可用于同时测定大鼠创面皮肤中多种无机元素的含量。断体地龙发挥促创面愈合作用与提高各无机元素含量有关,且具有较高的安全性。