我国五省斯氏并殖吸虫群体DNA序列分析的研究

目的 主要研究我国五省(广东、福建、云南、湖北、四川)斯氏并殖吸虫各群体之间的遗传差异以及四川并殖吸虫独立性问题,并探讨异盘、宫崎、泡囊并殖吸虫在并殖属中的分类地位。方法 以GNT-K法抽提基因组DNA后,用特异引物,PCR扩增ITS2和部分CO1基因,将PCR扩增产物纯化后直接进行测序或克隆后测序,分析序列的同源性,并构建种系发生树。结果 从DNA序列结果来看,5省斯氏并殖吸虫群体之间存在的遗传性差异较小,其中四川并殖吸虫与斯氏并殖吸虫之间存在的遗传性差异亦小。遗传关系均比较接近。泡囊并殖吸虫在种系发生树上位于斯氏并殖吸虫各地域株之间。在种系发生树上,日本的宫崎并殖吸虫亦位于斯氏并殖吸虫各地域株之间,并且与福建地域株最为接近。异盘并殖吸虫在种系发生树上虽与斯氏并殖吸虫各地域株之间距离较远,但相对卫氏并殖吸虫而言,仍与斯氏并殖吸虫遗传距离较近。结论 广东、福建、云南、湖北和四川5省斯氏并殖吸虫群体均属斯氏并殖吸虫同一虫种,由于受地理因素影响,种内存在着不同的地域株。四川并殖吸虫与斯氏并殖吸虫系同种异名。泡囊并殖吸虫与日本的宫崎并殖吸虫很可能是斯氏并殖吸虫的同种异名。异盘并殖吸虫在形态上与种系发生树上,与斯氏并殖吸虫亲缘关系近于卫氏并殖吸虫,分类地位处于两?

斯氏并殖吸虫第二中间宿主华南溪蟹属(Huananpotamon)两新种记述(十足目:溪蟹科)

目的对福建省北部的松溪与邵武两地斯氏并殖吸虫疫源地蟹类宿主调查。方法现场采集溪蟹,进行分类鉴定,除留模式标本及"国家自然资源平台"标本外,其他的均作并殖吸虫囊蚴检查,模式标木存福建省疾病预防控制中心。结果发现华南溪蟹属Huananpotamon两新种,即林氏华南溪蟹和沈氏华南溪蟹。林氏华南溪蟹体型相对较大,雄性第一腹肢末端超越腹锁突附近,未抵达第四五胸甲缝,末第二节约当末节长的1.3倍,末节内末角不显突出,呈圆钝的方形,外末角呈牛角状,末部弯曲,指向腹外方等形态特征可与近似种南城华南溪、中型华南溪蟹和崇仁华南溪蟹鉴别。沈氏华南溪蟹雄性第一腹肢未节较窄小,末端尖细,第一腹肢末端超越腹锁突,抵达第四五胸甲缝,末节内末角呈圆钝形,内末角低平而不显突出,外末角呈长角状。末第二节为末节长的1.9倍,末节与末第二节相接处显著膨隆,为末节中段宽的1.8倍等形态特征,可与近似种贵溪华南溪、黎川华南溪蟹和弋阳华南溪蟹鉴别。两地新种蟹体内分别检出斯氏并殖吸虫囊蚴,感染率为18.75%(3/16)和21.43%(3/14)。结论福建省北部的松溪与邵武两地斯氏并殖吸虫疫源地发现华南溪蟹属两新种。

斯氏并殖吸虫第一中间宿主拟钉螺属一新种记述(中腹足目,盖螺科)

为调查斯氏并殖吸虫拟钉螺宿主,现场采集螺标本,进行形态分类和生态考察及螺体寄生虫检查。发现拟钉螺属(Tricula)一新种,命名为建欧拟钉螺(Tricula jianouensissp.nov.),螺壳高3.125 mm,壳宽1.600 mm,体螺层高1.125 mm,壳口长径1.275 mm,壳口宽径0.925 mm。螺口外缘翘起呈铲状;轴缘与外缘形成较窄夹角,内唇嵴明显高出,与体螺层间有一沟状隙。齿舌每一横列有7枚齿,齿式:2-1-2/2-2.3-1-3.11(14).14(15)。该螺充当斯氏并殖吸虫第一中间宿主,斯氏并殖吸虫尾蚴感染率为0.11%。

日本血吸虫和斯氏并殖吸虫的rDNA-ITS2遗传多态性研究

目的分析日本血吸虫和斯氏并殖吸虫的核糖体DNA第二内转录间隔区(rDNA-ITS2)基因的遗传变异。方法采集2种吸虫成虫标本,提取其基因组DNA,PCR特异性扩增rDNA-ITS2基因并测序;Clusterx软件进行多序列对比;MEGA4软件计算遗传距离,NJ法和MP法构建系统进化树;DNAsis软件对rDNA-ITS2序列片段进行模序分析。结果2种方法构建的遗传系统进化树基本结构相似,日本血吸虫与斯氏并殖吸虫间存在较远的遗传距离,但二吸虫ITS2序列间有42.7%的相似性。利用DNAsis软件在日本血吸虫和斯氏并殖吸虫的rDNA-ITS2序列中发现AP_2_CS6、bHLH_CS和CAP_site3种相同的转录因子。结论日本血吸虫和斯氏并殖吸虫虽然在rDNA-ITS2基因水平上存在明显种间差异,但在rDNA-ITS2序列、转录因子方面具有重要的相似性。

湖北某自然村斯氏并殖吸虫宿主感染情况与问卷调查

本文通过检测第二中间宿主锯齿华溪蟹(Sinopotamon denticulatum)、保虫宿主家猫和家犬感染斯氏并殖吸虫情况,以及问卷调查人群对斯氏并殖吸虫病认知、行为等方法,调查湖北省保康县尧治河自然村斯氏并殖吸虫病流行情况。结果表明,锯齿华溪蟹囊蚴感染率为20.5%(46/214),其中自然村磷矿开发区囊蚴感染率为15.6%(20/128),非开发区为30.2%(26/86),两者差异有统计学意义(χ2=6.5,P<0.05)。家猫感染率为25%(6/24),家犬感染率为17.6%(6/34),两者差异无统计学意义(χ2=0.46,P>0.05)。问卷调查结果表明,家猫与家犬均有溪沟觅食及排便行为。儿童有食生或半生溪蟹习惯。本地具备斯氏并殖吸虫病流行病学所需的自然生态环境,存在斯氏并殖吸虫病流行的威胁。

免疫印渍技术用于斯氏并殖吸虫病抗原检测的研究

采用免疫印渍技术分析了斯氏并殖吸虫 30、60和 90d虫体抗原组份与斯氏、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫、血吸虫、囊虫、包虫病人和健康人血清反应情况。结果发现斯氏和卫氏并殖吸虫病人血清均可识别 9条抗原多肽 ,分子量分别为 1 7、2 7、2 9、35 5、37 5、60、72和 90kDa ,其中 35 5、37 5和 39kDa三条抗原带可 1 0 0 %同 2种并殖吸虫病人血清起反应 ,特异性达 1 0 0 %。 72和 90kDa抗原多肽可与其他寄生虫病人和正常人血清发生交叉反应。不同虫龄期的抗原在反应条带上无明显区别 ,但以 30d龄虫体抗原的显色更清晰。结果提示 35 5、37 5、和

斯氏并殖吸虫乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶及酯酶同工酶的研究

本文采用Disc-PAGE电泳,首次对我国独有的斯氏并殖吸虫(Paragonimus skrjabini Chen,1959)成虫、童虫、囊蚴的乳酸脱氢酶(以下简称LDH)、苹果酸脱氢酶(以下简称MDH)和酯酶(以下简称EST)同工酶进行了研究。 在成虫、童虫、囊蚴间,LDH、MDH、EST同工酶在酶带数、排列型式、Rf值、相对活性和优势酶带的位置都存在差异。 根据虫体和宿主组织同工酶谱的不同,可以认为是本虫本身所具有。 同工酶作为其分类指标时,不仅要比较不同虫种成虫稳定的同工酶谱,也要比较同工酶在个体发育型式间的差异。

湖北十堰地区斯氏并殖吸虫病流行状况变化及原因分析

目的调查湖北省十堰地区斯氏并殖吸虫病流行状况变化,分析其原因。方法 2011年选择十堰地区丹江口市、竹山县和竹溪县3个镇进行流行病学调查和回顾性分析。调查斯氏并殖吸虫中间宿主拟钉螺与华溪蟹和保虫宿主(猫、犬、果子狸、野猫)的感染率。结果斯氏并殖吸虫病流行区中间宿主拟钉螺和华溪蟹的感染率分别为0.25%和9.11%。与1988年(87.10%)相比,华溪蟹的感染率明显下降。结论湖北省十堰市原流行区仍有斯氏并殖吸虫病流行,生态环境改变可能导致华溪蟹的感染率下降。

qRT-PCR检测斯氏并殖吸虫不同虫期PsMt01基因表达研究

建立实时荧光定量qRT-PCR 方法检测斯氏并殖吸虫不同虫期免疫诊断相关的虫体蛋白 PsMt 01 mRNA的表达，探讨其生物学功能。采用Trizol方法提取虫卵、囊蚴、幼虫、童虫、成虫的总RNA，将其反转录为cDNA，以qRT-PCR方法检测PsMt 01 mRNA的变化。研究表明， PsMt 01 mRNA的表达随发育进程呈现逐步升高，在0～7周的幼虫期（42.56±0.35）和童虫期（44.12±0.56）达到峰值。因此推断PsMt 01蛋白在虫体发育的早期发挥着重要作用，可能与免疫逃避和组织迁移等活动相关。

我国五省斯氏并殖吸虫群体形态学的分类地位研究

目的在于从形态学角度研究我国五省(广东、福建、云南、湖北、四川)斯氏并殖吸虫各群体之间的种内差异以及四川并殖吸虫独立性问题。并比较宫崎、泡囊并殖吸虫与斯氏并殖吸虫在形态学方面的种间差异。应用光镜方法分别观察五省斯氏并殖吸虫成虫染色标本的主要形态特征并对表型观察指标(成虫长宽比例、睾丸长度与体长比例、口腹吸盘比例)进行统计学分析。从形态学方面观察结果来看,五省斯氏并殖吸虫群体之间存在的差异较小,其中四川并殖吸虫与斯氏并殖吸虫之间存在的差异也不大。泡囊并殖吸虫在形态学方面与斯氏并殖吸虫各地域株也较为相似。日本的宫崎并殖吸虫在形态学方面与斯氏并殖吸虫福建地域株最为接近。结论,其一综合以上形态学的研究结果,广东、福建、云南、湖北和四川五省斯氏并殖吸虫群体可能均属斯氏并殖吸虫同一虫种,由于受地理因素影响,种内可能存在着不同的地域株。四川并殖吸虫与斯氏并殖吸虫可能系同种异名。其二泡囊并殖吸虫与日本的宫崎并殖吸虫很可能也是斯氏并殖吸虫的同种异名。为进一步明确五省斯氏并殖吸虫群体及泡囊并殖吸虫与日本的宫崎并殖吸虫的分类地位尚需结合分子生物学的研究进行综合分析。

酶免疫转移印渍法对斯氏并殖吸虫抗原的分析和应用研究

由于并殖吸虫抗原成分复杂,检测和分析特异的抗原成分,在并殖吸虫病的免疫诊断和抗原的分离纯化方面都具有重要意义。本文应用酶免疫转移印渍法(EITB)分析斯氏并殖吸虫成虫、幼虫抗原,并用于该病的诊断,取得了较满意的结果。

卫氏与斯氏并殖吸虫在实验动物体内分布的比较观察

目的比较两种主要对人体致病的肺吸虫在实验动物肺内与肺外(胸、腹腔)的分布,为临床诊断及药物治疗提供参考。方法粪检肺吸虫卵阴性的猫犬分别经口感染卫氏并殖吸虫(P.W)与斯氏并殖吸虫(P.S)囊蚴,饲养3个月后粪检肺吸虫卵阳性时对犬、猫进行解剖,观察与统计内肺外虫数。结果猫犬解剖所获得P.W与P.S成虫均以左、右肺下叶寄生成虫数最多,猫、犬感染P.W后检获肺外期与左、右肺的童虫数均无显著性差异(P>0.05)。猫感染P.S后所检获肺外期童虫数与左、右肺的童虫数有显著性差异(P<0.05),而犬感染P.S所检获肺外期童虫数与左、右肺的童虫数有高度显著性差异(P<0.01)。猫感染P.W与P.S囊蚴后虫体平均回收率为41.84%,39.85%;犬感染P.W与P.S囊蚴后虫体平均回收率分别为47.44%,24.57%。经统计学处理猫感染两种虫体回收率显著高于犬(P<0.05)。结论两种肺吸虫在实验动物犬、猫肺部的分布均以左、右肺下叶寄生成虫数最多,猫犬感染P.S所检获的肺外期童虫数与检获左、右肺内的童虫数分别为有显著性差异(P<0.05)与高度显著性差异(P<0.01),猫感染虫体的回收率明显高于犬。

斯氏并殖吸虫抗原致大鼠脑组织病变的光镜、电镜观察

目的研究斯氏并殖吸虫大鼠脑病的病理改变。方法自并殖吸虫流行区采集溪蟹,分离斯氏并殖吸虫囊蚴,经腹腔注射感染犬,3个月后剖杀,检获斯氏狸殖吸虫成虫制备抗原,用于制作SD大鼠肺吸虫脑病模型。将6只SD雄性大鼠随机等分为并殖吸虫注射抗原的实验组、注射生理盐水的对照组。24h后解剖大鼠,取脑组织、固定、切片。光镜观察大鼠脑组织病理变化,电镜观察超微结构病理变化。结果 HE显示抗原注射大鼠脑血肿周围组织水肿明显,且局灶状坏死,神经元皱缩,尼氏小体溶解,周围出现间隙,神经突呈浅淡或消失,可见单核细胞及胶质细胞反应。电镜显示抗原注射组大鼠大脑皮质神经元胞体肿胀,核移位且形状不规则,核膜凸凹不平,核质溢出;染色质为絮状;线粒体肿胀,粗面内质网扩张呈囊泡化;脂褐素较多。结论肺吸虫抗原注射大鼠脑可引起脑组织光镜和超微结构改变:细胞肿胀,线粒体肿胀,内质网扩张。

斯氏并殖吸虫感染犬肝、肺组织中JAK-STAT和NF-Κβ的表达

目的探讨JAK-STAT、NF-Κβ在斯氏并殖吸虫感染犬肺、肝组织表达和意义。方法自流行区采集溪蟹,分离斯氏并殖吸虫囊蚴,经腹腔注射感染犬,3月后剖杀,取肝、肺组织,固定、切片,HE染色后光镜下观察虫体周围的组织细胞反应,免疫组织化学方法观察JAK-STAT和NF-Κβ的表达水平。结果肝、肺组织中虫体周围出现较明显的坏死区、出血灶和炎症反应,有嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等炎症细胞的浸润;肝、肺组织中JAK-STAT、NF-Κβ呈阳性表达,比正常组织表达高(P<0.05)。结论斯氏并殖吸虫在肝、肺组织中的机械破坏作用和炎症病理反应激活了JAK-STAT、NF-Κβ信号的表达。

斯氏并殖吸虫宿主南海溪蟹属一新种记述(十足目:溪蟹科)

目的记述南海溪蟹属一新种。方法在福建省永泰、闽清、尤溪、松溪、政和与寿宁等地采集蟹类标本,进行形态学观察,调查孳生地和蟹感染并殖吸虫情况结果发现南海溪蟹属Nanhaipotamon一新种,定名为福建南海溪蟹N.fujianense sp.nov.。福建南海溪蟹正模(FJ6132-1)♂,头胸甲长18.44 mm,宽23.64 mm,厚12.61 mm;配模(FJ6132-2)♀,头胸甲长18.76mm,宽25.25 mm,厚14.31 mm。雄性第1腹肢术节的内末角呈三角形圆凸,外末角末部呈斧状扩展,外侧缘轻度弯曲斜列;末第2节为末节的2.1倍。该蟹主要栖息于水流量小的山坑泥砂石缝中。在永泰、闽清、尤溪、松溪与政和等5地采集到的福建南海溪蟹中检出斯氏并殖吸虫囊蚴。结论记述南海溪蟹属新种福建南海溪蟹,并证实其为斯氏并殖吸虫第2中间宿主。

斯氏并殖吸虫线粒体Cytb基因的扩增、测序以及遗传进化分析

目的扩增出斯氏并殖吸虫线粒体Cytb(cytochrome B)基因片段并测序,分析该基因对吸虫遗传分类的意义。方法提取斯氏并殖吸虫成虫基因组DNA,PCR扩增线粒体Cytb基因,克隆质粒并测序。在NCBI的GeneBank中作相似性和同源性检索,用DNAsis等软件分析这些吸虫的线粒体Cytb基因,采用最大简约法(MP)和邻位相连法(NJ)构建系统进化树,用MEGA4软件对遗传距离进行计算分析。结果获得542bp的斯氏并殖吸虫线粒体Cytb基因片段,通过在GeneBank数据库中Blast发现,斯氏并殖吸虫的Cytb序列与日本血吸虫(中国流行区虫种)、异盘并殖吸虫、哈氏并殖吸虫以及巨睾吸虫等7种吸虫有相似性,斯氏并殖吸虫与日本血吸虫的遗传距离最近。结论线粒体Cytb基因可作为吸虫遗传进化分类的依据之一,也是斯氏并殖吸虫与血吸虫等易出现较高的交叉反应率的原因之一。

斯氏并殖吸虫初级精母细胞减数分裂的透射电镜观察

本文用透射电镜首次观察了斯氏并殖吸虫的初级精母细胞第一次减数分裂,其中包括前期I的细线期、偶线期、粗线期和终变期,中期I、后期I和间期的超微结构特点。该虫雄性生殖细胞中染色体的遗传现象,类似于哺乳动物的减数分裂过程,同属终端减数分裂。另方面,雄性生殖细胞在分裂过程中,胞质的分裂不够完全,两个子细胞之间仍然由原生质构成的细胞间桥连接。

斯氏并殖吸虫病致左上腹直肌炎性肉芽肿超声表现1例

患者女,8岁10个月,因“左上腹包块1个月”来我院就诊。有生吃溪蟹、饮生水史。体格检查:发育正常,精神好,腹壁皮肤色泽及皮温正常,未见红肿及斑丘疹,右侧腹平软,无压痛及反跳痛;左上腹壁较右侧稍隆起,触及包块,质地中等,边界欠清,上至脐上约5 cm,下达脐下约2 cm,伴轻微触痛。实验室检查:白细胞计数11.55×10^(9)/L,嗜酸性粒细胞比率36.7%,嗜酸性粒细胞绝对值4.24×10^(9)/L,淋巴细胞绝对值4.01×10^(9)/L,肌酐33.9μmol/L。胸片检查:未见明显异常。

福建北部地区斯氏并殖吸虫疫源地宿主感染情况分析

目的考察福建北部地区斯氏并殖吸虫中间宿主螺、蟹种群及其孳生地,比较生态环境改变前后感染率,并分析其变化原因。方法 2009-2019年,以并殖吸虫病例为线索,对福建省北部南平市的建瓯市小桥镇涤上村、东峰镇桂林村、城关镇七里街村和建阳区崇雒乡上洋村、政和县东平镇西表村、岭腰乡前溪村以及三明市的三元区居阳村等11处调查点进行现场采集螺、蟹,并考察其生态环境,设框(33 mm2)检测螺分布密度,计算螺的并殖吸虫尾蚴感染率和蟹的并殖吸虫囊蚴感染率、感染度。囊蚴采用人工感染健康犬(2只)和PCR扩增内转录间隔区2 (ITS2)序列、线粒体细胞色素氧化酶1 (CO1)基因进行鉴定。考察原孳生地生态环境的变化,复查螺、蟹的感染率、感染度,分析环境变化对感染率的影响。结果 11处调查点查见唐氏拟小豆螺、建瓯拟小豆螺和小桥拟钉螺等3种螺。山涧水源小沟或渗水湿地等微型生态环境为螺的适宜孳生地,螺多栖息于沟内水线上下5 mm的潮湿环境,主要附着于沟内潮湿的陈旧落叶、枯枝,其次为石块上,泥砂中较少。唐氏拟小豆螺、建瓯拟小豆螺和小桥拟钉螺的平均分布密度分别为156/框、179~291/框和12~266/框;各调查点均有螺查出斯氏并殖吸虫尾蚴,唐氏拟小豆螺、建瓯拟小豆螺和小桥拟钉螺的感染率分别为0.22%(4/1 851)、0.38%(36/9 420)、1.10%(102/9 247)。11处调查点查见福建华溪蟹、福建博特溪蟹、角肢华南溪蟹和待定种华南溪蟹等4种溪蟹。溪蟹多栖息于水流缓慢的山涧,白天潜伏于石块下,夜间四出觅食。溪蟹的斯氏并殖吸虫囊蚴感染率为38.99%~96.77%,平均感染率为80.21%(231/288),平均感染度为19.8个囊蚴/蟹。PCR结果显示,囊蚴样品扩增出的ITS2序列约500 bp,与GenBank中斯氏并殖吸虫相似性为99%;CO1基因序列约450 bp,与GenBank中宫崎并殖吸虫相似性为100%。人工感染实验结果显示,2只感染犬解剖后分别获得6和8条成虫,经鉴定均为斯氏并殖吸虫。孳生地环境改变有山洪暴发、垦植、干旱和人为破坏等原因,孳生地环境改变后对11处19次复查中,有10次未采集到螺,有5次未采集到蟹。5个调查点孳生地环境变化为山洪暴发所致,灾后进行7次调查均未查见螺,其中3处未查见溪蟹。11处调查点孳生地环境改变后,蟹的斯氏并殖吸虫囊蚴感染率为36.11%(91/252),平均感染度为4.9个囊蚴/蟹。孳生地环境改变前后的感染率差异具统计学意义(P<0.05)。结论福建北部建瓯等地为斯氏并殖吸虫高度感染的自然疫源地。孳生地生态环境改变后螺、蟹斯氏并殖吸虫尾蚴/囊蚴感染率下降明显,其中山洪暴发和垦植等是影响螺、蟹感染率下降的主要因素。

闽西斯氏并殖吸虫新疫区的调查

目的调查龙岩市新罗区并殖吸虫病疫源地的虫种和宿主。方法以患者为线索,于2015年10月收集螺蟹和野外猫、犬粪便标本,利用常规法检查并殖吸虫尾蚴、囊蚴和虫卵。结果新罗区五星村为旅游点,检查放逸短沟蜷98只,拟小豆螺32只,建瓯拟钉螺5只,未查及尾蚴。第2中间宿主福建华溪蟹,感染斯氏并殖吸虫囊蚴,感染率达31.43%(22/70),阳性蟹和蟹组织携带囊蚴数分别为1.64个/只和0.21个/g。结论龙岩市新罗区福建华溪蟹斯氏并殖吸虫感染率较高,建议评估对其防控的必要性。