HPCE法测定酸枣仁中斯皮诺素的含量

建立了一种以硼酸钠溶液为背景电解质,高效毛细管电泳法(HPCE)测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法。考察了缓冲溶液浓度,pH值,分离电压对分离条件的影响,确定了30 mmol/L、pH=9的硼酸钠溶液为缓冲液,分离电压为15 kV的最优测定条件。检测波长为254 nm,进样时间为20 s,在5~200μg/mL范围内具有良好的线性关系,检出限为0.75 mg/L。对16个品系的酸枣仁中斯皮诺素含量进行了测定,结果表明此方法准确可靠,精准度高,稳定性好,可用来测定酸枣仁中的斯皮诺素含量。

酸枣仁中6‴⁃阿魏酰斯皮诺素的抗氧化活性研究

目的探讨酸枣仁黄酮成分6‴⁃阿魏酰斯皮诺素抗氧化活性。方法分析6-阿魏酰斯皮诺素的总还原力以及清除DPPH自由基、ABTS自由基和羟基自由基的能力,评价6‴⁃阿魏酰斯皮诺素的体外抗氧化能力;以秀丽隐杆线虫为模型,检测6‴⁃阿魏酰斯皮诺素对秀丽隐杆线虫热应激抗性、氧化应激抗性、体内ROS和MDA水平、GSH-Px活性等影响,评价6‴⁃阿魏酰斯皮诺素的体内抗氧化能力。结果6‴⁃阿魏酰斯皮诺素具有抗氧化能力,其DPPH自由基、ABTS自由基以及羟基自由基清除率IC_(50)值分别为239.02、124.38、192.96μmol/L;6‴⁃阿魏酰斯皮诺素可以增强秀丽隐杆线虫热应激抗性及氧化应激抗性,改善热应激诱导氧化损伤,降低秀丽隐杆线虫体内ROS和MDA水平,升高GSH-Px活性,增加SOD-3和GST-4表达。结论6‴⁃阿魏酰斯皮诺素可以清除自由基,同时提高秀丽隐杆线虫氧化应激抗性,具有良好的抗氧化活性。

UPLC-UV-ELSD测定不同产地炒酸枣仁饮片中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素和6′′′-阿魏酰斯皮诺素的含量

目的建立超高效液相色谱(UPLC)-紫外(UV)-蒸发光散射检测法(ELSD)同时测定不同产地炒酸枣仁饮片中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素和6′′′-阿魏酰斯皮诺素的含量,对不同产地炒酸枣仁饮片进行质量评价。方法采用Waters Acquity UPLC色谱系统,UV检测器,ELSD检测器,色谱柱为ACQUITY C18柱(150 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸水-乙腈(梯度洗脱),流速0.3 mL/min,柱温35℃,UV检测波长335 nm,进样量3μL,喷雾器参数50%,ELSD条件气压172 kPa,漂移管温度60℃。结果在上述色谱条件下测得酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素和6′′′-阿魏酰斯皮诺素分别在27.20~435.20 mg/mL、12.60~200.80 mg/mL、26.38~422.00 mg/mL、24.38~390.00 mg/mL时与色谱峰面积线性关系良好,平均回收率分别为100.01%、99.99%、100.00%、100.04%,相对标准偏差分别为0.17%、0.32%、0.32%、0.32%。结论UPLC-UV-ELSD法准确、灵敏,可作为不同产地炒酸枣仁饮片的质量控制方法,测定结果表明,河北产炒酸枣仁饮片中4种成分含量相对较高。

酸枣仁中斯皮诺素对睡眠剥夺大鼠下丘脑MCH、Orexin-A表达的影响

目的探讨酸枣仁中斯皮诺素对睡眠剥夺大鼠下丘脑黑色素浓集激素(MCH)、食欲素-A(Orexin-A)表达的影响。方法 120只大鼠随机分为对照组、模型组、地西泮组、斯皮诺素组,每组30只,对照组大鼠正常环境下常规饲养,模型组大鼠灌胃给予生理盐水,地西泮组大鼠灌胃给予地西泮(0.8 mg/kg),斯皮诺素组大鼠灌胃给予斯皮诺素(15 mg/kg),剂量10 mL/kg,连续2 d。然后,免疫组化染色法检测大鼠下丘脑MCH、Orexin-A阳性表达,RT-PCR法检测两者mRNA表达,ELISA法检测两者水平。结果与模型组比较,斯皮诺素组MCH阳性表达光密度、面密度、阳性细胞数、mRNA表达、水平显著升高(P<0.01),而Orexin上述指标显著降低(P<0.01)。结论酸枣仁中斯皮诺素可改善睡眠剥夺大鼠睡眠,其机制可能与上调下丘脑MCH表达、下调Orexin表达有关。

生酸枣仁总黄酮的提取及HPLC法同时测定斯皮诺素和6'''-阿魏酰斯皮诺素

以生酸枣仁为原料,以总黄酮的提取量为指标确定生酸枣仁中总黄酮的提取条件,并建立了一种同时测定生酸枣仁中斯皮诺素和6'''-阿魏酰斯皮诺素含量的高效液相色谱(HPLC)分析方法。利用单因素试验和响应面试验进行优化,最终确定超声提取法提取总黄酮的最佳条件为:料液比为1 g∶50 m L,超声时间为60 min,超声功率为270 W,乙醇浓度为50%。在此条件下,生酸枣仁中总黄酮的提取量为6.37 mg/g。测定的色谱条件为:COSMOSIL C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);梯度洗脱,流速为0.80 m L/min;柱温为25℃,检测波长为335 nm。斯皮诺素和6'''-阿魏酰斯皮诺素在50~500μg/m L范围内具有良好的线性关系(r2=0.999,r2=0.999),平均加标回收率为99.96%和100.11%,最低检出限为2.07μg/m L和1.54μg/m L。该方法灵敏度高,专属性强,可用于生酸枣仁中斯皮诺素和6'''-阿魏酰斯皮诺素的测定。

2种斯皮诺素固体分散体的制备及其体内药动学行为

目的制备斯皮诺素固体分散体、磷脂复合物固体分散体,并考察其体内药动学行为。方法溶剂挥发法制备2种固体分散体后,X射线粉末衍射(XRPD)分析存在状态,测定溶解度和体外溶出速率。大鼠灌胃给药后,HPLC法测定斯皮诺素血药浓度,计算主要药动学参数。结果斯皮诺素在2种固体分散体中以无定型状态存在,溶解度、体外溶出速率明显提高。与原料药比较,固体分散体、磷脂复合物固体分散体相对生物利用度分别增加到219.61%、265.39%。结论固体分散体、磷脂复合物固体分散体均可促进斯皮诺素口服吸收,以后者更明显。

神安颗粒多指标质量控制体系的研究分析——HPLC法建立神安颗粒中斯皮诺素含量测定的研究

目的:建立以高效液相色谱法测定神安颗粒中斯皮诺素含量的方法,建立神安颗粒多指标质量控制体系中水溶性成分的控制指标。方法:色谱柱为Kromasil C18柱,流动相以乙腈和水进行梯度洗脱,检测波长为335 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为室温,进样量为10μL。结果:斯皮诺素进样量在0.024～0.192μg范围内与峰面积积分值线性关系良好(R2=0.9995),平均回收率为98.85%(RSD=1.72%)。结论:本方法简便、快捷、专属性强、重现性好,可用于神安颗粒水溶性成分的质量控制。

RP-HPLC测定枣仁安神颗粒中斯皮诺素的含量

目的:建立并应用HPLC法测定枣仁安神颗粒中斯皮诺素的含量。方法:采用Hpersil C18柱(250 mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.03%磷酸水溶液(18∶82)为流动相,检测波长270 nm,流速1.0 mL.min-1。结果:所建立的RP-HPLC含量测定方法线性关系良好(r=0.9991),方法平均回收率99.3%,RSD=1.4%(n=9)。结论:该分析方法快速、准确,重现性好,可用于枣仁安神颗粒的质量控制。

不同制法酸枣仁汤中总黄酮和斯皮诺素的含量比较

目的：比较酸枣仁汤饮片汤剂与配方颗粒汤剂中总黄酮和斯皮诺素的含量差异。方法：采用紫外-分光光度法和高效液相色谱法分别对酸枣仁汤中总黄酮和斯皮诺素含量进行了测定。选用Kromasil C18柱（4．6mm×250mm，5μm）；乙腈-1％冰醋酸溶液为流动相；流速为1．0mL·min^-1；柱温为30℃；检测波长为335nm。结果：总黄酮和斯皮诺素线性范围分别为0．0063—0．0189mg·mL^-1，（r=0．99989）、0．0214—0．1284 μg（r=0．99998）。同批次饮片制备的2种汤剂中总黄酮和斯皮诺素含量无明显差异，不同厂家及同一厂家不同批次配方颗粒汤剂中总黄酮和斯皮诺素含量差别较大。结论：饮片合煎和单煎配方颗粒2种制备方法对酸枣仁汤中总黄酮和斯皮诺素含量无明显影响。生产厂家应加强质量控制，以保证配方颗粒有效成分含量稳定。

双波长HPLC法同时测定五加枣仁膏滋中紫丁香苷和斯皮诺素含量测定

目的：建立一种HPLC法同时测定五加枣仁膏滋中主要有效成分紫丁香苷和斯皮诺素含量。方法：乙腈－0．1％磷酸水溶液－梯度洗脱，检测波长：紫丁香苷检测波长为265 nm、斯皮诺素检测波长为335nm；柱温：40℃。结果：紫丁香苷、斯皮诺素进样量分别在0．16～0．80μg，0．10～0．50μg范围内线性关系良好，相关系数均为0．9999，平均加样回收率（ n＝6）分别为98．81％、99．36％。经测定五加枣仁膏滋中紫丁香苷、斯皮诺素含量分别为0．028％和0．014％。结论：本方法一次性同时测定五加枣仁膏滋中紫丁香苷、斯皮诺素含量，方法简单准确，重复性好，可用于该制剂的质量控制。

HPLC法同时测定酸枣安神颗粒中木兰花碱、斯皮诺素、芦丁、橙皮苷的含量研究

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)同时对酸枣安神颗粒中木兰花碱、斯皮诺素、芦丁、橙皮苷4种化学成分进行含量测定。方法:应用HPLC进行梯度洗脱,采用Eclipse XDB-C18(4.6×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸水为流动相,检测波长270 nm,柱温30℃。结果:木兰花碱、斯皮诺素、芦丁、橙皮苷分别在0.054~0.807、0.047~0.699、0.019~0.292、0.062~0.930μg范围内与峰面积呈线性关系(γ^2≥0.9998),加样回收率介于98.25%~99.01%(n=6,RSD≤2%),精密度、稳定性、重复性均良好。结论:本方法操作简单可行,结果稳定可靠,可用于酸枣安神颗粒的质量控制,为开展质量评价提供参考。

酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B及斯皮诺素的动态研究

建立了PHLC-UVD测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B及斯皮诺素含量的方法。并对河北省北部地区和中南部地区8个不同采收时间酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B及斯皮诺素的含量进行测定。以期为确定河北产酸枣仁最佳采收期提供一些依据。研究发现,不同采收时间酸枣仁中有效成分含量差别很大。结果表明,河北中南部地区酸枣仁的较佳采收期为9月中旬,北部地区为10月中旬;河北中南部产酸枣仁质量较好。

蜜炙酸枣仁中斯皮诺素含量测定

目的：以高效液相色谱法测定蜜炙酸枣仁中斯皮诺素的含量。方法：采用反相高效液相色谱法,以Wonda Cract ODS-2（250 mm×4.6 mm,5μm）为色谱柱,乙腈-水为流动相,检测波长335 nm,流速1 mL/min,柱温30℃。结果：斯皮诺素的线性范围0.005~0.3 mg/mL,r=0.9965,平均回收率为99.74%,RSD=1.46%。结论：该方法准确、重现性好,可为蜜炙酸枣仁的炮制工艺研究及质量控制提供检测标准。

斯皮诺素通过减轻炎症改善阿尔茨海默病

目的阿尔茨海默病(AD)是以记忆障碍和学习认知损伤为特征的慢性神经退行性疾病。目前为止,AD的确切发病机制并未完全阐明,主要有β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积学说、氧化应激学说、神经炎症学说和细胞凋亡学说等。近年来大量研究发现,神经炎症在AD症的发生发展中起着重要作用,脑内慢性炎症反应是AD的病理特征之一,Aβ沉积激活神经胶质细胞释放促炎因子,如白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和一氧化氮(NO)等,进而损伤周围神经元,引起突触丢失和细胞凋亡,最终导致学习记忆功能受损。减轻炎症被认为是改善甚至是治疗AD症的重要途经之一。斯皮诺素(spinosin),属于黄酮类化合物,是酸枣仁(ZiziphiSpinosaeSemen)中主要活性成分之一。本文先在化学角度研究了斯皮诺素对Aβ聚集的影响,又在小鼠海马脑片上探讨了其改善AD的机制。方法和结果37℃孵育96 h产生的Aβ25-35聚集体与新鲜配制的Aβ25-35单体相比,粒径显著增大;斯皮诺素(终浓度为30μmol·L-1)与Aβ单体一起孵育后,粒径明显降低,表明斯皮诺素缓解Aβ25-35的聚集。Aβ25-35(5μmol·L-1)组炎症因子IL-1β和PGE-2含量显著升高;在脑片上预给药斯皮诺素0.5 h(终浓度为30μmol·L-1),该2种炎症因子的含量降低至接近对照组。COX-2蛋白可以降解2-花生四烯酸甘油从而产生PGE-2。本研究检测了各组COX-2蛋白表达。结果显示,斯皮诺素抑制Aβ25-35引起的COX-2蛋白的过表达。随后研究了斯皮诺素对促凋亡蛋白Bax的作用。Aβ25-35处理海马脑片后,上调Bax蛋白表达,增加细胞凋亡;用斯皮诺素预保护后,Bax蛋白表达显著下降,抑制Aβ25-35引起的细胞凋亡。长时程增强(LTP)是反应学习记忆的主要指标之一。采用膜片钳技术,记录兴奋性突触后场电位,研究斯皮诺素对Aβ25-35引起的学习记忆障的改善作用。用斯皮诺素预保护后,LTP比例从Aβ25-35组的108%回升至与对照组的147%,对照组为142%。表明斯皮诺素对Aβ25-35诱导的学习记忆障碍有改善作用。结论斯皮诺素通过抑制COX-2蛋白过表达,减轻炎症,减少细胞凋亡,改善AD症状。

斯皮诺素对人肝微粒体细胞色素P_(450)酶的体外抑制作用

目的:研究斯皮诺素对人肝微粒体细胞色素P_(450)(CYP_(450))酶7种亚型(CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2D6、CYP1A1、CYP2C19和CYP3A4)的体外抑制作用。方法:以200.00、100.00、50.00、25.00、12.50、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39μmol/L的斯皮诺素与人肝微粒体共同孵育,分别以他克宁、安非他酮、盐酸阿莫地喹、双氯芬酸钠、美芬妥英、氢溴酸右美沙芬和咪达唑仑作为上述7种亚型CYP_(450)酶的特异性探针药物。采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法测定7种探针药物的代谢产物生成量,计算斯皮诺素对人肝微粒体中7种亚型CYP_(450)酶的半数抑制浓度(IC50)。结果:斯皮诺素对人肝微粒体7种亚型CYP_(450)酶的IC50分别为1 714、1 158、226.1、2 288、80.59、101.1、1 119μmol/L,均大于50μmol/L。结论:斯皮诺素对人肝微粒体CYP_(450)酶的上述7种亚型均无抑制作用,引发药物代谢性相互作用的可能性较小。

HPLC-MS法同时测定百合枣仁袋泡茶中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和斯皮诺素的含量

目的探究百合枣仁袋泡茶的制备工艺,建立简单、快速、灵敏同时测定百合枣仁袋泡茶中酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素的HPLC-MS方法。方法采用MRM多反应监测负离子模式,Welch Ultimate XB-C18(2.1 mm×50 mm,5μm)色谱柱,0.1%甲酸水-乙腈梯度洗脱,流速为0.60 mL/min,柱温30℃。结果酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素在5~1000 ng/mL的浓度范围内,线性关系良好;平均回收率为95.83%~100.02%,RSD值在3.0%~7.8%之间;10批百合枣仁袋泡茶的酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素含量分别为(102.92±2.60)μg/g、(49.81±1.12)μg/g和(205.28±5.95)μg/g,其RSD值分别为3.86%、2.25%和2.90%。结论该法专属性强、快速灵敏、操作简单快捷,可用于百合枣仁袋泡茶中酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素含量的测定。

HPLC-MS-MS法同时测定酸枣仁分散片中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素的含量

目的：建立高效液相色谱一电喷雾电离质谱法同时测定酸枣仁分散片中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素含量的方法。方法：采用YMCODS．AQ^TM色谱柱，乙腈．0．1％甲酸溶液（36：64，V／功为流动相，流速0．3mL／min，柱温30℃，进样量20止；ESI负离子模式下，采用多重反应监测模式，监测的离子为m／z1205．6～1073．6（皂苷A），m／z1043．6～911．7（皂苷B），m／z607．2-427．0（斯皮诺素）。结果：分散片中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和斯皮诺素含量与峰面积的线性关系良好驴〉0．9992），平均加样回收率分别为97．39％、97．86％3198．48％，相对标准偏差均小于1．0％。酸枣仁分散片中3种组分的含量分别为4．15、1．46mg／g和2 1．46mg／g。该方法快捷、准确、重复性好，可用于酸枣仁分散片中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和斯皮诺素的同时测定。

HPLC法和UV法测定复方枣参片中斯皮诺素和总皂苷含量

目的建立复方枣参片中斯皮诺素和总皂苷的含量测定方法。方法 HPLC法测定斯皮诺素采用Agilent Zorbax SB C_(18)柱(250mm×4.6 mm,5μm),柱温25℃,流动相为乙腈-水,采用梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为335nm。UV法测定总皂苷采用Amberlite XAD-2大孔树脂柱层析后,香草醛-冰醋酸法显色测定,检测波长为560nm。结果斯皮诺素和总皂苷的线性范围分别为20~100μg/ml(r=0.999 0)和40~200μg/ml(r=1.000 0),准确度平均值分别为99.55%和99.85%。结论本方法准确可靠,可作为复方枣参片的质量控制依据。

斯皮诺素磷脂复合物的制备及表征

此研究旨在制备斯皮诺素磷脂复合物(SPI-PLC)并对其进行表征,为开发一种新型的药食同源的天然镇静催眠药物剂型及工业化生产辅以理论基础。采用溶剂挥发法制备SPI-PLC,以斯皮诺素与磷脂的复合率(CR)为质量评价指标,应用单因素实验和Box-Behnken设计-响应面法优化制备工艺;应用紫外光谱(UV)和红外光谱(IR)分析表征目标复合物是否形成,并考察其表观油水分配系数、粒径及分散程度。结果表明,制备SPI-PLC的最佳工艺条件为丙酮作反应溶剂,药脂比为1∶16.42,搅拌速度、反应温度和反应时间分别为836 r/min、40℃和3.27 h,复合率可达90.75%±0.64%,UV和IR分析表明斯皮诺素与磷脂并非是简单的物理混合,而是形成了磷脂复合物;在水中复合物粒径为(542.1±12.5)nm,多分散指数(PDI)为0.167±0.024;SPI-PLC的表观油水分配系数增大,具有一定的增溶作用。本研究成功制备了SPI-PLC,工艺简单可行,为斯皮诺素的制剂学研究及后期如何提高生物利用度提供了参考。

高效液相色谱法同时测定改善睡眠颗粒中天麻素、红景天苷、栀子苷和斯皮诺素含量的应用

目的 建立高效液相色谱同时测定“改善睡眠颗粒”中天麻素、红景天苷、栀子苷和斯皮诺素含量的方法 。方法检测对象为以上提到的“改善睡眠颗粒”中的四个主要成分。采用的色谱柱为Thermo Fisher Syncronis C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速为1.0 ml/min;柱温为30℃,进样量为10μl。检测波长分别设定为220、238、275、335 nm。结果 天麻素、红景天苷、栀子苷和斯皮诺素分别在0.8032-4.0160、0.5392-2.6960、2.6916-13.4580、0.2112-1.0560μg范围内线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验的均RSD〈2.00%;加样回收率分别为98.17%、99.37%、98.84%、99.27%;RSD分别为0.67%、0.48%、0.49%、0.93%。结论 高效液相色谱法可同时测定“改善睡眠颗粒”中天麻素、红景天苷、栀子苷和斯皮诺素的含量,且该方法简便、准确,可用于该制剂的质量控制。