多药耐药蛋白1a对苯甲酰新乌头原碱的效-毒-体内暴露的调控研究

目的探究多药耐药蛋白1a(Multidrug resistance protein 1a,Mdr1a)对苯甲酰新乌头原碱(Benzoylmesaconine,BMA)的镇痛和抗炎活性、神经和心脏毒性以及体内暴露的调控作用。方法Mdr1a^(-/-)和野生型FVB小鼠分别灌胃20 mg·kg^(-1)BMA后,采用醋酸致疼痛扭体模型和角叉菜胶诱导急性炎症模型来考察Mdr1对BMA的镇痛和抗炎活性的调控作用,同时采用脑和心脏组织病理切片和ELISA法考察Mdr1对BMA神经和心脏毒性的调控作用。Mdr1a^(-/-)和野生型FVB小鼠静脉注射1 mg·kg^(-1)或灌胃20 mg·kg^(-1)BMA后,采用超高效液相-质谱(UHPLC-MS/MS)技术测定小鼠各组织和血浆中BMA的浓度,考察Mdr1a对BMA组织分布及药动学特征的影响。采用在体单向肠灌流模型考察Mdr1a对BMA肠道吸收的影响。结果口服20 mg·kg^(-1)BMA后,Mdr1a^(-/-)小鼠的疼痛扭体次数较野生型FVB小鼠下降60.82%(P<0.05),足肿胀率无明显变化。与野生型FVB小鼠相比,Mdr1a^(-/-)小鼠口服BMA 8 h后海马DG区和CA区可见明显的锥体细胞核固缩,S100B钙结合蛋白水平增加了0.60倍,脑和心脏中BMA的含量分别增加了3.12和2.64倍(P<0.05),但心肌组织未见异常,肌酸激酶水平也无明显变化。组织分布结果显示,静注BMA 0.5和2 h后,与野生型FVB小鼠相比,Mdr1a^(-/-)小鼠的脑、心脏、肾脏、结肠和血浆中BMA的含量均显著上升(P<0.05)。药动学实验结果表明,与野生型FVB小鼠相比,BMA在Mdr1a^(-/-)小鼠上的生物利用度(F)增加了4.53倍,同时,口服20 mg·kg^(-1)BMA后,药时曲线下面积(AUC_(0-t))和AUC_(0-∞)分别增加了1.46和2.63倍,清除率(Cl)和表现分布容积(V_(d))分别降低了66.13%和78.85%(P<0.05)。肠灌流实验结果表明,与野生型FVB小鼠相比,BMA在Mdr1a^(-/-)小鼠十二指肠上的有效表观渗透系数,吸收率和吸收量分别显著增加了4.00、3.96和3.96倍(P<0.05)。结论Mdr1a通过改变BMA的组织蓄积、体内暴露量和肠道吸收,参与调节BMA的镇痛作用和神经毒性,但BMA的抗炎作用和心脏毒性可能与Mdr1a的缺失无关。

SPE-HPLC测定复方羊角颗粒中苯甲酰新乌头原碱等3个单酯型生物碱的含量

目的:建立复方羊角颗粒中苯甲酰新乌头原碱等3个单酯型生物碱的含量测定方法。方法:采用强阳离子吸附树脂MCX固相萃取小柱对复方羊角颗粒进行净化,高效液相色谱法测定,色谱柱:SVEA^(TM)C_(18)Opal(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为乙腈-四氢呋喃(25∶12),流动相B为0.1 mol·L^(-1)醋酸铵溶液(含0.05%冰醋酸),梯度洗脱;检测波长:235 nm;柱温:25℃;流速:1.0mL·min^(-1);进样量:20μL。结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的线性范围分别为2.27~98.61(r=1.0000)、0.61~26.53(r=1.0000)、1.00~43.50μg·m L^(-1)(r=0.999 9);平均回收率及RSD分别为93.9%及2.4%、95.0%及2.6%、91.0%及3.0%。结论:本方法可为复方羊角颗粒的质量控制提供依据。

应用高速逆流色谱技术从附子中分离制备苯甲酰新乌头原碱

利用高速逆流色谱技术,一次进柱即可实现从附子粗提物中分离得到苯甲酰新乌头原碱。两相溶剂系统用氯仿-甲醇-0.3mol/L盐酸三元系统,上相为固定相,下相为流动相,转速为892rpm,流速为1.2ml/min。通过ESI-MS、13C-NMR、1H-NMR鉴定,确认了其化学结构。经HPLC分析,纯度达98%以上。

苯甲酰新乌头原碱对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖及凋亡的影响

目的:探究苯甲酰新乌头原碱(BMA)对骨髓瘤细胞RPMI8226(RPMI8226)增殖及凋亡的影响.方法:将对数期生长RPMI8226细胞随机分为空白对照组、BMA(0. 1、0. 5、1、10、100μmo L)组,24 h后用CCK8测定各组光密度(A),根据A值计算出半数抑制质量浓度(IC50);根据所测IC50将对数期生长RPMI8226细胞分为空白对照组、阴性对照组、BMA(4、6、8μmo L)各组,作用12～48 h,用CCK8测定不同作用时间下各组RPMI8226细胞A值,计算出各组增殖抑制率;根据BMA对RMPI8226增殖抑制率的影响规律再设空白对照组、BMA(4、8μmo L)组,作用24、48 h,用Annexin V/PI双染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果:作用24 h后,各组BMA换算成质量浓度,在13～13 000 ng/m L(即1～10μmo L)质量浓度,各组A值随药物质量浓度的增加而减少,P <0. 05,其IC50质量浓度为1 040 ng/m L;作用12～48 h,各组细胞增殖抑制率随加入的BMA的增加、作用时间的增加而增加,各组P <0. 05;作用24、48 h后各组细胞凋亡率随加入BMA的增加、作用的增加而增大,各组P <0. 05.结论:BMA能抑制RPMI8226增殖并使其凋亡.

HPLC同时测定人血浆中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱和苯甲酰新乌头原碱的含量

目的：采用HPLC建立附子中4种生物碱类成分在人血浆中含量测定方法。方法：色谱条件为迪马钻石C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相：A为乙腈-四氢呋喃（62∶38）,B为10 mmol/L醋酸铵水溶液,梯度洗脱;流速：1.0 mL/min;检测波长：240 nm;柱温：30℃。结果：新乌头碱、乌头碱、次乌头碱和苯甲酰新乌头原碱的线性范围分别为1.69~1 690μg/mL、1.58~1 582μg/mL、2.56~2 563μg/mL和3.60~3 597μg/mL（r〉0.9985）,加样回收率RSD〈4.5%。结论：该方法灵敏度高、精密度好,可用于附子中4种生物碱成分的药物动力学研究。

LC-MS/MS法测定大鼠血浆苯甲酰新乌头原碱浓度

目的建立高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS法)测定大鼠血浆苯甲酰新乌头原碱浓度的方法,并初步研究其在大鼠体内的药代动力学(药动学)行为。方法以甲基叔丁基醚液-液萃取大鼠血浆样品,采用UltimateAQ-C18column(3.0μm,2.1mm×100.0mm)色谱柱进行色谱分离,柱温40℃,以流动相乙腈(A,含体积分数0.001甲酸)-体积分数0.001的甲酸溶液(B)梯度洗脱(0~0.5min,体积分数0.25A;0.5~3.5min,体积分数0.25~0.70A;3.5~4.0min,体积分数0.70A),流量0.4mL/min,进样量10μL,分别以质子数/电荷数的比值(m/z)590.5→540.4和m/z646.7→587.0为待测成分及内标的质谱检测条件。大鼠灌服5、10、20mg/kg苯甲酰新乌头原碱后,分别在0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、9.0、12.0和24.0h取样,测定其血浆中苯甲酰新乌头原碱的浓度,应用药动学数据处理软件DAS2.0计算药动学参数。结果苯甲酰新乌头原碱质量浓度为0.1~1000.0μg/L范围内线性关系良好,定量下限为0.1μg/L;苯甲酰新乌头原碱和内标的提取回收率均高于93%,日内和日间相对标准差(RSD)均<10.7%;苯甲酰新乌头原碱样品在室温和低温长期放置稳定性、冻融稳定性、预处理后供试液稳定性RSD分别小于10.2%、4.6%、10.9%、3.4%;苯甲酰新乌头原碱在大鼠体内吸收较快,达峰时间约2h,但是吸收较差,绝对生物利用度仅有0.76%。结论本文建立的LC-MS/MS法操作简便,稳定可靠,适用于苯甲酰新乌头原碱的药动学研究。

苯甲酰新乌头原碱对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖及凋亡的影响

目的:探究苯甲酰新乌头原碱(benzoylmesaconine,BMA)对骨髓瘤细胞RPMI8226(RPMI8226)增殖及凋亡的影响。方法:将RPMI8226细胞随机分为空白对照组和BMA不同浓度组,用CCK8测定BMA对细胞活性的影响,根据结果计算出半数抑制浓度(the half maximal inhibitory concentration,IC50);根据IC50将对数期生长RPMI8226细胞分为:空白对照组、阴性对照组以及BMA不同浓度组测定BMA对RPMI增值抑制率随浓度及时间的变化;根据增值抑制率情况将对数期生长RPMI8226细胞分为空白对照组及BMA不同浓度组,用AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测BMA对RPMI8226凋亡率的影响随时间浓度的变化。结果:作用24小时,BMA浓度为13～13000ng·ml^(-1)范围内,RPMI8226细胞活性随浓度增加而减小,各组P<0.05,差异有统计学意义,其IC50约为1040ng·ml^(-1);BMA对RPMI8226细胞的增值抑制率随作用浓度、作用时间的增加而增大,各组P均<0.05,差异有统计学意义;RPMI8226细胞凋亡率随BMA作用浓度、作用时间的增加而增大,各组P均<0.05,差异有统计学意义。结论:BMA能抑制RPMI8226增值并促进其凋亡。

高效液相色谱法测定附桂通便颗粒中苯甲酰新乌头原碱和新乌头碱的含量

目的对附桂通便颗粒中苯甲酰新乌头原碱、新乌头碱进行含量测定。方法运用高效液相色谱法(HPLC),Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.015%二乙胺-乙腈溶液,线性梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长240 nm。结果苯甲酰新乌头原碱、新乌头碱分别在0.088 8-0.888 0μg(r=0.999 8)、0.199 0-1.990 0μg(r=0.999 8)范围内,具有良好的线性关系;平均加样回收率依次为99.11%、99.13%,相对标准偏差(RSD)分别为0.76%、1.61%。结论该方法快速、简便,重现性好,可作为该制剂的定量分析方法。

HPLC法测定强筋健骨丸中3种乌头原碱的含量

目的建立强筋健骨丸的含量测定方法。方法以君药制川乌、制草乌中苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱及苯甲酰新乌头原碱为目标成分,采用HPLC法,色谱柱Ultimate XB-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.1mol·L^-1醋酸铵溶液(B);流速:1.0mL·min^-1;检测波长:235nm。结果苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱质量浓度分别在7.580~121.280(r1=0.9999),1.576~25.216(r2=0.9998)和7.732~123.712(r3=0.9999)mg·L^-1范围内线性关系均良好,回收率分别为100.1%,100.0%和99.8%,RSD值分别为0.8%,1.5%和0.6%。结论该方法结果准确、稳定、可靠,能用于强筋健骨丸中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱及苯甲酰次乌头原碱的含量测定,可有效控制产品质量。

小活络丸中乌头类生物碱成分含量测定方法的建立

目的:建立小活络丸中生物碱成分乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱与苯甲酰新乌头原碱的含量测定方法,以完善其质量标准。方法:采用高效液相色谱法,选择PICKERING C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇、乙腈和0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-)1,柱温25℃,检测波长232 nm,进样量15μL。结果:乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱及苯甲酰新乌头原碱分别在各自范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率分别为99.8%(RSD=0.8%)、99.9%(RSD=1.0%)、100.6%(RSD=1.4%)、100.8%(RSD=1.5%)、100.9%(RSD=1.5%)、100.6%(RSD=0.8%)。5批样品中上述6个成分含量范围分别为0.5~2.9、5.4~27.4、0.5~10.5、18.8~24.6、18.8~30.2及142.4~181.6μg·g^(-1)。结论:所建立的同时测定6个生物碱含量的测定方法可准确测定小活络丸中生物碱成分的含量,有助于提高小活络丸的质量标准。

三七伤药片中6种乌头类生物碱含量测定及化学计量学分析

目的:采用高效液相色谱法,建立三七伤药片中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱与苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱6种生物碱类成分的含量测定方法,并根据测定结果进行化学计量学分析。方法:采用混合型阳离子交换反相吸附树脂(MCX)固相萃取小柱对供试品进行纯化,高效液相色谱法测定,使用COSMOSIL C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min~(-1),柱温为25℃,检测波长为232 nm。采用SIMCA软件对结果进行处理,运用主成分分析法分析影响产品差异的关键因素。结果:乌头碱、次乌头碱、新乌头碱与苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱分别在各自范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率(RSD)分别为101.8%(1.6%)、100.6%(1.4%)、97.8%(1.1%)、100.8%(1.5%)、101.0%(1.6%)、100.7%(0.8%)。17批次样品测定结果显示不同批次之间6种生物碱含量存在较大差异;单酯型生物碱的含量是影响产品之间差异的关键因素。结论:所建立的方法准确可靠、灵敏度高,可用于三七伤药片中生物碱类成分的含量测定,为三七伤药片质量控制方法的建立提供依据。

HPLC同时测定复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱含量

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱含量的方法。方法色谱柱为Agilent XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）；流动相A为乙腈-四氢呋喃（25∶8）,B为0.1 mol/L醋酸铵溶液（每1000 mL加冰醋酸0.5 mL）,梯度洗脱；流速：1 mL/min；检测波长：235 nm；柱温：25℃。结果乌头碱在0.072～0.648μg具有良好的线性关系（r＝0.9995）,平均回收率为99.29%,RSD＝1.25%；新乌头碱在0.062～0.648μg具有良好的线性关系（r＝0.9995）,平均回收率为99.12%,RSD＝0.85%；次乌头碱在0.064～0.384μg具有良好的线性关系（r＝0.9998）,平均回收率为99.57%,RSD＝1.07%；苯甲酰乌头原碱在0.056～0.672μg具有良好的线性关系（r＝0.9992）,平均回收率为98.11%,RSD＝0.61%；苯甲酰新乌头原碱在0.055～0.993μg具有良好的线性关系（r＝0.9999）,平均回收率为99.27%,RSD＝1.10%；苯甲酰次乌头原碱在0.078～0.702μg具有良好的线性关系（r＝0.9998）,平均回收率为99.08%,RSD＝1.38%。结论本方法操作简便、灵敏度高、重复性好,结果准确,可作为复方藤乌软膏中乌头类生物碱的含量测定方法。

RP-HPLC法测定五生饮中3种单酯型乌头类生物碱的含量

目的建立五生饮中3种单酯型乌头类生物碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)的含量测定方法。方法采用YMC-Pack ODS-AMC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温:35℃,以乙腈-四氢呋喃(25:15)为流动相A,0.1 mol·L^(-1)醋酸铵溶液(每1000 m L加冰醋酸0.5 mL)为流动相B,梯度洗脱,流速:1.0 m L·min^(-1),检测波长:235 nm,进样量:10μL。结果苯甲酰新乌头原碱在146.96~1469.60 ng范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为99.05%(RSD为1.87%);苯甲酰乌头原碱在16.78~167.80 ng范围内线性关系良好,r=0.9998,平均回收率为99.42%(RSD为1.94%);苯甲酰次乌头原碱在20.30~203.00ng范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为100.15%(RSD为1.53%)。结论本研究所建立的方法操作简单,稳定性好,准确度高,重复性好,为五生饮水煎剂的质量控制提供参考。

不同配伍对芍药甘草附子汤中苯甲酰类乌头碱含量变化的影响

目的探讨芍药甘草附子汤不同配伍对苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱3种成分含量变化的影响。方法采用HPLC法对不同配伍样品煎液中的3种苯甲酰乌头碱进行含量测定,并分析比较不同煎煮时间不同配伍对其含量变化的影响。色谱条件:BDS Hydedsil C_(18)(250mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈∶四氢呋喃(25∶15)-0.1 mol·L^(-1)醋酸铵溶液梯度洗脱,检测波长235 nm,柱温35℃,流速1.0 mL·min^(-1)。结果芍药甘草附子汤中各配伍与单味附子相比,苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的含量均升高。结论附子与甘草、白芍配伍后能有效地起到减毒增效的作用,体现了中医药配伍用药的合理性和科学性。

柱切换液相色谱法快速定量检测参附注射液中乌头碱类生物碱和人参皂苷

利用柱切换液相色谱,建立了参附注射液中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱6种乌头碱类生物碱,以及Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd 9种人参皂苷的分析方法。首先利用强阳离子交换的在线固相小柱选择性富集和净化样品中生物碱类成分,优化了色谱条件;并采用EC-C_(18)柱作为人参皂苷的分析柱,通过优化实验条件,结合柱切换方式,去除了样品中辅料等大极性基质成分对色谱柱的污染,实现了生物碱分析和人参皂苷分析的自动切换。结果显示,样品中的生物碱和人参皂苷分离良好,线性相关系数(r^(2))均大于0.999,连续进样精密度的相对标准偏差(RSD)<2.0%,重复性的RSD<2.0%;其中6种生物碱的平均回收率为95.1%~98.6%,检出限为4.0~8.2 ng/mL;9种人参皂苷的平均回收率为91.7%~104%。所构建的基于柱切换液相色谱技术的在线固相萃取方法能够有效去除样品中的基质干扰,快速完成参附注射液中3种单酯型生物碱和9种人参皂苷的快速定量,同时也可对3种双酯型生物碱进行限量检测,可应用于药物的质量评价。

高效液相色谱法同时测定雪上一枝蒿中6种乌头属生物碱含量

建立高效液相色谱法同时测定雪上一枝蒿中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱等6种乌头属生物碱的含量。采用Thermo Acclaim 120 C_(18)色谱柱,以乙腈:四氢呋喃(25:15)和0.1 mol·L^(-1)醋酸铵溶液(每1000 mL加冰醋酸0.5 mL)为流动相,进行梯度洗脱;流速1.0 mL·min^(-1);柱温30℃;检测波长235 nm。结果显示,6个成分分离度良好,平均回收率为93.26%~102.03%,RSD为0.23%~2.87%。该方法简便准确,重复性好,适用于雪上一枝蒿的质量控制与评价。

反相离子对色谱法测定附子中生物碱成分

目的测定附子中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、北乌碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰新乌头原碱等6种生物碱的含量。方法用反相离子对HPLC法,使用A ichromBond-1 C18柱(250 mm×4.6 mm ID);流动相:乙腈-5 mmol.L-1NaH2PO4溶液,磷酸调至pH 4.5(50∶50),内含7 mmol.L-1十二烷基硫酸钠(SDS);检测波长:235 nm;流速:1.0 mL.m in-1;柱温:35℃。结果以上6种生物碱可以完全分离,准确测定。结论该方法准确度高,可应用于附子中生物碱的含量测定。

透骨灵橡胶膏质量标准研究

目的:提升透骨灵橡胶膏的质量标准。方法:采用薄层色谱法对制剂中含乌头碱类成分的药材进行定性鉴别;运用气相色谱法对制剂中含挥发性成分的药材进行定量测定,色谱柱为PE Elite-WAX ETR毛细管柱(30 m×0.32 mm,0.25μm);检测器为氢火焰离子化检测器(FID);进样口温度230℃;检测器温度250℃;采用程序升温;载气流速1.0mL·min^(-1);分流比10∶1;进样量1μL。结果:苯甲酰乌头碱类的薄层色谱斑点清晰,分离度好,且阴性对照无干扰。樟脑、薄荷脑、异龙脑、龙脑的线性范围分别为3.305~105.765mg、5.621~179.878mg、2.048~65.537mg、3.399~108.763mg(R^(2)=1.0000,n=6);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%(n=6);平均加样回收率分别为93.5%,94.5%,94.0%,94.1%,RSD分别为2.2%,2.3%,2.3%,2.5%(n=6)。结论:本研究建立的方法专属性较强,适用于透骨灵橡胶膏的成分分析,可用于该制剂的质量控制。

反相高效液相色谱法同时测定骨刺消痛胶囊中3种单酯型生物碱的含量

目的建立RP-HPLC法同时测定骨刺消痛胶囊中3种单酯型生物碱含量。方法色谱柱为Inert Sustain C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相A为乙腈-四氢呋喃(25∶8),流动相B为0.1mol·L-1醋酸铵溶液(每1000 m L加冰醋酸0.5 m L),梯度洗脱;流速:1.0 m L·min-1;检测波长:234nm;柱温:30℃。结果苯甲酰新乌头原碱在进样量为0.0246~0.615μg与峰面积具有良好的线性关系(r=0.9997),低、中、高浓度平均加样回收率分别为96.8%、98.9%、97.8%,RSD分别为0.94%、0.88%、0.95%;苯甲酰乌头原碱在进样量为0.0987~2.4675μg与峰面积具有良好的线性关系(r=0.9999),低、中、高浓度平均加样回收率分别为100.1%、99.8%、100.3%,RSD分别为0.43%、0.25%、0.19%;苯甲酰次乌头原碱在进样量为0.0118~0.295μg与峰面积具有良好的线性关系(r=0.9998),低、中、高浓度平均加样回收率分别为97.7%、99.8%、98.1%,RSD分别为0.91%、1.2%、0.97%。结论本方法操作简便、灵敏度高、重复性好,结果准确,可作为骨刺消痛胶囊中单酯型生物碱的含量测定方法。