苗药川乌配伍地榆前后新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量研究

目的研究川乌-地榆冻干粉(1∶2)酒溶液、水溶液中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量变化。方法采用高效液相色谱法(HPLC)对川乌配伍地榆前后新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量进行测定。结果川乌-地榆冻干粉(1∶2)酒溶液3种双酯型生物碱的含量较单川乌冻干粉酒溶液下降了97.3%;川乌-地榆冻干粉(1∶2)水溶液3种双酯型生物碱的含量较单川乌冻干粉水溶液下降了96.7%。结论川乌-地榆冻干粉(1∶2)酒溶液、水溶液可降低川乌中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量,起到减毒的作用,为揭示制川乌减毒配伍机制提供指导。

附子中内源性组分新乌头碱的毒性作用

探究了附子中内源性组分新乌头碱的急性毒性,为附子的安全使用提供一定的科学依据。将50只SPF级SD大鼠(雌雄各半),按体重随机分成10组,每组5只,即1个雄性对照组、4个雄性给药组(1.00、2.15、4.64和10.0 mg·kg^(-1));1个雌性对照组、4个雌性给药组(0.464、1.00、2.15和4.64 mg·kg^(-1))。给药组一次性灌胃各剂量新乌头碱,对照组一次性灌胃等体积食用级玉米油。连续观察14 d,并对大鼠的脏器指数、病理组织切片以及氧化应激能力进行分析。结果表明,新乌头碱对雄性大鼠和雌性大鼠的经口LD 50分别为3.16和1.26 mg·kg^(-1)。病理组织学分析结果表明,一定剂量的新乌头碱会对大鼠肝脏造成一定的损伤。氧化应激能力指标结果显示,雌性1.00 mg·kg^(-1)组、雄性1.00 mg·kg^(-1)组和雄性2.15 mg·kg^(-1)组大鼠的肝脏iNOS指标与对照组相比显著升高(0.01<P<0.05或P<0.01),进一步证实了一定剂量的新乌头碱会对大鼠肝脏造成损伤。

乌头碱、新乌头碱、次乌头碱及其代谢物在中毒家兔体内的死后再分布研究

研究乌头碱、新乌头碱、次乌头碱及其代谢物(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、新乌头原碱和次乌头原碱)在中毒家兔体内的死后再分布规律,为乌头属中药中毒案件的检材选取提供依据。家兔18只,随机分成6组,采用灌胃方式建立乌头碱中毒家兔模型,2 h后气管夹闭处死,仰卧位置于25℃条件下保存,分别于死后0、4、8、12、24、48 h进行解剖取材,取心血、外周血、尿液、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏,采用高效液相色谱-串联质谱法检测各生物检材中不同物质的含量。结果表明:尿液中苯甲酰新乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱48 h的含量分别是0 h的2.39倍和2.51倍;心血和外周血中苯甲酰新乌头原碱含量呈上升趋势,且在外周血中含量远高于心血;各物质在脾脏、肝脏、肾脏中的含量明显高于心脏和肺脏,次乌头碱和苯甲酰次乌头原碱在三者的含量呈上升趋势,且在脾脏中最高,12 h后苯甲酰新乌头原碱在三者中均呈上升趋势。乌头碱、新乌头碱、次乌头碱及其代谢物在家兔体内存在死后再分布现象,尿液、脾脏、肝脏、肾脏可作为乌头属中药中毒的优选毒物分析检材。

不同附子炮制品中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的HPLC测定

目的:建立 RP-HPLC 方法,分离和测定15种附子炮制品中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的含量。方法:采用 HypersilBDS C_(18)色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),以甲醇-0.1%三乙胺(60:40)为流动相,流速1.0mL·min^(-1),检测波长240nm。结果:不同附子炮制品中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量差异悬殊。结论:本研究所建立的 HPLC 方法适用于双酯型生物碱的定量分析,结果准确可靠。

甘草与附子配伍对乌头碱、新乌头碱、次乌头碱大鼠药动学的影响

目的:建立HPLC-MS同时测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的方法,并用于研究大鼠口服3种含附子煎液后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的药动学变化。方法:3组大鼠分别灌胃附子煎液(A液)、甘草附子单煎合并液(B液)、甘草附子合煎液(C液),附子剂量均为1.5 g/kg,HPLC-MS法测定乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的血药浓度,用DAS 2.0数理统计软件分别计算其药动学参数。结果:甘草与附子配伍后,三种乌头碱的Cmax、AUC均降低,MRT、t1/2均延长,Tmax无明显变化。甘草附子合煎液相比于甘草附子单煎合并液,Cmax、AUC更低,MRT、t1/2更长。结论:甘草能够显著影响附子中三种乌头碱的药动学。

渗透促进剂对川乌总生物碱和新乌头碱透皮吸收的影响

目的研究各种促渗剂对乌头总碱和新乌头碱透皮吸收的影响。方法采用改良的Franz扩散池,以生理盐水为接收介质,以大鼠离体背部皮肤为透皮屏障,计算不同浓度单元促透剂和不同组合促透剂作用下乌头总碱和新乌头碱的累积渗透量Q及相关参数。结果不同促渗剂对乌头总碱和新乌头碱都有不同程度的促渗作用。结论1%月桂氮酮+10%丙二醇的促渗效果最好,为乌头总碱透皮吸收制剂处方的优化提供依据。

X-5大孔树脂纯化新乌头碱和乌头总碱

目的:对影响X-5树脂分离纯化乌头总生物碱和新乌头碱的各种因素进行系统的研究,使分离工艺达到最优化。方法:以川乌总碱和新乌头碱的含量为指标,考察X-5型大孔树脂分离纯化乌头总生物碱和新乌头碱的最佳吸附及洗脱条件。结果:X-5树脂纯化乌头总生物碱和新乌头碱的最佳工艺为上样液浓度含生药1g.mL-1,药液pH 12,吸附时间为6h,7BV pH8的95%乙醇洗脱效果好。X-5树脂可重复使用5次。经X-5树脂处理乌头总碱提取率可达80%以上,终产品总生物碱纯度可达30%以上。结论:该方法能明显提高新乌头碱和乌头总碱的纯度。

UPLC/Q Exactive MS检测家兔血浆中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱血药浓度的方法研究

目的：建立UPLC/Q Exactive MS快速检测家兔血浆中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的方法。方法：采用Ulti Mate 3000系列高效液相色谱仪和Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统检测。家兔血浆用2%甘油甲醇溶液沉淀蛋白后,以甲醇-水（0.2%甲酸,0.015%三乙胺）（80∶20）为流动相,DIONEX-C18色谱柱分离,通过高分辨质谱的全扫描/选择离子监测（Full MS/SIM）模式进行定性筛查和定量检测,以利血平为内标进行内标法定量。结果：乌头碱、次乌头碱、新乌头碱3种物质的线性关系良好,定量下限为0.02 ng/m L;血浆的萃取回收率及方法回收率高,分别在84.39%~89.14%、91.14%~99.12%范围内;3种成分的日内、日间精密度RSD均小于6.43%。结论：该方法适用于急性草乌中毒患者的血药浓度监控研究。

乌头碱与新乌头碱对巨噬细胞RAW 264.7的作用研究

目的:探索乌头碱、新乌头碱对巨噬细胞RAW264.7活性、分泌TNF-α和表达CD91、CD13的抑制作用。方法:加入不同浓度的乌头碱、新乌头碱与巨噬细胞RAW264.7共培养1 d后,采用MTT法检测巨噬细胞活性,采用ELISA方法检测培养液中TNF-α的含量。制作细胞爬片,与不同浓度的乌头碱、新乌头碱共培养,细胞爬片免疫组化染色,检测CD91和CD13的表达情况,采用图像分析系统对细胞爬片免疫组化染色图像进行分析,测量IOD值。结果:不同浓度的乌头碱、新乌头碱对巨噬细胞活性有不同程度的抑制作用,抑制巨噬细胞分泌TNF-α,浓度越大,抑制作用越强。乌头碱和新乌头碱均能抑制巨噬细胞表达CD91和CD13,其抑制作用随浓度变化而不同,20 mg/100 ml对巨噬细胞表达CD91和CD13的抑制作用最强。结论:乌头碱、新乌头碱均能抑制巨噬细胞RAW264.7的活性及分泌TNF-α,对巨噬细胞表达CD91和CD13有明显的抑制作用。

草乌提取物乌头碱和新乌头碱的透皮速率测定

目的:测定草乌提取物中乌头碱、新乌头碱的透皮速率。方法:用改良Franz扩散池法收集草乌提取物的透皮接受液,用高效液相色谱法测定其中乌头碱、新乌头碱的透皮速率。结果:在促透剂氮酮和丙二醇各为4%的条件下,浓度为600mg/ml的草乌提取物中乌头碱、新乌头碱24h的累积渗透量分别为165.819和487.747μg/cm2;透皮速率常数分别为18.391和78.805μg·cm-2·h-1。结论:草乌提取物中乌头碱、新乌头碱在氮酮和丙二醇的促透作用下能较好地透过大鼠皮肤,透皮吸收过程符合Higuchi方程。

应用AB-8大孔树脂纯化新乌头碱和乌头总碱

目的:对影响AB-8树脂分离纯化乌头总生物碱和新乌头碱的各种因素进行研究,优化分离工艺。方法:以川乌总碱和新乌头碱的含量为指标,考察AB-8型大孔树脂分离纯化乌头总生物碱和新乌头碱的最佳吸附及洗脱条件。结果:AB-8树脂纯化乌头总生物碱和新乌头碱的最佳工艺为上样液浓度1g生药/mL,药液pH10,吸附时间为6h,7倍体积95%乙醇洗脱效果好。AB-8树脂可重复使用5次。经AB-8树脂处理后乌头总碱提取率可达80%以上,终产品总生物碱纯度可达30%以上。结论:AB-8树脂可用于川乌总碱的工业化生产。

HPLC法测定癌痛巴布剂中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱

目的建立癌痛巴布剂(草乌、生天南星、赤芍、乳香、生姜,等)中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的定量测定方法。方法色谱柱Elipse CDB-C18(4.6mm×150mm,5μm)键合硅胶柱;流动相乙腈-0.2%冰乙酸(加三乙胺调节pH值为6.25)(29∶71);体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长235 nm。采用HPLC法测定癌痛巴布剂中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱。结果乌头碱、次乌头碱、新乌头碱分别在进样量53.6～321.6 ng、145.2～871.2 ng、326.4～1 598.4 ng范围内线性关系良好,r均为1,在8 h内稳定性良好。平均加样回收率分别为99.26%(RSD为1.83%)、99.71%(RSD为1.52%)、97.82%(RSD为1.15%)(n=6)。结论该方法准确、简便、快速,可以用于定量测定癌痛巴布剂中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱。

RP-HPLC法测定白附片中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱

目的:测定白附片中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱3种脂溶性生物碱含量。方法:用反相离子对HPLC法,使用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱(5μm,250 mm×4.6 mm);流动相:乙腈-5 mmol·L-1NaH2PO4溶液,磷酸调至pH4.5(52∶50),内含7 mmol·L-1十二烷基磺酸钠(SDS);检测波长:235 nm;流速:1.0 mL·min-1;结果:以上3种生物碱可以完全分离,准确测定。结论:该方法准确度高,可应用于白附片中生物碱的含量测定。

HPLC法测定舒痹宁颗粒中次乌头碱、新乌头碱的含量

目的建立舒痹宁颗粒中次乌头碱及新乌头碱的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法,色谱条件:色谱柱:AkasilC18(4.6mm×250mm,5μm);以甲醇-0.1%三乙胺(70∶30)为流动相,流速1.0mL·min-1;检测波长:230nm。柱温:30℃。结果该法可用于测定舒痹宁颗粒中次乌头碱、新乌头碱的含量。乌头碱、次乌头碱、新乌头碱在0.22～4.4μg、0.126～2.520μg、0.152～3.04μg范围内成良好线性关系,平均回收率次乌头碱为101.12%;新乌头碱为99.68%。结论该测定方法简便可行、重复性好,可用于本制剂中有效成分次乌头碱、新乌头碱的含量测定。

新乌头碱对K562细胞及耐柔红霉素的K562细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的观察温阳药新乌头碱对白血病细胞K562和K562耐柔红霉素细胞株(K562/DNR)的抑制作用及可能的分子机制。方法应用MTT法,结合流式细胞术检测不同浓度新乌头碱对K562和K562/DNR增殖和凋亡的影响。通过Real-time PCR检测不同浓度新乌头碱作用72h对K562和K562/DNR细胞C/EBPα、Caspase-3、p53凋亡相关基因表达的影响。结果 K562和K562/DNR细胞的增殖抑制率随着新乌头碱浓度增加及作用时间延长而上升,呈浓度、时间依赖性(均P<0.05)。新乌头碱能引起K562和K562/DNR细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率也逐渐升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Real-time PCR结果显示,经50μmol/L新乌头碱作用72h,K562和K562/DNR细胞的C/EBPα表达下调,Caspase-3、p53表达上调,与正常对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论新乌头碱能够引起K562和K562/DNR细胞发生凋亡,并且凋亡机制可能与下调C/EBPa基因及上调Caspase-3、p53基因有关。

蒙药那如-3巴布剂中新乌头碱的透皮速率测定

蒙药那如-3,亦称那如三味丸,现代药理研究证实有抗炎、镇痛、抗菌作用,成分为制草乌、诃子、荜茇.蒙医理论认为该药具有消"粘"、除"协日乌素"、祛风、散寒、止痛等功效,主治风湿、类风湿关节炎,是内蒙古地区治疗风湿性关节病的常用药物.

反相高效液相色谱法同时测定乌头不同部位中新乌头碱和乌头碱含量

目的建立RP-HPLC同时测定中药乌头不同部位中新乌头碱和乌头碱的含量。方法采用Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以40 mmol乙酸铵缓冲液-乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长230 nm,柱温30℃。结果新乌头碱、乌头碱分别在2.61～15.66μg、0.26～1.56μg呈良好的线性关系,加样回收率分别为100.4%(RSD=1.2%),98.9%(RSD=0.71%)。结论该方法简便、准确,分离效果好,可用于附子中酯型生物碱的定量分析。

RP-HPLC同时测定附子地上部分中新乌头碱和次乌头碱的含量

目的建立RP-HPLC法,测定附子地上部分中新乌头碱和次乌头碱的含量。方法采用Venusil ABS C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈-0.1%乙二胺溶液为流动相,梯度洗脱,柱温30℃,流速1 ml.min-1,检测波长230 nm。结果新乌头碱、次乌头碱均得到较好分离,分别在12.5~1 200 mg·L-1、11.46~1 100 mg·L-1呈良好的线性关系;加样回收率分别为99.72%（RSD=0.69%）,100.29%（RSD=1.07%）。结论该方法简便、灵敏、准确,可用于附子中双酯型生物碱的定量分析。

HPLC同时测定参附汤中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱含量的研究

[目的]建立参附汤中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量测定方法。[方法]采用Hypersil BDS C18（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱,柱温25℃,流动相为甲醇、0.1%三乙胺,梯度洗脱,流速：1.0mL.min-1,检测波长237nm。[结果]新乌头碱在0.005~0.5mg.mL-1范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率98.49%,相对标准偏差（RSD）为2.31%;乌头碱在0.005~0.5mg.mL-1范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率99.88%,RSD为1.57%;次乌头碱在0.005~0.5mg.mL-1范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率99.67%,RSD为1.75%。[结论]该方法学考察符合定量要求,结果准确,可用于同时测定参附汤中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量,为参附汤的质量控制提供依据。