新分离的脂肪来源基质细胞与培养的脂肪干细胞用于肝纤维化治疗的效能比较

目的:比较新分离的脂肪来源基质细胞(f ASC)与脂肪干细胞(ASC)在抗大鼠肝纤维化方面的治疗潜能。方法:利用胶原酶解法获得新鲜分离的f ASC,体外扩增培养获得不同代数的ASC,用流式细胞仪分析不同代数细胞的表型;建立大鼠肝纤维化模型,并将f ASC或ASC用于干细胞移植治疗,通过血液肝功能指标检测、RT-PCR、H&E染色和天狼星红染色评价2类细胞的治疗效果。结果:f ASC和ASC均可显著改善肝纤维化的大鼠肝脏功能,二者用于治疗肝脏疾病的疗效相似。结论:在肝脏疾病的脂肪干细胞移植治疗中,应当综合考虑移植的干细胞体外传代次数和治疗效果间的关系。

人体脂肪基质细胞分离培养及其成骨潜能

目的 :分离人体脂肪基质细胞并诱导培养其成骨表型。方法 :将脂肪抽吸术获取的人体脂肪进行机械分割 ,通过Ⅰ型胶原酶消化后得到脂肪基质细胞 ,在BGJb 培养基中原代培养 10d ,消化传代后用含体积分数 10 %FBS及 10 - 8mol/L地塞米松 ,50mg/L左旋抗坏血酸 ,10nmol/L维生素D3 ,10mmol/Lβ 磷酸甘油钠的DMEM /F12培养基中诱导培养 14d ,观察细胞形态 ,绘制细胞生长曲线并对其成骨表型进行鉴定。结果 :脂肪基质细胞呈成纤维细胞样贴壁生长 ,其中的成体干细胞经诱导培养后体积明显增大 ,胞核大面圆 ,胞浆丰富 ,群体倍增时间为 66h。Gomori萘酚磷酸酯法染色显示其胞浆内富含碱性磷酸酶颗粒 ,vonKossa染色表明聚集的细胞团能形成矿化结节。结论 :脂肪基质细胞中的成体干细胞经过矿化诱导培养后可向成骨细胞分化 。

脂肪组织来源的基质细胞向神经元样细胞分化

目的 研究脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化的可能性 ,为神经移植探索新的细胞来源。方法 采用β-巯基乙醇诱导脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化 ,以免疫细胞化学方法对分化的和未分化的细胞进行鉴定。结果 从成年大鼠的脂肪组织中分离出基质细胞 ,在体外生长形态类似成纤维细胞 ,可以维持在未分化状态稳定增殖 ,体外扩增可超过 10多代。β-巯基乙醇可诱导这种细胞向神经元样细胞分化 ,分化的细胞早期表达巢蛋白 ,后期则表达神经元的标志物——神经元特异性烯醇化酶和神经微丝 ,在最适合的诱导条件下约 60 %～85 %的细胞表达这两种神经元的标志物。

人脂肪组织来源的基质细胞分化为神经元样细胞的体外研究

目的探讨人脂肪组织来源的基质细胞(adiposetissue-derivedstromalcells,ADSCs)向神经元样细胞分化的可能性,为神经移植探索新的细胞来源。方法采用胶原酶消化法分离培养成人的ADSCs,含血清的培养基进行培养,胰蛋白酶消化传代,采用第3～9代的ADSCs进行诱导。应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松,诱导其向神经元样细胞和脂肪细胞分化,采用苏丹黑B和免疫细胞化学方法对ADSCs进行鉴定。结果成功培养出ADSCs来源的基质细胞,细胞在体外生长形态类似成纤维细胞,可维持在未分化状态并稳定增殖,体外扩增可达20代。细胞表达波形蛋白和巢蛋白,大部分细胞还表达平滑肌肌动蛋白和β管蛋白;应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松,可诱导ADSCs向神经元样细胞和脂肪细胞分化,其中0.1%～0.2%的细胞分化为神经元样细胞,40%～50%分化为脂肪细胞。分化的神经元样细胞具有典型的神经元形态,并能表达神经元标志物;部分分化的神经元样细胞仍然表达平滑肌肌动蛋白。结论脂肪组织中存在能分化为神经元样细胞的基质细胞,并能克服间充质细胞的限制,分化为神经元样细胞,但这种细胞是否为有功能的神经元,还需深入研究。

家兔脂肪基质干细胞的分离培养及多向分化诱导

背景:脂肪基质干细胞在人体皮下脂肪中储备充足,体外能快速增殖,具有多向分化潜能,是目前组织工程种子细胞的研究热点。目的:体外分离培养家兔脂肪血管基质部分细胞,并验证其具有多分化潜能。方法:体外分离家兔脂肪血管基质部分细胞,在标准条件下培养,流式细胞仪检测第3代血管基质部分细胞表面标记物CD44,CD29,CD45,取第3代血管基质部分细胞进行成脂、成骨、成软骨诱导,油红O染色鉴定成脂诱导,碱性磷酸酶染色、茜素红染色、Vonkossa染色鉴定成骨诱导,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和Ⅱ型胶原mRNART-PCR检测鉴定成软骨诱导。结果与结论:原代血管基质部分细胞为短梭形和多角形,第3代血管基质部分细胞为长梭形,流式细胞仪检测提示CD44+,CD29+,CD45-,成脂诱导组,染色油红O阳性,成骨诱导组,碱性磷酸酶染色、Vonkossa染色、茜素红染色阳性,成软骨诱导组,诱导14dⅡ型胶原免疫组织化学染色阿利新蓝染色阳性,RT-PCR检测Ⅱ型胶原mRNA显示产物条带较未诱导前信号明显增强。提示体外分离培养的家兔血管基质部分细胞具有干细胞表型,具有向成骨、软骨、脂肪细胞分化的能力,初步鉴定为脂肪基质干细胞。

基质血管成分与体外扩增的脂肪来源干细胞促进移植脂肪成活的对比研究

目的:比较血管基质成分(st romal vascul ar fract i on,SVF)与体外扩增的脂肪来源干细胞(adi pose-deri ved st emcel l s,ASCs)对移植脂肪成活的促进作用。方法:用手术方法切取家兔腹股沟脂肪,进行ASCs体外分离培养;取第3代ASCs分别进行成脂、成骨诱导实验,CD29和CD31流式鉴定;制备SVF,进行CD29和CD31流式鉴定;脂肪移植裸鼠实验分为3组:SVF、ASCs、和空白对照组(DMEM/F12),每组4只裸鼠,沿背部脊柱两侧对称部位4个移植位点,每组共16个注射移植位点,每点0.3ml脂肪颗粒(adi pose granul e,AG)+0.2ml细胞成分;术后4m时取材称重、固定行HE染色观察移植脂肪组织结构,行CD31免疫组化染色观察新生血管及其密度。结果:家兔ASCs体外分离培养成功,为贴壁生长,第3代细胞形态均呈长梭形。成脂诱导实验油红O染色显示形成脂滴,成骨诱导实验茜素红染色显示形成钙化结节。流式鉴定显示SVF:CD29:17.0%,CD31:1.3%;ASCs:CD29:96.2%,CD31:3.8%。SVF、ASCs和空白对照组各组移植脂肪成活量分别为0.2096±0.0024g,0.1798±0.0033g,0.1350±0.0020g,两两比较差异均有统计学意义,P<0.05。HE染色显示SVF组移植脂肪成活较好,组织结构完整,脂滴大小均一,可见脂肪组织中间有丰富的血管存在;ASCs组移植脂肪成活尚可,组织结构尚完整,脂滴大小一般均一,可见脂肪组织中有结缔组织纤维间隔和新生血管形成;空白对照组结缔组织纤维间隔明显增多,脂滴大小不一,有少量较大空泡形成。各组移植脂肪新生血管密度分别32.6±2.1条/mm2,29.3±1.6条/mm2,23.3±1.9条/mm2,两两比较均有统计学意义,P<0.05。结论:新鲜的干细胞成分SVF比体外扩增的ASCs能更好的促进移植脂肪成活。

人脂肪组织来源基质干细胞成脂分化及Ad-EGFP体外转染研究

目的探讨重组腺相关病毒载体能否有效地转染脂肪组织来源基质干细胞及(ADSC)其影响,同时为组织工程寻找一种理想的病毒载体及细胞示踪标记方法。方法采用抽脂法分离培养ADSC,诱导培养液诱导细胞成脂分化,行细胞形态学检查,细胞表面抗原鉴定,油红O染色,评价细胞成脂情况。在此基础上转染Ad-EGFP,观察细胞形态学改变及荧光表达的时间与强度,计算转染效率,确定转染的理想感染复数(MOI)值,同时通过活力和增殖实验进行Ad-EGFP体外转染对ADSC的影响研究。结果细胞扩增迅速,形态良好,经诱导后呈现明显的成脂改变。实验确定Ad转染细胞的较佳MOI值为50,以此值转染Ad-EGFP后细胞荧光持续高效稳定表达,并可传至子代,可以满足示踪标记的需要。Ad转染效率高,对细胞活性影响小。结论ADSC的培养和分化能满足脂肪组织工程的要求;Ad长期稳定表达目的基因,是一种理想的组织工程病毒载体;基因转染方法高效稳定表达EGFP,可作为种子细胞良好的示踪标记方法。

脂肪来源基质细胞的扩增及多分化潜能研究

目的建立人脂肪来源的基质细胞（ADSCs）的分离和扩增方法,探讨ADSCs的多向分化潜能。方法采用胶原酶消化法分离扩增人ADSCs,测定其生长的经时变化、累积生长倍数等;应用不同因子诱导ADSCs向脂肪细胞及神经元样细胞分化并进行鉴定。结果每100ml脂肪抽吸物中可分离得到2×10^7-4×10^7个有核细胞,60d内扩增至P8;油红O染色、免疫细胞化学染色及RT-PCR证实ADSCs经诱导可分化为脂肪细胞及神经元样细胞。结论建立了ADSCs的扩增培养方法,扩增培养的ADSCs具有旺盛的增殖能力,并且具有向脂肪细胞及神经元样细胞分化的潜能。有望作为一种成体多能干细胞应用于组织工程及细胞治疗。

脂肪组织来源的基质细胞向神经细胞分化及其在脑缺血疾病治疗中的应用进展

近年来，细胞移植治疗脑缺血疾病已成为研究热点，多种细胞已被用于基础研究及临床治疗中。目前常用的种子细胞是骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs），它在一定的条件下可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌母细胞和神经细胞。但骨髓穿刺具有创伤性，有一定的痛苦，且只能得到少量的细胞（大约1MSC／10s基质干细胞），需经体外大量扩增才能满足临床需要，是一个费时、昂贵、并有细胞污染和丢失风险的过程，因此。广泛、大量使用颇为受限。

人脂肪来源干细胞与膀胱脱细胞基质-丝素蛋白双层支架的生物相容性研究

目的观察人脂肪来源干细胞(Human adipose derived stem cells,h ASCs)在膀胱黏膜下脱细胞基质-丝素蛋白(Bladder acellular matrix graft-silk fibroin,BAMG-SF)双层支架材料中的生长情况,分析其生物相容性。方法取h ASCs,置于BAMG-SF浸提液中培养,CCK-8法检测其细胞活力,评价BAMG-SF支架的细胞毒性并绘制生长曲线。扫描电镜观察BAMG-SF双层支架材料的表面形貌。将h ASCs传代扩增后接种到BAMG-SF双层支架材料上,体外培养1周后,转至裸鼠皮下培养1周、2周,HE染色观察细胞在支架上的生长情况。HLA免疫荧光鉴定裸鼠皮下双层支架上细胞的种属来源。结果 h ASCs在BAMG-SF双层支架浸提液中可保持较高的增殖率,根据细胞相对增殖率与细胞毒性分级关系证实BAMG-SF双层支架浸提液无细胞毒性。由h ASCs在BAMG-SF浸提液和DMEM培养基中的生长曲线可知,BAMG-SF有利于h ASCs的生长。将h ASCs接种到BAMG-SF双层支架材料上,经过体外、内培养,h ASCs均能长入支架的空隙内,且体内培养比体外培养有更多的h ASCs细胞长入支架。HLA检测显示支架内细胞部分为h ASCs。结论新型BAMG-SF双层支架材料安全无毒,与h ASCs生物相容性好,可作为细胞载体应用于组织工程膀胱的研究。

基底膜基质胶携带人脂肪组织来源间充质干细胞移植改善心肌梗死大鼠心脏功能

目的:应用基底膜基质胶(matrigel)携带人脂肪组织来源间充质干细胞(ADMSCs)在大鼠的心肌梗死部位注射,观察其对细胞存活的影响及改善心梗模型大鼠心脏功能的能力。方法:分离、培养、扩增人ADM-SCs,左冠状动脉前降支结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型。将大鼠急性心肌梗死模型随机分为4组,对照组(PBS组)、matrigel组、PBS+ADMSCs组、matrigel+ADMSCs组,对移植4周后细胞的存活及心梗局部新生血管的密度进行测量,并利用心脏超声检测大鼠心脏功能。结果:与其它各组相比,matrigel+ADMSCs组的细胞4周存活细胞数量以及心肌梗死区域新生血管密度均显著提高,心脏超声结果也表明该组大鼠的心脏功能改善最为显著。结论:基底膜基质胶能够提高人脂肪组织来源间充质干细胞在大鼠心肌梗死部位的存活,有助于提高心肌梗死部位微血管生成并改善心肌梗死大鼠的心脏功能。

小鼠脂肪来源基质细胞向成骨细胞的分化

目的研究小鼠脂肪来源基质细胞的分离培养、鉴定及向成骨方向分化的潜能。方法取小鼠睾丸脂肪垫用胶原酶消化后获得血管基质层(SVFs),进行体外培养。取第4代细胞用流式细胞技术检测细胞表面分子CD29、CD44、Sca-1,用碱性磷酸酶染色及矿化结节染色法鉴定分化的成骨细胞。结果小鼠脂肪来源基质细胞高表达CD29、CD44,双阳性达84.9%,但Sca-1成阴性表达。经诱导的成骨细胞碱性磷酸酶染色胞质成黑色,矿化结节-茜素红与Von Kossa染色成红褐色与黑色。结论小鼠脂肪来源基质细胞为一种理想的成体干细胞,可用于基础实验研究,且能成功分化为成骨细胞。

温度护理干预在脂肪来源干细胞基质胶面部填充术中的应用

目的:探讨温度护理干预对脂肪来源干细胞基质胶面部填充术效果的影响。方法:选取2019年1月-2020年12月于西安交通大学第一附属医院接受脂肪来源干细胞基质胶(Stromal vascular fraction-gel,SVF-gel)注射面部脂肪填充术20例患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和干预组,各10例。对照组采用常规护理,干预组实施温度护理干预,比较两组护理效果。结果:两组体温比较,差异有统计学意义(F组间=371.431,P组间<0.001);T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)干预组体温均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);两组体温均有随时间变化的趋势(F时间=230.426,P时间<0.001);分组与时间有交互效应(F交互=55.439,P交互<0.001)。干预组寒战发生率为10.00%,对照组寒战发生率70.00%,干预组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。干预组热舒适度出PACU时评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。干预组患者护理满意率为100.00%明显高于对照组的50.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:温度护理干预可有效保持SVF-gel移植术中患者体温的恒定,提高患者舒适度和护理满意度,减少了低温和寒颤发生。促进了患者早日康复。

脂肪组织来源基质细胞的心肌样细胞分化

脂肪组织来源基质细胞具有多向分化潜能、易获得性、易于分离培养和较强的再生能力等突出优点,已成为一种新的组织工程干细胞来源。现就脂肪组织来源基质细胞生物学特性、影响分化因素、向心肌样细胞分化及治疗缺血性心脏疾病等方面进行综述。

人脂肪基质细胞体外分离与培养的实验研究

目的探讨人脂肪基质细胞体外分离与培养,为其将来应用于组织工程提供基础。方法通过外科手术获得腹部皮下的脂肪组织,进行体外分离培养脂肪基质细胞,并在相差显微镜下每日观察、记录人脂肪基质细胞的生长状况,并用CCK-8测定其生长生活。结果人脂肪基质细胞呈现梭形外观,增殖旺盛,体外容易扩增。结论我们建立了一种自人体脂肪组织分离、培养人脂肪基质细胞简便稳定的方法,为其应用于组织工程提供了基础。

脂肪来源的基质血管成分细胞辅助脂肪移植在面部年轻化中的应用

目的探讨脂肪来源的基质血管成分细胞(SVF)在面部年轻化中的应用效果。方法选取2015年4月至2016年11月期间来长春海峡医学美容医院改善面部年轻化的40例女性为研究对象,按照简单随机抽样法分为治疗组和对照组,每组20例,两组患者均接受常规治疗,治疗组接受SVF辅助脂肪移植治疗,对照组接受单纯脂肪移植,比较两组患者面部除皱及并发症情况,并采用专业的皮肤图像分析系统对患者治疗前后的皱纹,纹理进行监测,并对所有数据进行统计学分析。结果治疗前,治疗组的老化评分为(2.95±0.308)分,皱纹评分为(65.75±0.654)分,纹理评分为(52.48±0.356)分,斑点评分为(63.56±0.635)分;对照组老化评分为(2.95±0.224)分;皱纹评分为(64.63±0.864)分,纹理评分为(51.56±0.421)分,斑点评分为(35.44±0.345)分。治疗后,治疗组老化评分为(0.95±0.515)分,皱纹评分为(41.65±0.425)分,纹理评分为(30.46±0.451)分,斑点评分为(49.56±0.654)分;对照组老化评分为(2.05±0.510)分,皱纹评分为(48.73±0.542)分,纹理评分为(35.44±0.345)分,斑点评分为(56.35±0.541)分。治疗前后对照组的老化评分和斑点评分比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗前后对照组的皱纹评分、纹理评分比较差异均具有统计学意义(P<0.05);治疗后治疗组患者的老化评分、皱纹评分、纹理评分均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05),但治疗前后的斑点评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,治疗组面部老化评分低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组面部斑点评分、皱纹评分和纹理评分比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 SVF细胞辅助脂肪移植技术一定程度上可改善皮肤状态,尤其在皮肤斑点及皮肤毛孔的改善方面效果更好。

原代脂肪基质细胞增殖前后细胞表面标志变化的研究

目的研究抽吸术采集的脂肪颗粒经消化清洗贴壁生长的人脂肪基质细胞增殖前后的形态和表面抗原表达的变化。方法吸脂术获得脂肪组织,经胶原酶消化分离、接种培养皿,贴壁后采集的细胞和原代细胞增殖80％融合后采集的细胞,分别通过流式细胞仪检测CD105、CD166、Stro-1、CD29等表面标志的变化。结果CD29在原代细胞增殖前后无明显变化,保持极高的阳性率;Stro-1在原代细胞增殖前后无明显变化,保持较低的阳性率;CD105、CD166阳性率显著增加。结论脂肪基质细胞原代培养增殖前检测细胞表面标志可以更加准确地反映提取的脂肪基质细胞的原始情况,经过原代培养增殖后部分干细胞相关的抗原的比例发生了明显的变化。

脂肪组织中血管基质部分(SVF)的细胞成分及应用

目前．脂肪组织因其在能量调控、炎症反应和免疫应答方面的作用已被认为是一个内分泌器官。此外，它还是具有多向分化潜能的多功能细胞的来源之一，而这种多功能细胞就存在于脂肪组织的血管基质部分中。脂肪组织中的血管基质部分（SVF）是脂肪组织经胶原酶消化、过滤、离心除去成熟脂肪细胞后得到的。正因为SVF易于从脂肪组织中提取并含有丰富的、可塑性极强的脂肪组织来源的间充质干细胞（Adipose tissue—derived mesenchymal stem cells、ASC）。这使得揭示SVF的细胞成分（以下简称为SVFc）及阐明其相应的生物学功能显得意义深远。

脂肪来源干细胞基质胶联合重组人表皮细胞生长因子治疗深Ⅱ度烧伤患者的效果

目的:观察脂肪来源干细胞基质胶(SVF-gel)联合重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)治疗深Ⅱ度烧伤患者的效果。方法:选取78例深Ⅱ度烧伤患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组(39例,创面110个)和观察组(39例,创面106个)。对照组采用rhEGF治疗,观察组在对照组基础上联合SVF-gel治疗,比较两组治疗前后视觉模拟评分法(VAS)评分,治疗7、14 d后创面愈合率,创面完全愈合时间和不良反应发生率。结果:观察组治疗7、14 d后VAS评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗7、14 d后创面愈合率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组创面完全愈合时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组均未发生明显不良反应。结论:SVF-gel联合rhEGF治疗深Ⅱ度烧伤患者可减轻患者疼痛,提高创面愈合率,缩短创面完全愈合时间,效果优于单纯rhEGF治疗。

ADSCs粘附脂肪组织细胞外基质支架构建组织工程化脂肪的实验研究

目的探讨以成人脂肪来源干细胞(Adipose-derived Stem Cells,ADSCs)为种子细胞粘附于人脂肪组织细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)支架构建组织工程化脂肪的条件与方法。方法采用Body-jet水动力辅助吸脂系统自成人下腹部皮下脂肪丰厚区抽吸获取颗粒脂肪100 ml,酶消化法分离、培养、多向分化诱导鉴ADSCs。从吸脂获取的脂质部分分离提取人脂肪组织ECM成分,经过低温冻干、粉碎、灭菌等一系列处理,得到粉末状ECM产物,电镜扫描观察表面特征并将其与脂肪来源干细胞进行粘附实验,探讨其作为支架材料的可行性。收集ADSCs,以2×10~6/ml的细胞密度粘附于ECM支架复合后移植于裸鼠背部皮下,同鼠对侧背部皮下只移植等量ADSCs作为对照,每侧移植0.5 ml,共6只实验鼠。8周后取材,称量标本湿重,收集数据并用SPSS18.0软件进行统计学处理分析。结果从脂肪组织中分离得到ADSCs和ECM支架。ADSCs与ECM支架相容性良好,粘附率达(89.87±2.59)%,细胞在支架表面可充分伸展生长。体内移植8周后,实验侧和对照侧都能够形成脂肪组织,湿重比较P=0.038<0.05,实验侧较对照侧重,差别具有显著意义。经HE切片及油红O染色均证实实验侧形成成熟的脂肪组织,对照侧只能形成少量成熟的脂肪组织。结论 ADSCs粘附脂肪组织细胞外基质支架在体内能够成功构建成熟的脂肪组织,且8周后支架并无明显吸收,可作为一种较理想的构建组织工程化脂肪的方法。