表面展示H9N2亚型禽流感病毒HA2蛋白的新功能型乳酸菌的构建

为了构建HA2基因的新功能型重组乳酸菌,本试验通过PCR将来源于H9N2亚型禽流感病毒的血凝素基因HA2插入锚定表达载体p SIP409-pgsA’中,构建重组质粒pSIP409-pgsA’-HA2,并将其电转到植物乳杆菌NC8中,通过W estern-blot检测目的蛋白的表达情况。结果显示,成功构建了NC8-pSIP409-pgsA’-HA2,经Western-blot检测目的蛋白被成功表达,并且具有反应原性,目的条带大小与目的蛋白一致,为后期试验奠定了基础。

表面展示共表达HA-DCpep蛋白乳酸菌的构建

为了构建HA-DCpep融合基因重组乳酸菌并检测其表达产物的反应原性,本实验采用pGe-HA2质粒为模板,以PCR方法将HA基因DCpep融合,将得到的融合产物进行双酶切,与pSIP409-pgsA’XbaI和HindIII双酶切产物链接,得到质粒pSIP409-pgsA’-HA-DCpep,再经过电转使其到植物乳杆菌NC8中,经Western-blot检测目的蛋白表达情况.结果：构建的NC8-pSIP-409-pgsA’-HA2-DCpep重组蛋白表达成功,而且具有反应原性,为禽流感病毒口服疫苗的研制奠定基础.