新加肾元方调控RIPK1/RIPK3/MLKL通路对高糖诱导的糖尿病肾病肾小球足细胞损伤的影响

目的:探讨新加肾元方对高糖诱导的糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾小球足细胞损伤及RIPK1/RIPK3/MLKL通路的影响,并分析其可能的作用机制。方法:选取70只SD大鼠,随机取12只为正常对照组,另58只采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射STZ法建立糖尿病肾病大鼠模型成功48只,随机分为模型组,阳性对照组,新加肾元方低、高剂量组,各12只。阳性对照组厄贝沙坦水溶液0.017g/kg灌胃,新加肾元方低、高剂量组0.72g/kg、1.44g/kg灌胃,正常对照组、模型组等体积生理盐水灌胃。检测肾功能:尿素氮、血清肌酐、蛋白尿;HE染色观察肾组织病理形态;透射电镜观察肾小球足细胞超微结构变化;TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡情况;ELISA检测肾组织TNF-α、IL-6水平;WB检测肾组织RIPK1/RIPK3/MLKL通路相关蛋白表达;对新加肾元方中所含活性成分进行收集与筛选,并对“有效成分-靶点”拓扑分析所得度值较高的有效成分进行分子对接。结果:模型组大鼠蛋白尿、血清肌酐、尿素氮水平、凋亡指数、TNF-α、IL-6水平、RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白表达增加较正常对照组增加,WT-1蛋白表达较正常对照组下降(P<0.05);阳性对照组、新加肾元方低、高剂量组大鼠蛋白尿、血清肌酐、尿素氮水平、凋亡指数、TNF-α、IL-6水平、RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白表达较正常对照组下降,WT-1蛋白表达较正常对照组增加(P<0.05)。模型组大鼠肾小球基底膜变厚,系膜细胞增生,肾小管浊肿变性,肾间质纤维化;阳性对照组、新加肾元方低、高剂量组肾组织病理形态改变较模型组出现不同程度减轻。模型组大鼠足细胞足突融合或消失,基底膜增厚;阳性对照组、新加肾元方低、高剂量组大鼠肾组织超微结构病理形态改变较模型组出现不同程度改善。新加肾元方中人参主要活性成分22个,炙黄芪主要活性成分20个。分子对接结果显示与关键靶点对接较好的成分有人参中的Celabenzine、炙黄芪中的Mairin,与RIPK1、RIPK3、MLKL的结合能分别为-5.3、-6.42、-5.48和-5.39、-7.71、-5.41。结论:新加肾元方通过多成分、多靶点调控RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路,降低炎症因子TNF-α、IL-6水平,缓解炎症反应,改善糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞损伤。