新型丝氨酸蛋白酶SNC19(ST14)基因编码蛋白在大肠癌中的表达

目的 研究新型丝氨酸蛋白酶在 SNC19大肠癌中的表达分布与临床病理资料的相关性及其促分化功能的重要意义。方法 应用 RT- PCR方法进行 SNC19在 39对正常大肠黏膜和肿瘤组织的 RNA水平表达的检测。应用免疫组化法研究 5 3例大肠肿瘤组织中 SNC19蛋白的表达分布情况。结果 39例正常大肠黏膜及相应肿瘤组织中均有 SNC19m RNA表达。正常黏膜组的 SNC19m RNA表达水平要高于肿瘤组 ,差异有显著性。表达水平高低与各个临床指标无明显关系。SNC19蛋白主要分布在大肠黏膜表面上皮 ,而腺体上皮表达为阴性。高分化肠癌中SNC19蛋白表达阳性率为 74 .2 % ( 2 3/ 31) ,中分化肠癌中 SNC19蛋白表达阳性率为 5 7.1% ( 8/ 14 ) ,低分化肠癌中SNC19蛋白表达阳性率为 12 .5 % ( 1/ 8) ,差异有显著性 ( P<0 .0 1)。SNC19蛋白表达在肿瘤分期和淋巴结转移的差异无显著性。结论 SNC19蛋白在大肠癌中表达与促分化有关 。

新型口腔细菌丝氨酸蛋白酶抑制剂Tannerpin的制备与结晶

目的·采用生物化学和结构生物学的方法,制备和结晶高纯度的新型口腔细菌丝氨酸蛋白酶抑制剂Tannerpin。方法·通过氨基酸序列分析,在牙周疾病相关细菌中筛选得到新型丝氨酸蛋白酶抑制剂,并将其命名为Tannerpin;构建融合表达载体pSUMO3-Tannerpin,将其转入大肠埃希菌BL21(DE3)系统进行诱导表达;采用镍离子亲和层析、SUMO特异性蛋白酶2(SUMO-specific protease 2,SENP2)酶切和凝胶过滤层析组合的纯化方案对Tannerpin进行分离纯化,并经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行验证;而后,对该纯化蛋白的结晶条件进行筛选及优化,并对其作用底物进行筛选。结果·SDS-PAGE结果显示,SUMO3-Tannerpin融合蛋白在大肠埃希菌中成功表达。利用纯化方案去除该蛋白的融合标签后,获得了相对分子质量约为43000的Tannerpin。通过结晶条件的初筛和优化,最终在20℃、pH=6.0、沉淀剂为28%聚乙二醇3350和8%Tacsimate的条件下获得了分辨率为1.7Å的Tannerpin晶体。然而,未筛选到Tannerpin的作用底物。结论·成功制备了口腔细菌分泌的新型丝氨酸蛋白酶抑制剂Tannerpin及其晶体,或将为后续其结构分析及功能研究奠定基础。