一种新型冠状病毒核酸检测试剂在4个检测体系中的检出限分析

目的验证一种新型冠状病毒核酸检测试剂在4个不同检测体系中的检出限,以提升新型冠状病毒核酸检测质量。方法选择1个试剂配套体系和3个非配套体系,使用中国计量科学研究院新型冠状病毒全序列假病毒核糖核酸标准物质验证检出限性能,并对未通过验证的体系进行分析,以查找原因。结果该试剂在4个检测体系中检出限验证均通过,其中非配套体系1检出能力最强,其次为配套体系和非配套体系2。缩短细胞裂解、核酸释放与磁珠结合时间、减少核酸洗涤次数会影响试剂检出限。结论该试剂检出限性能可满足检测需求。相关部门应出台相应仪器的生产标准和校准标准;实验室应关注加样量、非配套体系的优化和仪器设备的维护、保养、校准。

5种新型冠状病毒核酸检测试剂应用于DXcellence^(TM)全自动核酸检测分析系统的性能评估

目的探讨5种新型冠状病毒核酸检测试剂与DXcellence^(TM)全自动核酸检测分析系统的适配性,为临床实验室选择新型冠状病毒核酸检测方法和仪器提供参考依据。方法参考《病原体核酸即时检测质量管理要求专家共识》对定性项目的性能验证要求,在DXcellence^(TM)全自动核酸检测分析系统上,搭配艾科诺公司(简称Accunome)的核酸提取纯化试剂盒,评价5种新型冠状病毒核酸检测试剂(杭州金迪安、武汉明德、江苏硕世、北京金豪和上海思路迪,简写为JDA、MD、SS、JH、SLD)的性能。结果5种新型冠状病毒核酸检测试剂均可配合Accunome公司的核酸提取纯化试剂盒,在DXcellence^(TM)全自动核酸检测分析系统上实现样本进、结果出的检测。5种试剂检测时间为:单个样本54~94 min,12个样本65~105 min。JDA、MD、JH试剂对新型冠状病毒开放阅读框1ab基因(ORF1ab基因)329~450 copies/mL的检出率均为100%,在核衣壳蛋白基因(N基因)260 copies/mL的检出率均为100%;SS试剂对ORF1ab基因256~350 copies/mL、N基因203 copies/mL的检出率为100%;SLD试剂对ORF1ab基因146~200 copies/mL、N基因116 copies/mL的检出率为100%。5种核酸检测试剂在稀释标准品浓度约1200 copies/mL进行精密度测试,其ORF1ab基因和N基因循环阈值(Ct)的变异系数(CV)分别为JDA 1.13%和1.97%,MD 0.96%和1.01%,JH 1.55%和1.29%,SS 1.01%和1.96%,SLD 1.12%和2.00%。5种试剂在DXcellence^(TM)系统上检测的10例阳性样本均为阳性,10例阴性样本均为阴性。结论5种新型冠状病毒核酸检测试剂配合Accunome公司的核酸提取纯化试剂与DXcellence^(TM)系统适配,检测时间短、结果准确。实验室可以根据需要选取合适的检测试剂用于DXcellence^(TM)全自动核酸检测分析系统。

6种新型冠状病毒核酸检测试剂的检测性能对比观察

目的比较6种新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疑似患者咽拭子标本中2019-nCoV的检出率及CT值,以评估不同核酸检测试剂的检测性能。方法采用6种2019-nCoV核酸检测试剂[试剂A(上海辉睿生物科技有限公司)、试剂B(上海捷诺生物科技有限公司)、试剂C(上海伯杰医疗科技公司)、试剂D(上海之江生物科技股份有限公司)、试剂E(圣湘生物科技股份有限公司)、试剂F(中山大学达安基因股份有限公司)]、实时荧光RT-PCR法检测47例COVID-19疑似患者咽拭子标本中的2019-nCoV核酸(ORF1ab、N基因),对其中CT值较小的5份咽拭子标本进行10倍、100倍的稀释后,再次检测2019-nCoV核酸的ORF1ab和N基因。结果试剂A、B、C、E、F对2019-nCoV ORF1ab、N基因阳性检出率及CT值比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。除了试剂D,试剂A、B、C、E、F均能同时检测出不同稀释浓度2019-nCoV核酸阳性咽拭子标本中ORF1ab和N基因。试剂A、B、C、E、F检测3种浓度2019-nCoV核酸的CT值比较,P均>0.05。结论6种2019-nCoV核酸检测试剂中,试剂A、B、C、E、F对COVID-19疑似患者咽拭子2019-nCoV核酸的检出率差异不大,稳定性均较好;试剂D需进一步优化。

上海地区9种新型冠状病毒核酸检测试剂盲样检测结果一致性分析

目的了解上海地区临床实验室新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测结果的一致性,为医疗机构检验结果互认提供参考。方法收集上海市临床检验中心组织的2022年SARS-CoV-2核酸检测室间质量评价活动中参评实验室4次盲样检测结果和阳性结果循环阈值(Ct)数据,并进行分析。结果249家参评实验室4次盲样检测9种检测试剂2个阴性盲样检测结果正确率和3个阳性盲样靶基因检出率均为100%。9种检测试剂3个阳性盲样ORF1ab基因和N基因Ct值x的差异范围分别为2.58~2.66和2.88~3.06;极差(R)范围分别为7.98~8.15和7.71~7.73。9种试剂中,有5种试剂组内ORF1ab基因和N基因Ct值变异系数(CV)均<5%。仅1种试剂检测结果组内和组间CV较大。结论上海地区临床实验室SARS-CoV-2核酸检测能力均能达到要求,但不同检测试剂Ct值差异较大,依据Ct值判读结果可能会产生假阴性或假阳性结果,应引起临床实验室和相关管理部门的重视。

一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒的性能验证

目的验证某公司的一种新型冠状病毒试剂盒的灵敏度、精密度、特异性、抗干扰和准确度五项性能指标,以期评估该试剂盒检测能力是否符合制造商的要求和临床试验的需要。方法选用广州邦德盛生物科技有限公司提供的性能验证参考品和广东省临床检验中心发放的新型冠状病毒室间质评样本作为实验对象,通过荧光PCR法对一种新型冠状病毒检测试剂盒的灵敏度、精密度、特异性、抗干扰和准确度进行性能评估。结果该试剂盒核衣壳蛋白(N)基因和开放阅读框架1ab(ORF1ab)基因最低检测限为250 copies/mL;精密度中浓度和低浓度参考品CV值均小于5%;16种与新型冠状病毒种属相近或引起症状相似的其他病原体以及人类基因组DNA不发生交叉反应;14种干扰物参考品CV值均小于5%;阴性、阳性符合率均为100%(20/20)。结论该新型冠状病毒试剂盒的灵敏度、精密度、特异性、抗干扰和准确度均为合格,说明该试剂盒有良好的性能指标,符合厂家声明,可以应用于临床新型冠状病毒核酸检测。

3种新型冠状病毒核酸检测试剂对120份样本检测结果的比较与分析

目的对市售的3种国产新型冠状病毒核酸检测试剂(实时荧光RT-PCR法)的检测结果进行比较和分析,以供检测机构参考。方法采用3种核酸检测试剂(实时荧光RT-PCR法)对120份新冠肺炎病人和密切接触者的咽拭子、尿液、唾液和粪便样本进行平行检测,运用SPSS20软件采用卡方检验对检测结果进行分析。结果120份样本中,3种试剂阳性率分别为42.50%(51/120)、39.17%(47/120)和41.67%(50/120),阳性检出率无统计学差异(χ2=0.298,P>0.05),对4种样本检测阳性检出率,差异无统计学意义(P>0.05)。3种试剂检测结果一致的有89份。检测结果一致性从高到低为:A试剂和C试剂>B试剂和C试剂>A试剂和B试剂。结论由于不同厂家试剂灵敏度和准确性不同导致检测结果和检测一致性存在差异,提示试剂厂家需进一步优化性能,提高检测灵敏度和准确性,同时各检测机构应采取多种质控方法以确保新冠病毒核酸检测准确性,以便更好地为疫情防控、病人救治提供科学依据。

不同新型冠状病毒核酸检测试剂性能比较分析

目的比较6种新型冠状病毒核酸检测试剂盒的性能,为相关实验室选择核酸检测试剂提供参考依据。方法选择6种国产新型冠状病毒核酸检测试剂盒,比较其基本情况,并用5例阳性患者的咽拭子标本,提取RNA倍比稀释后进行RT-qPCR检测,分析扩增结果,评估各试剂盒的差异。结果使用核酸检测试剂盒检测稀释后的RNA,扩增后可见IC基因、N基因及ORF1ab基因的Ct值及△Rn值有显著差异;在1∶16稀释倍数时F试剂未检测到ORF1ab基因,C试剂在1∶64时无法检出ORF1ab基因和N基因,A、B、D试剂在1∶256稀释倍数时未检测到ORF1ab基因和N基因,E试剂在各个稀释度均可扩增IC、ORF1ab、N及E 4个基因。结论新型冠状病毒核酸检测试剂对低病毒载量核酸的检测能力有较大差异,各实验室选用试剂时需要进行性能验证,根据检测目的和检测对象选择合适的试剂盒。

不同新型冠状病毒核酸检测试剂(荧光PCR法)的选择和临床应用

目的比较不同品牌新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测试剂的检测性能,对试剂盒的临床应用进行评价。方法利用新型冠状病毒肺炎确诊患者采集的咽拭子阳性标本提取的RNA模板,采用4种国产SARS-CoV-2核酸扩增试剂(A~D试剂)进行检测,根据检测结果进行性能比较及临床应用分析。结果4种不同品牌试剂检测ORF1ab/RdRp基因的循环阈值(Ct)差异有统计学意义;A试剂5个稀释度标本检测结果均为阳性,其余3种试剂1×、10×、100×稀释度检测结果阳性;4种试剂检测ORF1ab/RdRp基因的灵敏度不同,A试剂灵敏度高于C试剂,C试剂高于B试剂,D试剂未见阳性扩增曲线;A试剂批内重复检测结果最佳,其次是C试剂。以C试剂为主要检测试剂,A试剂作为复检备用试剂的检测方案基本能够满足临床需求。结论4种SARS-CoV-2核酸扩增检测试剂样本的检测能力有差异,尤其对于弱阳性标本的检测差异更为明显,部分试剂的准确性、灵敏度及重复性欠佳,亟需进一步优化,提高其性能,以便更好地适应临床筛查的需求,减少假阴性结果的出现。

4种国产新型冠状病毒核酸检测试剂第三方质控品检测结果分析

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)[1]是已知的可感染人类的第7种冠状病毒[2,3]。SARS-CoV-2属于β属冠状病毒,可引起人类致死性的呼吸系统疾病[4,5]。目前,新型冠状病毒肺炎患者(COVID-19)呼吸道分泌物病原学诊断临床实验室常采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)进行核酸检测,而核酸检测结果常受到核酸检测试剂盒质量、标本采集容器、标本取材、患者用药情况、病毒感染部位、病情发展、核糖核酸(RNA)提取方法等影响[6,7].

1种新型冠状病毒核酸检测试剂的性能验证

目的验证一种新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒的检测性能。方法依据CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》,使用2019-nCoV RNA液体性能验证参考品,依次对实时荧光RT-PCR试剂的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能力进行验证及评价。结果实时荧光RT-PCR试剂检测2019-nCoV RNA的符合率为100%,检出限为125 copies/mL。该试剂检测人冠状病毒HCoV-OC43、人冠状病毒HCoV-HKU1、人冠状病毒HCoV-229E、人冠状病毒HCoV-NL63、SARS冠状病毒、中东呼吸综合征(MERS)冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒、腺病毒、肠道病毒、肺炎支原体、EB病毒、人巨细胞病毒和结核分枝杆菌无交叉反应;2.0×10^3 copies/mL和2.0×105 copies/mL的精密度参考品N基因检测的批内变异系数(CV)为0.70%及1.36%,批间CV为1.17%及1.72%;ORF1ab基因的批内CV为0.48%及0.52%,批间CV为1.36%及2.39%;加入内源性干扰物血红蛋白及清蛋白、外源性干扰物利巴韦林及阿奇霉素对2019-nCoV RNA的检测结果无影响。结论该试剂检测2019-nCoV RNA的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能力均符合临床分子生物学扩增检验的要求,可为临床提供可靠依据。

2种国产新型冠状病毒核酸检测试剂检测结果的比较与分析

目的对不同的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测试剂的检测结果进行比较和分析,以供实验室参考。方法收集本院2月9日至2月11日期间共101例检测SARS-CoV-2核酸的临床样本,用两种国产试剂盒进行平行检测,根据检测结果比较试剂盒差异。结果 101例样本中试剂A阳性32例(阳性率31.68%),阴性56例(阴性率55.45%),试剂B阳性35例(阳性率34.65%),阴性53例(阴性率52.48%),两组对比,差异无统计学意义(c2=0.2169,P=0.8972)。试剂单通道结果统计发现两种试剂盒N检测位点检出率较ORF1a/b检测位点检出率高,其中试剂A两个通道的检出率分别为ORF1a/b:31.68%,N:44.55%;试剂B为ORF1a/b:35.64%,N:40.59%且14例确诊患者检测结果显示两种试剂盒对于N位点检出的Ct值非常接近。结论本研究中两种SARS-CoV-2核酸检测试剂的检出率无明显差异,两种试剂盒的N位点检出率都较ORF1a/b高,且两种试剂盒对于N基因检测结果相似。

不同核酸提取方法和新型冠状病毒核酸检测试剂室间质评结果分析

目的分析2种不同核酸提取方法和2种新型冠状病毒核酸检测试剂检测室间质评样本的结果,进行性能比较。方法收集2020年江苏省临床检验中心和国家卫生健康委临床检验中心发放的新型冠状病毒核酸检测室间质量评价样本共15份,用2种常用核酸提取方法(磁珠法、核酸释放剂法)、2个厂家实时荧光定量PCR核酸扩增检测试剂检测,进行质评物核酸提取和扩增,根据不同试剂组合检测结果比较相关试剂性能。结果根据国家卫生健康委员会临床检验中心和江苏省临床检验中心结果反馈,15份质评样本中,包括10份新型冠状病毒核酸阳性样本,5份阴性样本。核酸磁珠提取法+A厂家核酸检测试剂阳性质评样本ORF1ab和N基因检出率均为100.00%,双基因同时检出率均为100.00%,有效检出率为100.00%;核酸释放剂法+B厂家核酸检测试剂阳性质评样本ORF1ab检出率为70.00%,N基因检出率为90.00%,双基因同时检出率为70.00%,有效检出率为90.00%;核酸磁珠提取法+B厂家核酸检测试剂阳性质评样本ORF1ab和N基因检出率均为100.00%,双基因同时检出率均为100.00%,有效检出率为100.00%。3种试剂组合对阴性质评样本均为未检出,阴性结果符合率均为100%。结论不同核酸提取方法及核酸检测试剂对质评样本检测结果不同,核酸释放剂法的核酸提取性能有待提高。

2019新型冠状病毒核酸检测试剂盒的研发与应用

目的评价自主研发的针对2019新型冠状病毒的多重核酸检测试剂的性能指标及临床验证。方法通过测试本试剂盒的准确性、灵敏度、特异性、精密度等指标,评估研发试剂盒的性能指标;同时,在临床单位收集60例临床样本,统计本试剂盒对临床样本中2019新型冠状病毒的检出结果,并与诊疗指南推荐的确诊/排除方法的结果进行比较,评估试剂在临床检验中的适用性。结果新研制的试剂盒各性能指标均符合要求:阳性符合率和阴性符合率均为100%,对各阳性参考品和阴性参考品能够准确检出;灵敏度测试经过确认和验证过程确定本试剂盒的最低检测限浓度为350copies/ml;特异性测试显示对具有潜在交叉可能的病原体和具有潜在干扰作用的药物进行测试,检出结果均正常,未受到交叉病原体和干扰物质的影响,特异性良好;精密度测试结果符合要求,批内精密度和批间精密度均<5%;对60例临床样本进行检测,与参比方法相比,灵敏度为95%(19/20),特异性为100%(41/40),经分析和参比方法检出结果差异不显著(P> 0.05)。结论建立的2019新型冠状病毒核酸检测试剂盒达到国内临床诊断试剂所要求的主要性能指标,可以满足临床样本的检测,是一种快速、准确的检测方法,可应用于临床。

不同新型冠状病毒核酸检测试剂的临床性能评价

目的评价同一厂家新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测扩增时间长的试剂(试剂A)与扩增时间短的试剂(试剂B)的临床性能,分析试剂更换的可行性。方法用2019-nCoV阴性混合样本将商品化2019-nCoV RNA液体室内质控品(以ORF1ab浓度赋值17300 copies/mL)梯度稀释成1730、865、567.7、432.5、216.3、108.2 copies/mL 6个浓度,在连续3 d内每个浓度每天做7~8个复孔,共计23个复孔,进行磁珠法提取核酸和实时荧光RT-PCR扩增,以评价试剂A和B的分析灵敏度。用试剂A和B分别检测来自华中科技大学同济医学院附属协和医院2020年2月9日发热门诊的130例患者咽拭子样本核酸,进行临床检测性能评价,并将其中5例2019-nCoV强阳性核酸连续10倍梯度稀释作2种试剂的相对灵敏度评价。结果试剂A和B检测1730、865、567.7、432.5、216.3和108.2 copies/mL的质控品稀释液中ORF1ab基因的阳性率分别为100%和100%、95.65%和82.61%、95.65%和78.26%、91.30%和78.26%、65.22%和43.48%、34.78%和17.39%;试剂A和B的最低检测限分别为615.9(95%CI:446.0~1098.5)copies/mL和1249.1(95%CI:863.4~2378.8)copies/mL。5例2019-nCoV强阳性的临床样本核酸在1∶10和1∶100稀释时,试剂A和B对ORF1ab和N基因检出率均为100%;而1∶1000稀释时,对于ORF1ab和N基因,试剂A的检出率均为100%,试剂B的检出率分别为73.3%和80.0%。130例咽拭子样本中,试剂A 2019-nCoV RNA检测阳性率为43.85%,试剂B为33.08%,差异有统计学意义(P<0.05);2种试剂的检测结果一致性较好(kappa=0.7753),阳性符合率为75.44%(43/57),阴性符合率为100%(73/73),阳性预测值为100%(43/43),阴性预测值为83.91%(73/87),总符合率为89.23%(116/130)。结论2种2019-nCoV核酸检测试剂的临床性能之间存在差异。为保证2019-nCoV核酸的检测质量,不宜将该厂家扩增时间长的试剂更换为扩增时间短的试剂。

新型冠状病毒核酸检测试剂盒比对研究

目的对迈克生物股份有限公司的新型冠状病毒核酸试剂盒(荧光PCR法)进行临床验证,并用同类试剂盒进行比对研究。方法以迈克生物股份有限公司的研发生产的新型冠状病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)作为待考核试剂,以上海之江生物科技有限公司的同类产品作为比对试剂。分别对14例由疾控中心确诊的新型冠状病毒肺炎患者和2020年2月18日至2月24日211例普通入院患者的咽拭子标本进行新型冠状病毒(ORF1ab/N/E基因)检测,比较两种试剂检测检出率的一致性。结果迈克新型冠状病毒核酸检测试剂盒与之江新型冠状病毒核酸检测试剂盒的检测结果阳性率和阴性符合率均达99.5%以上,ORF1ab基因和N基因测定值相对偏差不超过±16%。结论迈克新型冠状病毒核酸检测试剂盒与已获批准上市的同类试剂检测结果一致性良好,可满足临床检测需求。

4种核酸提取方法对3种新型冠状病毒核酸检测试剂检测性能的比较与分析

目的采用不同核酸提取方法及扩增试剂对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测性能进行比较和分析。方法收集该院3例新型冠状病毒肺炎患者的鼻咽拭子标本,选取4种常用核酸提取方法(A^D),3种核酸扩增试剂(E^G)检测,进行RNA提取和扩增,根据各试剂检测结果比较其性能(其中试剂G不支持提取方法A和B)。结果提取方法A ORF 1ab检出率为0.00%,N基因检出率为0.00%,双基因同时检出率为0.00%,有效检出率为0.00%;提取方法B ORF 1ab检出率为0.00%,N基因检出率为33.33%,双基因同时检出率为0.00%,有效检出率为33.33%;提取方法C ORF 1ab检出率为33.33%,N基因检出率为55.56%,双基因同时检出率为0.00%,有效检出率为88.89%;提取方法D ORF 1ab检出率为66.67%,N基因检出率为66.67%,双基因同时检出率为44.44%,有效检出率为88.89%。试剂E ORF 1ab检出率为50.00%,N基因检出率为100.00%,双基因同时检出率为50.00%,有效检出率为100.00%;试剂F ORF 1ab检出率为0.00%,N基因检出率为66.67%,双基因同时检出率为0.00%,有效检出率为66.67%;试剂G ORF 1ab检出率为100.00%,N基因检出率为16.67%,双基因同时检出率为16.67%,有效检出率为100.00%。结论核酸提取方法从优到劣为D>C>B>A;N基因扩增检测能力试剂E最优秀,ORF 1ab基因扩增检测能力试剂G最优秀,试剂E和G检测能力可互补,均亟待进一步优化,提高检测性能。

一种国产新型冠状病毒核酸检测试剂盒的性能验证

目的评估一种国产新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测试剂盒是否满足临床SARS-CoV-2核酸检测要求。方法采用15例SARS-CoV-2核酸阳性和15例SARS-CoV-2核酸阴性的临床样本,1支SARS-CoV-2 RNA干粉标准品,5支阳性定值参考品和5支阴性定值参考品,对该试剂盒检测SARS-CoV-2阴性和阳性符合率、精密度、检出限和交叉反应进行验证。结果20例阴性和20例阳性样本的N基因和ORF1ab基因阴阳符合率均为100%。2例阳性样本ORF1ab基因重复性CV为0.41%~0.56%,优于N基因重复性,N基因和ORF1ab基因重复性、实验室总不精密度CV均<5%。检出限重复20次的检出率为100%,SARS-CoV-2与常见呼吸道病原体、与SARS-CoV-2同种属病毒(人副流感病毒1型、鼻病毒、MERS,SARS,甲型流感病毒、乙型流感病毒、冠状病毒HKU1,NL63,229E和OC43)之间不产生交叉反应。结论该试剂盒阴阳性符合率一致,重复性好。SARS-CoV-2与常见呼吸道病原体,与SARS-CoV-2同种属病毒不会产生交叉反应,适用于临床实验室和检测机构进行SARS-CoV-2核酸筛查。

两种新型冠状病毒核酸检测试剂盒的性能验证

目的验证两种新型冠状病毒核酸检测试剂盒的主要性能。方法用新型冠状病毒核酸性能验证参考品及广东省室间质控品检测两种新型冠状病毒核酸检测试剂盒的主要性能。结果试剂A、试剂B的检出限分别为1.25E+02、2.5E+02 copies/mL。试剂A在2.0E+03、2.0E+04 copies/mL的精密度参考品N基因检测的批内变异系数(CV)分别为0.37%、0.16%,ORF1ab基因检测的CV分别为0.61%、0.22%;试剂B在2.0E+03、2.0E+04 copies/mL的精密度参考品N基因检测的批内CV分别为1.23%、0.87%,ORF1ab基因检测的CV分别为1.48%、0.54%。两种试剂检测准确度均为100%、无交叉反应、抗干扰实验阳性。结论两种新型冠状病毒核酸检测试剂盒的灵敏度、精密度、准确度、特异性及抗干扰能力均符合产品要求。

基于变性泡介导的加速链交换扩增技术在新型冠状病毒核酸检测中的性能分析

运用变性泡介导的加速链交换扩增技术,建立一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测的新方法。收集潍坊市第二人民医院检验科1492例疑似SARS-CoV-2样本,以荧光定量PCR结果为参考,计算ASEA-SARS-CoV-2核酸检测试剂盒检测新型冠状病毒样本结果的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)。结果表明:ASEA可在30min内完成核酸扩增,检测限为1000拷贝·mL^(-1)。敏感性为96.7%,特异性为99.9%。该方法可在30min内检测SARS-CoV-2,而之前报道的传统qPCR方法需要数小时。建立了一种基于变性泡介导的加速链交换扩增技术检测新型冠状病毒的新方法。

新型冠状病毒核酸检测结果可比性及试剂选择策略探究

目的:通过分析13个SARS-CoV-2核酸检测体系临床阳性样本病毒载量与Ct值相关性及偏倚,探讨不同检测体系的结果可比性、检出限及试剂选择策略。方法:选择13个SARS-CoV-2核酸检测体系,以中国计量科学研究院标准物质倍比稀释作为标准曲线与已经过数字PCR方法赋值的临床阳性样本同时检测,采用SPSS22.0统计分析,Graph-PadPrism7.0及Medcale15.0软件绘图,统计分析临床阳性样本Ct值与病毒载量相关性、与赋值浓度的偏倚及13个检测体系的实际检出限。结果:13种检测体系中均显示病毒载量与Ct值之间相关性强,ORF1ab、N、E基因的线性回归系数分别为0.8400~0.9921、0.8674~0.9668、0.8717~0.9768;配套体系同种扩增试剂磁珠提取法优于核酸释放剂免提取法;非配套体系同种试剂不同检测体系线性回归相关系数存在较大差异。用标准曲线计算临床阳性样本ORF1ab、N、E基因结果存在差异;临床阳性样本中N基因的检出浓度高于ORF1ab的检出浓度;与数字PCR结果赋值存在较大偏倚,无法通过偏倚<7.5%,通过率≥80%的标准。利用标准曲线计算13种检测体系ORF1ab、N、E基因的检出限,与各试剂宣称的检出限之间存在差异,各体系的检测结果可比性差。结论:SARS-CoV-2核酸检测试剂检测基因的线性相关性配套体系优于非配套体系,实验室应尽可能选用配套检测体系,否则应摸索最优的检测体系。临床阳性样本的结果与赋值结果存在较大偏倚,各试剂检出限宣称值与真实值之间存在较大差异,试剂间可比性差。在暂无法实现SARS-CoV-2检测的标准化的情况下,建议实验室通过标准物质绘制标准曲线确定检测体系实际检出限的方式判断试剂真实检出限,指导初复检试剂的确定。