一例鸭新型呼肠孤病毒感染的病原分离鉴定与致病性研究

为了确诊山东济宁某养鸭场14日龄樱桃谷商品肉鸭死亡发病原因,本试验无菌采取病死鸭的肝脏、脾脏和脑等组织,采用病毒分离鉴定、细菌分离纯化并结合特异PCR鉴定等方法确诊病原。结果显示,从樱桃谷肉鸭脾脏组织中分离到1株鸭呼肠孤病毒(DRV),命名为JNDRV19株;JNDRV19株Sigma C(σC)基因核苷酸序列与其他9株参考毒株存在96%~99%同源,属于鸭新型呼肠孤病毒(NDRV);JNDRV19株可导致雏鸭减重,80%雏鸭出现典型剖检病变。本研究证实该批樱桃谷商品肉鸭的大量死亡是由NDRV感染与某种细菌混合感染导致,对樱桃谷肉鸭科学防控NDRV,保障肉鸭养殖业的健康发展具有一定的指导意义。

鸭甲肝病毒与新型呼肠孤病毒复合RT-PCR检测方法的建立

根据鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)的3D基因序列和新型鸭呼肠孤病毒(Novel Duck reovirus,NDRV)的S3基因序列,分别设计了1对特异性引物,通过条件优化建立了鉴别DHAV和NDRV的复合RT-PCR方法。该方法对DHAV和NDRV的最低检出量均为100 copies,而对番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)、鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)、鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)和鸭副粘病毒(Duck paramyxo virus,NDV)的检测结果均为阴性。临床样品的检测结果显示,该方法是一种快速鉴别诊断DHAV和NDRV感染的有效手段。

芪芩汤对新型呼肠孤病毒试验感染雏鸭治疗效果分析

为探讨芪芩汤对感染新型呼肠孤病毒(NDRV)雏鸭的临床治疗效果,本试验选取75只7日龄健康雏鸭随机分为5组,每组15只。试验分为芪芩汤高、中、低剂量、空白组、模型组。除空白组皮下注射生理盐水,其余4组雏鸭皮下注射NDRV人工染毒造模,同时芪芩汤高、中、低剂量组分别按照剂量为2 g/mL、1 g/mL、0.5 g/mL芪芩汤进行灌喂治疗,连续给药7 d;模型组和空白组不给予任何药物。在给药后第1、4、8天采集雏鸭血清测定IFN-α、IFN-β和IFN-γ含量,并比较各试验组雏鸭的存活率,观察雏鸭临床症状、剖检病变以及H.E.染色切片。结果显示,芪芩汤能有效减轻NDRV感染病鸭的临床症状及病理变化,显著提高感染雏鸭的存活率(P<0.05);与空白组相比,模型组雏鸭血清中IFN-α、IFN-γ含量极显著或显著(P<0.01或P<0.05)降低,IFN-β含量无显著性差异(P>0.05)。与模型组相比,芪芩汤高、中、低剂量组雏鸭血清中IFN-α、IFN-β、IFN-γ含量极显著或显著(P<0.01或P<0.05)升高。结果表明,芪芩汤对感染新型呼肠孤病毒雏鸭有一定的治疗作用,并能有效减轻新型呼肠孤病毒对雏鸭免疫器官的损伤,提高机体抗病毒的能力。

绿头野鸭新型呼肠孤病毒的分离鉴定

本研究从山东临沂地区发生肝脾出血的绿头野鸭中分离到一株病毒,经RT-PCR及序列测定分析,确定为新型鸭呼肠孤病毒(命名为SD12)。该病毒可在鸡胚、鸭胚中繁殖,并导致胚体水肿、出血、死亡,同时可适应鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF),细胞病变主要表现为多个细胞聚集成团,形成大的合胞体,然后细胞拉网并逐渐脱落。将该病毒分别以脑内接种、颈部皮下接种、口服三种方式接种3日龄健康雏鸭,结果颈部皮下方式雏鸭的发病率和死亡率最高,分别为30%和20%。

一株麻鸭新型呼肠孤病毒的分离鉴定

本研究从山东潍坊地区发生脾脏坏死的麻鸭中分离到一株病毒,经RT-PCR检测及测序分析,确定为新型鸭呼肠孤病毒(命名为WF22)。该病毒能在鸭胚中繁殖,并导致鸭胚死亡,表现为胚体水肿、出血。将该病毒通过腿部肌肉注射5日龄樱桃谷肉鸭,结果试验鸭出现精神沉郁、脾脏坏死、法氏囊损伤等典型症状,并能从试验鸭中重新分离到该病毒。基于σC基因的进化树分析发现,本研究分离到的麻鸭源新型鸭呼肠孤病毒与樱桃谷鸭、绿头鸭、鹅等来源的毒株无明显差异。

安徽地区新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及其σC基因序列分析

为掌握新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的最新流行特征,本研究收集安徽某地区鸭场出现肝组织肿胀、出血等临床症状的25份雏鸭肝脏及脾脏样品,利用RT-PCR方法检测NDRV。将RT-PCR检测为阳性的病料样品接种SPF鸡胚分离病毒,收获第3代尿囊液进行PCR检测及病毒纯净性鉴定;同时对NDRV分离株的全长σC基因进行克隆并测序,将测序所得的分离株σC基因序列与GenBank中登录的21株禽源呼肠孤病毒参考株的相应基因序列及推导氨基酸序列进行相似性比对分析,利用Mega 7.0软件构建分离株基于σC基因的系统进化树,并进行σC基因编码氨基酸序列的突变分析。将分离株接种Vero细胞观察其体外培养特性,感染雏鸭进行致病性试验。结果显示,25份病料样品中检出3份NDRV阳性样品,将阳性病料样品接种鸡胚3 d内,鸡胚全部死亡,并伴有水肿、严重充血等现象;病毒纯净性试验结果显示,病料样品仅NDRV呈阳性,其他病原如鸭甲型肝炎病毒(DHV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、H9亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)及禽腺病毒(FAdV)均为阴性。将3株分离株经测序分析,结果显示,其目的基因序列完全一致,为同一株病毒,并将其命名为NDRV AH株。对NDRV AH株σC基因进行序列相似性分析发现,NDRV AH株与其他NDRV参考株σC核苷酸序列的相似性为89.5%~99.0%,氨基酸序列的相似性为85.3%~98.9%。σC基因的遗传演化结果显示,NDRV AH株属于基因2型。σC氨基酸比对分析结果显示,与灭活疫苗TH11株(KC493571.1)相比,NDRV AH株aa67、aa93、aa100、aa132、aa151、aa158、aa212、aa253和aa298均发生了突变。将该分离株接种Vero细胞,可观察到细胞出现形态圆缩、细胞核聚集等细胞病变。致病性试验结果显示,感染雏鸭死亡率为40%,剖检发现雏鸭肾脏、肝脏出血,脾脏肿大,有轻微坏死灶或大面积坏死灶,有些脾脏质地较硬。可见大面积坏死灶。本研究揭示了NDRV在我国安徽地区的分子流行病学特征,为变异株疫苗研发奠定了基础,对NDRV感染的防治具有重要意义。

鹅源新型鸭呼肠孤病毒广西株G-NDRV-GX-2022全基因组分子特征的分析

为研究鹅源新型鸭呼肠孤病毒的全基因组分子特征及其广西流行株的进化特点,本研究采集广西地区3份发病鹅的肝脏、脾脏、肺脏及肾脏病料样品,采用多重荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测番鸭呼肠孤病毒(MDRV)和新型鸭呼肠孤病毒(NDRV),并以NDRV阳性样品的核酸为模板,采用RT-PCR分段扩增其全基因组并测序,采用BioEdit软件分析其全基因组序列的相似性;采用NetNGlyc 1.0软件预测NDRVσC蛋白N-糖基化位点;通过Mega 7.0软件绘制σ系列基因的系统发育树及RDP5和SimPlot软件分析NDRV全基因组的重组事件。RT-q PCR结果显示,检出1份NDRV阳性样品,经测序及序列拼接,获得一条鹅源NDRV广西流行株G-NDRV-GX-2022全基因组序列,全长23353 bp,分为L1~L3、M1~M3及S1~S4共10个基因;BlAST分析结果显示,G-NDRV-GX-2022株10个基因与GenBank中相应基因序列的相似性最高为91.2%~98.4%,对应的病毒株均源自中国广东、福建、山东、浙江及湖北等地的NDRV,宿主有野鸭、番鸭、绿头鸭等,表明G-NDRV-GX-2022株基因来源广泛且多样;σC蛋白N-糖基化位点预测结果显示,G-NDRV-GX-2022株与NDRV参考株均为^(121)NLTS^(124);σ系列基因遗传进化树显示,σB、σNS进化树中NDRV参考株均为连续不间断的进化分支,而σA、σC进化树中NDRV参考株为不连续间断的进化分支,且均未呈现流行时间与地域关联的进化特点,表现出生物遗传多样性的特征;全基因组重组分析结果显示,G-NDRV-GX-2022株的M3基因检测到重组信号,主要亲本为野鸭源NDRV SD-12株,二者相似性为95.4%,次要亲本为鹅呼肠孤病毒(GRV)GD2020株,二者相似性为94.3%,证实野鸟与水禽的呼肠孤病毒之间能够发生基因重组。本研究丰富了水禽呼肠孤病毒基因库信息,并为禽呼肠弧病毒分子遗传进化研究提供基础数据。

福建省新型鸭呼肠孤病毒生物学特性及基因序列分析

为了解福建省新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)生物学特性和遗传变异状况,从福建省番鸭主要饲养区采集了8份临床发病样品进行病原学检测、病原分离、攻毒试验及S1基因序列分析。结果显示:8份临床样品均为NDRV阳性,接种番鸭胚后均成功分离到病毒;将NDRV尿囊液毒感染番鸭后3~10 d发病,发病率为20%~40%,死亡率为0~20%,剖检可见肝脏有出血斑及大量白色坏死灶,脾脏肿大坏死,与参考毒株NDRV-NP03相比,部分分离毒株毒力有所下降。S1基因序列分析发现:NDRV分离毒株与省内毒株亲缘关系较近,与省外毒株亲缘关系相对较远;在系统进化树上,8株NDRV分离毒株聚为同一分支,而福建省外毒株聚为另一分支,说明NDRV呈区域性流行特征;σC蛋白氨基酸序列与NP03株相比,存在12个差异位点,可能会导致NDRV感染能力发生改变。

雏鸭母源抗体对新型鸭呼肠孤病毒保护效果研究

研究旨在采用新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)主动感染不同母源抗体组的商品雏鸭,对雏鸭泄殖腔排毒、体重、肝脏、脾脏组织病变和病理指标进行检测、观察,以期探究母源抗体对雏鸭早期感染新型鸭呼肠孤病毒的保护效果从而为该病的防控奠定基础。试验用58只商品雏鸭在相同环境条件下饲养,检测1日龄雏鸭NDRV母源抗体,根据母源抗体进行分组并于3日龄攻毒,攻毒后3、5、7 d采集泄殖腔棉拭子检测排毒情况,并在雏鸭2、8、10日龄进行称重。在攻毒后7 d处死鸭只并剖检,观察肝脏和脾脏病变,计算脾脏指数并制备部分肝脏和脾脏病理切片。结果表明,攻毒鸭泄殖腔均检测到排毒,高母源抗体组无法阻止排毒;攻毒鸭体重增重极显著低于对照组(P<0.01);攻毒鸭脾脏坏死,肝脏均有散在出血点伴有坏死灶;攻毒鸭脾脏指数极显著高于对照组(P<0.01);攻毒后不同母源抗体组雏鸭脾脏指数、体重差异不显著(P>0.05);肝脏、脾脏细胞均有不同程度病理受损。该试验说明高母源抗体无法给雏鸭提供对该NDRV分离株的有效保护,通过免疫种鸭来保护雏鸭免受感染的方法有待商榷。

实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测鸭新型呼肠孤病毒方法的建立及初步应用

研究旨在建立一种适用于鸭新型呼肠孤病毒检测的实时荧光定量TaqManRT-PCR技术。以鸭新型呼肠孤病毒(SDDZ株)RNA为模板,建立检测鸭新型呼肠孤病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。制备含有上述NDRV目的片段的RNA作为标准品,以10倍比稀释的标准品建立标准曲线,测定敏感性。同时采用标准品检测该方法的批内和批间重复性,并与本实验室所保存的多种病毒进行特异性检测。结果:建立的实时荧光定量TaqManRT-PCR方法能在鸭新型呼肠孤病毒(SDDZ株)RNA样本中检出荧光信号。最低检出量为1.77copies/μL;线性范围达10个数量级。该方法重复性良好,批内变异系数不足1.1%;批间变异系数不足1.7%。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,经体外感染细胞培养物以及临床样品检测证实,该方法可实时反映病毒液中的病毒含量,可在获得样品后3h以内得到检测结果,可用于临床样品中鸭新型呼肠孤病毒的快速检测。

新型鸭呼肠孤病毒弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律

【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)弱毒S株C30在雏番鸭血液中的病毒血症,口咽、泄殖腔的排毒规律及靶器官的带毒时间,了解弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律和致弱机理。【方法】设计特异性引物,建立检测NDRV核酸的RT-qPCR方法;新型鸭呼肠孤病毒弱毒S株第30代(NDRV-S-C30)腿部肌肉注射2日龄雏番鸭,在免疫后1、2、3、4、6、8、10、12、14 d(Days post vaccination,dpv)采集其血液、肝脏、脾脏、泄殖腔分泌液和口咽液,用RT-qPCR方法检测NDRV在血液、口咽、泄殖腔及靶器官的增殖能力及带毒时间。【结果】建立了检测NDRV核酸的特异性RT-qPCR方法,使用该方法检测NDRV弱毒攻毒雏鸭的口咽和泄殖腔排毒时间分别为2~8 d和2~10 d,排毒高峰期为4~6 d;病毒血症时间为1~4 d,其中1~2 d为病毒血症高峰期;弱毒在肝脏的带毒时间为3~6 d,在脾脏的带毒时间为1~8 d。【结论】NDRV-S-C30弱毒株免疫雏番鸭后可通过口腔和泄殖腔向外界排毒,仅能引起较弱的病毒血症反应,且在肝脏中的增殖能力弱,丧失了对易感靶器官造成病理损伤的能力。明确了NDRV弱毒S株的排毒规律及病毒血症时间,为建立弱毒免疫效力评价方法奠定了基础。

新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其抗原特性

新型番鸭呼肠孤病毒是近年来新发现的一种引起鸭严重疾病的病原,该病毒与经典MDRV主要在病毒宿主范围、体外培养特性、临床致病性和免疫保护特性上存在显著的差异。通过RT-PCR扩增新型呼肠孤病毒σC基因,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切处理,插入到p ET-28a(+)原核表达载体,获得重组质粒p ET-28a(+)-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达后经SDS-PAGE电泳对σC蛋白进行初步分析,蛋白分子量约为36 k Da。重组蛋白经纯化后免疫实验兔,获得抗σC蛋白的高效免疫血清。通过Western Blot与间接免疫荧光实验初步表明,新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白具有良好的反应活性。

广东新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白基因克隆及序列分析

为研究广东新型呼肠孤病毒(NDRV)的基因变异及遗传演化情况,本试验从广东不同鸭场病死鸭肝脏、脾脏等组织脏器中分离到8株流行毒株,用RT-PCR方法进行σB蛋白基因扩增、克隆与序列分析,并与其他毒株σB蛋白的氨基酸特性、蛋白抗原和蛋白基因进行系统进化比对分析。结果表明,广东省鸭群中感染的NDRV与国内其他地区报道的DRV核苷酸序列同源性很高,达96.6%~99.5%,而与禽呼肠孤病毒(ARV)和番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的同源性则较低,分别为64.6%~66.5%和66.2%~67.1%;8株NDRV之间的核苷酸序列同源性高达97.7%~99.7%。与其他毒株比较结果显示,本试验分离的NDRV毒株磷酸化位点均比参考毒株ARV和MDRV少,且大多数区域的抗原指数都较高,抗原性与MDRV较为接近,遗传进化分析结果表明,NDRV和国内其他DRV处于独立的进化分支,ARV和MDRV则处于不同分支。结果表明,广东省流行的NDRV毒株σB蛋白基因序列高度保守,且广东地区分离的NDRV与国内其他地区分离的DRV没有明显的地域差异。

新型鸭呼肠孤病毒DRV-XX株全基因组序列测定及分析

本研究自广东省新兴地区疑似新型鸭呼肠孤病料样品中分离出一株病毒,命名为DRV-XX株。利用RT-PCR方法对DRV-XX株进行全基因组序列扩增,拼接获得其全基因组(23 419 bp),对其10个基因节段进行分析显示,该分离株与禽呼肠孤病毒(ARV)及番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的相似性较低,而与国内新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)相似性较高(99%),表明该分离株为NDRV。对其10个RNA节段分别进行测序及遗传进化分析,其中S3基因序列分析显示,DRV-XX与MDRV共同构成一主干支,与其S1、S2、S4、M1、M3、L1基因的一致;而M2基因进化树显示,DRV-XX与ARV处于同一主干支;由L2、L3组基因分析显示,DRV-XX与ARV在同一主干支,并有MDRV参与其中,而另一主干支为MDRV。因此,推测DRV-XX株的不同基因组节段来源不同,可能是ARV和MDRV发生同义突变,也可能是基因重组的结果。该研究丰富了NDRV的基因库相关信息,也为广东地区NDRV的防制提供一定参考依据。

新型鸭呼肠孤病毒分离株的致病性研究

【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒（NDRV）的致病性。【方法】以NDRV分离株NP01、NP03、NPM为供试病毒，分析其对禽胚（番鸭胚、鸡胚）、部分禽类（雏番鸭、雏半番鸭、雏鸡、雏鹅）及细胞的致病性。【结果】NDRV分离株经尿囊腔接种能100％致死12日龄番鸭胚和9日龄鸡胚。2Et龄雏番鸭、雏半番鸭经腿肌、口鼻、爪垫等途径人工感染NDRV分离株后，出现了与自然病例相同的病症，NDRV分离株对雏番鸭和雏半番鸭的致死率分别为20％～53％和13％～33％，同时能从病死鸭肝脾中回收到该病毒，耐过鸭大多成为僵鸭；15日龄雏鸡和2日龄雏鹅人工感染NDRV分离株后观察20d，均未表现出NDRV致病的临床症状。NDRV分离株具有较广的细胞亲嗜性，能在MDEF、CEF、AD293、Marc145、Vero、ST、MDCK等细胞中增殖并产生细胞病变，病变细胞呈现巨融合状；但NDRV分离株在PK细胞中盲传3代均未出现病变。【结论】NDRV在致病特性方面明显不同于禽呼肠孤病毒和番鸭呼肠孤病毒。

新型鸭呼肠孤病毒在番鸭体内分布和排毒规律

为阐明新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)在体内分布和排毒规律,采用J03C10株攻击1日龄雏鸭,对血液、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、脑、胸腺、法氏囊、盲肠扁桃体、喉头和泄殖腔采用RT-PCR检测病毒分布情况。结果显示:NDRV在血液中分布时间为攻毒后(PI)12 h^21 d,在脾、胸腺中分布时间为PI 12 h^18 d,在肝、法氏囊中分布时间为PI 12 h^15 d,在胰脏中分布时间为PI 1 d^18 d,在心、肺、肾和盲肠扁桃体中分布时间为PI 1 d^15 d,在脑组织中分布时间为PI 1 d^12 d。攻毒后1 d,即可在喉头和泄殖腔棉拭子中检测到NDRV RNA,而在12 d后已不能检出NDRV RNA。结果表明:番鸭接种NDRV J03C10株后1 d开始向外界排毒,12 d后停止排毒,向外界排毒时间为PI 1 d^9 d。

新型鸭呼肠孤病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立一种快速检测新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的方法,本研究参考GenBank中登录的NDRV S3基因保守序列设计特异性引物,建立了一种检测NDRV的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性和重复性进行检验,并与普通PCR进行比较。结果显示,扩增标准曲线相关系数为0.9996,扩增产物的熔解曲线仅出现单特异峰。对番鸭呼肠孤病毒、禽呼肠孤病毒、鸭病毒性肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭新城疫病毒和禽流感病毒均未检测到荧光信号。对NDRV的最小检出量为29拷贝/μL,比普通PCR敏感性高100倍。组内和组间变异系数均小于2%,重复性好。该检测方法的建立为NDRV早期快速检测及定量分析提供新的方法。

新型鸭呼肠孤病毒、新型鹅细小病毒和鸭坦布苏病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用

【目的】建立能同时检测新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)、新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)的方法。【方法】根据NDRV、NGPV和DTMUV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增NDRV、NGPV和DTMUV的片段大小分别为594、467、328 bp,建立可同时检测NDRV、NGPV和DTMUV的多重PCR检测方法,对其进行特异性、敏感性及重复性检验,并在临床上进行初步应用。【结果】特异性检测结果表明,该多重PCR方法可同时扩增NDRV、NGPV、DTMUV的目的片段,且未扩增出其他鸭常见病原;敏感性结果显示NDRV、NGPV和DTMUV的检测下限分别为8.80×10^(4)、4.03×10^(4)、2.15×10^(4)copies·μL^(−1);重复性试验表明该方法具有良好的重复性。采用建立的多重PCR方法对167份临床样品进行检测结果显示,其检测结果与该3种病毒的常规单一PCR检测结果符合率为100%。【结论】建立的多重PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,适用于临床样品中存在以上3种病原感染的检测和流行病学调查。

用荧光定量RT-PCR方法检测新型鸭呼肠孤病毒

根据新型鸭呼肠孤病毒（novel duck reovirus,NDRV）S1基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量RT-PCR检测方法。根据含目的基因的质粒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。敏感性试验显示,该方法最低可检出15个拷贝的病毒c DNA,其病毒最低检出量为0.5TCID50。该方法具有良好的特异性,对鸭坦布苏病毒（DTMUV）、A型鸭甲肝病毒（DHV-1）、C型鸭甲肝病毒（DHV-3）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）、减蛋综合征病毒（EDSV）、鸭新城疫病毒（NDV）、鸭瘟病毒（DPV）、鸭疫里默氏杆菌（RA）的检测结果均为阴性。该方法重复性好,组内变异系数为0.32%~0.91%,组间变异系数为1.03%~1.51%。利用该方法对人工感染雏鸭的粪便排毒情况进行检测,结果发现,攻毒后2~12 d是粪便排毒期,其中3~6 d是排毒高峰期。临床样品检测结果表明,该方法比常规RT-PCR具有更高的敏感性,而且从收到样品到得出检测结果只需4 h。

新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立快速检测新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)抗体的方法,本研究以纯化的重组σC蛋白作为包被抗原,并对该方法的反应条件进行优化,建立了NDRV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对NDRV血清检测为阳性,与番鸭呼肠孤病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、番鸭源鹅细小病毒阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性。其批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%,具有良好的重复性。利用建立的σC蛋白间接ELISA方法对80份疑似鸭血清样品进行检测,结果显示与NDRV全病毒间接ELISA的符合率为88.75%。本研究建立的ELISA方法为NDRV的流行病学调查提供了快速、特异的血清学检测方法。