以甘蓝型油菜新型恢复系NR1与不育系杂交后代可育植株幼小花蕾为材料,采用SMART（switching mechanism at 5′end of RNA transcript）技术构建了其全长cDNA文库.原始文库的滴度为5.2×107pfu/mL,重组率达96%.随机挑取21个噬菌斑,利...以甘蓝型油菜新型恢复系NR1与不育系杂交后代可育植株幼小花蕾为材料,采用SMART（switching mechanism at 5′end of RNA transcript）技术构建了其全长cDNA文库.原始文库的滴度为5.2×107pfu/mL,重组率达96%.随机挑取21个噬菌斑,利用PCR扩增插入片段,电泳结果显示其长度集中在0.7~2 kb之间,平均大小约为1.1 kb.采用铺平板法扩增文库,扩增后的文库滴度为4.3×1012pfu/mL.结果表明,所构建的文库达到了用于分离目的基因的建库要求,为后续恢复基因等重要功能基因全长cDNA的分离克隆奠定了基础.展开更多
文摘以甘蓝型油菜新型恢复系NR1与不育系杂交后代可育植株幼小花蕾为材料,采用SMART（switching mechanism at 5′end of RNA transcript）技术构建了其全长cDNA文库.原始文库的滴度为5.2×107pfu/mL,重组率达96%.随机挑取21个噬菌斑,利用PCR扩增插入片段,电泳结果显示其长度集中在0.7~2 kb之间,平均大小约为1.1 kb.采用铺平板法扩增文库,扩增后的文库滴度为4.3×1012pfu/mL.结果表明,所构建的文库达到了用于分离目的基因的建库要求,为后续恢复基因等重要功能基因全长cDNA的分离克隆奠定了基础.
