新型番鸭细小病毒Rep蛋白羧基端亚片段的原核表达及多克隆抗体制备

【目的】获得特异性识别新型番鸭细小病毒(New-genotype muscovy duck Parvovirus,N-MDPV)Rep蛋白羧基端亚片段的多克隆抗体。【方法】通过蛋白序列分析,选取N-MDPV Rep羧基端亚片段区域487~627 aa,后全基因合成序列,并在其C末端添加His-tag标签,利用无缝克隆的方法,将该段基因克隆至pET-28a(+)载体,随后转化Rosetta(DE3)大肠杆菌,诱导表达得到重组蛋白。利用镍柱亲和层析技术纯化表达重组蛋白,将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔,制备针对Rep蛋白羧基端亚片段的多克隆抗体。【结果】构建了pET-28a-Rep-487-627原核表达质粒,纯化表达了该重组蛋白。SDS-PAGE结果表明该重组蛋白分子大小约24 kDa,主要以可溶性形式表达。间接免疫荧光和免疫印迹试验表明制备的多克隆抗体能与细胞内过表达的N-MDPV Rep蛋白特异性反应。【结论】制备的Rep多克隆抗体具有良好反应特异性,可识别Rep蛋白的构象表位和线性表位,满足进一步研究的需要。

新型番鸭细小病毒的发现及其感染的临床表现

2008年下半年以来,福建省、浙江省、安徽省及江苏省等地部分鸭场或养鸭户的雏半番鸭和台湾白鸭出现低病死率,约于40日龄起脚易断、上喙变短占近30%,至出栏时残次鸭达60%;免疫接种了雏番鸭细小病毒弱毒活疫苗的雏番鸭依然发生类雏番鸭"三周病",除出现死亡外,幸存鸭的番鸭翅脚易断、上喙变短,83%感染鸭成为僵鸭,对我国养鸭业造成了较大的直接经济损失。经病原学检测、病毒分离鉴定和实验室感染试验,发现其病原为与原经典的雏番鸭细小病毒(MDPV)在基因组上、感染宿主范围和致病性存在较大差异的番鸭细小病毒,鉴于此,将之暂定名为新型番鸭细小病毒(NMDPV)。

半番鸭共感染鸭圆环病毒和新型番鸭细小病毒的诊断

2020年3月,广东湛江某养鸭场饲养的65日龄半番鸭群发病,根据其流行病学特点、临床症状和剖检病变,结合实验室病原学检测、基因序列测定,确定其为鸭圆环病毒和新型番鸭细小病毒共感染。该文报道这起病例的诊断方法,以期为同行提供参考。

一起番鸭感染鸭瘟、新型番鸭细小病毒、鸭圆环病毒的诊断

对昆明郊县的番鸭病例诊断,根据发病情况、临床症状、剖检病变,结合实验室细菌分离培养、病原学检测、基因序列测定等实验方法,确定养殖场该批次番鸭为鸭瘟(DP)、新型番鸭细小病毒(N-MDPV)、鸭圆环病毒(DuCV)感染。

一起番鸭感染新型细小病毒的诊断报告

2018年11月,江西省南城县某鸭场饲养的30日龄番鸭群发病,发病率约为50%,病死率约为10%,感染后耐过鸭呈现典型的"短喙-侏儒综合征"症状。经实验室检查,确诊引起该场鸭群发病的病原为新型番鸭细小病毒,该文主要报道该起病例的诊断情况。

检测水禽源细小病毒的胶体金试纸条的研制

为建立水禽源细小病毒的快速检测方法,本研究采用纯化的小鹅瘟病毒(GPV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,筛选到21株能够稳定分泌抗GPV的单克隆抗体(MAb),将1株MAb纯化后与胶体金结合,喷涂金标垫,与另一株纯化的MAb配对,制成检测水禽源细小病毒的胶体金试纸条。特异性试验表明,鹅细小病毒、番鸭细小病毒和新型番鸭细小病毒的检测结果均为阳性,猪细小病毒、1型鸭甲肝病毒、坦布苏病毒、产蛋下降综合征病毒、H9N2亚型禽流感病毒、番鸭呼肠孤病毒和新城疫病毒等的检测结果均为阴性。该方法对鹅细小病毒、番鸭细小病毒和新型番鸭细小病毒的最低检出量分别为10^(4.7) ELD50/mL、10^(4.7)ELD50/mL和10^(5.7) ELD50/mL。重复性试验良好。对临床粪便样品的检测,该方法比PCR方法简单快速,但是存在漏检的情况。上述结果表明,本实验建立的方法可用于水禽源细小病毒病的初步快速筛查。

一例番鸭短喙与侏儒综合征的诊断

2023年1月,福建漳州某番鸭养殖场番鸭(约65日龄)生长迟缓,临床表现为短喙与侏儒综合征,剖检主要脏器无明显病理变化。对该病例进行常规实验室病原核酸检测发现,该病例为新型番鸭细小病毒与鸭圆环病毒共感染。现将该病例的诊断情况做一简要报道,供同行参考。

“短喙侏儒综合征”半番鸭病原学检测及病理组织学特征

旨在明确福建省漳州地区3个“短喙侏儒综合征”半番鸭群的病原及病理组织学特征。对患病半番鸭体质量、喙长、喙宽进行测定及统计分析，采集患病半番鸭肝、脾、胰腺组织进行病原学检测、病毒分离鉴定和基因序列测定与分析，同时采集心、肝、脾、肺、肾等10种组织进行病毒分布及病理组织学研究。结果表明，患病半番鸭喙长，体质量与同场正常未感染半番鸭相比，发病鸭体质量减少达49．00％，喙长缩短达32．00％，喙宽缩短达22．00％；经PCR或RT—PCR检测显示，所采样品禽流感病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒、坦布苏病毒、鸭甲肝病毒、呼肠孤病毒、鸭圆环病毒、鸭疫里默氏菌、鸭大肠杆菌、鸭沙门菌均为阴性，均为水禽细小病毒阳性；对组织匀浆液致死的鸭胚尿囊液检测表明，分离毒株均为水禽细小病毒，经进一步基因序列分析显示所分离3株病毒与番鸭细小病毒病（MDPV）各代表株核苷酸同源性达97．7％以上，与新型MDPVSAAS—SHNH株核苷酸同源性高达98．9％。组织病毒分布检测结果显示，患病半番鸭心、肝、脾、肺、肾等10种组织均不同程度带毒，其中以胸腺、法氏囊、心、脾和胰腺病毒含量最高，肝、肺、脑、小肠次之，肾脏最低；病理组织学研究可见心肌颗粒变性，肝脏水泡变性，胸腺出血，骨骼肌出血、坏死。以上结果表明，福建省漳州地区的3个半番鸭群发生的“短喙侏儒综合征”由新型MDPV所致，且与经典的MDPV在感染宿主、临床症状、病变特征等方面存在较大差异，为新型MDPV病的诊断提供了科学依据和借鉴。