新型类嘌呤脱氧核糖核苷类化合物的抗乙型肝炎病毒体外活性实验研究

探讨新型类嘌呤脱氧核糖核苷类化合物体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用,为了将新型类嘌呤脱氧核糖核苷类化合物作用于以Hep G2.2.15细胞系,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测样品对Hep G2.2.15细胞的毒性,采用酶联免疫吸附测定技术(ELISA)检测细胞上清中HBsAg和HBeAg的变化.结果显示,新型类嘌呤脱氧核糖核苷类化合物在第9天时,浓度为10μmol/L,对HBsAg和HBeAg的抑制率都较高,化合物的毒性也较低.体外细胞培养表明,新型类嘌呤脱氧核糖核苷类化合物在体外有一定的抗乙型肝炎病毒作用.

新型类嘌呤脱氧核糖核苷类化合物的合成

以1,3,5-三-O-苯甲酰基-2-脱氧-2-β-氟-α-D-核糖为原料,通过溴代、与4-氯吡咯[2,3-d]嘧啶的钠盐偶合、4-氯的氨基化等反应,设计合成了一系列具有新型结构的4-取代-9-(2′-脱氧-2′-β-氟-β-D-呋喃糖基)吡咯[2,3-d]嘧啶类化合物,其化学结构经核磁共振、高分辨率质谱分析确证;并且初步探讨了反应条件和反应机理.结果表明,以无水四氢呋喃为溶剂,密闭高压回流反应,反应产率较高.

嘌呤核苷类抗病毒药物470例不良反应分析

2002年8月在法国巴黎召开的世界病毒学大会提出的第7份病毒类学报告指出:使人类致病的病毒有29个科,7个亚科,53个属,1200多种病毒.发病率高,危害性大的病毒性疾病有6类,其中的一类为由8种人疱疹病毒引起的巨细胞病毒(CMV)视网膜炎、间质性肺炎、疱疹性脑炎、眼角膜炎、生殖器疱疹、带状疱疹、唇疱疹.[1]

三种鸡菌属真菌核苷及嘌呤碱基类成分含量测定

目的:以高效液相色谱法测定鸡、灰鸡和黄鸡3种鸡菌子实体中核苷及嘌呤碱基类成分的组成和含量,建立鸡类真菌核苷及嘌呤碱基类成分的控制指标。方法:采用Waters Xbridge C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,流速为0.8 mL·min^(-1),柱温为30℃,检测波长为260 nm。结果:3种鸡菌子实体中均检出次黄嘌呤、黄嘌呤、胞苷、腺苷、鸟苷、尿苷、肌苷等成分,且在质量浓度分别在7.51~120.12、4.99~79.84、25.13~402.00、12.61~201.80、5.03~80.48、5.00~80.00、10.00~160.00μg·mL^(-1)与峰面积呈良好线性关系(r≥0.999 6);平均回收率为95.83%~103.01%,RSD≤3.98%(n=6)。鸡中2种嘌呤碱基、5种核苷类成分含量分别为:0.36、3.13、2.20、3.63、1.11、1.87、1.50 mg·g^(-1);灰鸡含量为:0.10、0.78、1.86、3.07、1.48、1.70、0.62 mg·g^(-1);黄鸡含量为:0.22、2.53、1.86、2.35、0.78、0.84、0.83 mg·g^(-1)。结论:本实验建立的HPLC测定鸡类真菌中5种核苷及2种嘌呤碱基类成分含量的分析方法简单、重复性好、准确度高,可以为鸡类真菌的质量控制提供参考,3种鸡菌子实体在医疗和营养保健上都有较高的研究价值。

嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响

[目的]提高卵母细胞体外成熟率及其后续发育能力。[方法]以延边奶山羊为试验对象，活体采卵所获得的卵母细胞为材料，利用核成熟抑制剂Hx和IBMX分别进行体外成熟培养，研究嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响。[结果]所有浓度Hx和IBMX均可有效维持卵母细胞停留在GV期且呈剂量依赖性逐渐升高。最适宜延边奶山羊卵母细胞成熟的HX和IB—MX添加浓度分别为2和0．2mmol／L。[结论]该研究可为延边奶山羊的转基因和体细胞克隆试验等提供稳定的成熟卵母细胞来源。

嘌呤核苷磷酸化酶与嘧啶核苷磷酸化酶的融合表达及酶法合成嘌呤核苷类产物

将嘌呤核苷磷酸化酶与嘧啶核苷磷酸化酶进行融合,提高生物酶法催化合成克拉屈滨等嘌呤核苷类产物的产率。设计不同的刚性、柔性连接短肽(Linker),将嘧啶核苷磷酸化酶EcUP与嘌呤核苷磷酸化酶AmPNP连接融合,考察酶融合蛋白的可溶性表达与活性情况。使用EEEEEEKKK短肽连接的融合蛋白EcUP-L4-AmPNP可溶性表达水平较高,并对嘌呤核苷与嘧啶核苷均具有反应活性,对嘌呤核苷的水解率远小于嘧啶核苷。研究发现:融合酶EcUP-L4-AmPNP催化合成克拉屈滨等嘌呤核苷类产物的产率70.4%~98.3%,合成产率比分别加入酶EcUP和酶AmPNP的游离双酶体系提高了约1.5~2.0倍。核苷磷酸化酶的融合蛋白有利于实现高效催化合成嘌呤核苷产物,生物催化合成克拉屈滨等几种嘌呤核苷类产物的产率显著提高。

常见食品及调味品中嘌呤类组分含量分析及分布规律

在基于反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)的食品中嘌呤类物质检测方法优化的基础上,对典型水产品、畜禽肉类、豆制品、食用菌、蔬果以及常见调味品中腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤的含量及其分布规律进行研究,旨在为消费者健康饮食提供理论指导。结果表明,常见食品中总嘌呤含量以水产品最高,其次为畜禽肉类,植物性食品中最低。其中,水产品和畜禽肉类中总嘌呤含量分别为147.46~433.15 mg/100 g和106.09~138.16 mg/100 g,且以次黄嘌呤为主;内脏猪肝中嘌呤则以鸟嘌呤和腺嘌呤为主,总嘌呤含量在280 mg/100 g以上;检测的6种植物性食品中,4种总嘌呤含量小于50 mg/100 g。在检测的多种调味品中,鸡精、鸡鲜调味料中总嘌呤含量较高,达到500 mg/100 g以上,海鲜类酱料总嘌呤含量高于150 mg/100 g,豆类调味品中总嘌呤含量约在120 mg/100 g,而蔬果类调味料中总嘌呤含量小于50 mg/100 g,不同食品类的嘌呤分布除了含量外,尚与呈味核苷酸二钠(IMP+GMP,I+G)的增鲜添加有关。因此,在日常饮食中,应尽量控制此类高嘌呤食品的摄入量,以减缓高尿酸血症和痛风等健康风险。

早产大鼠高氧肺损伤组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶的动态表达及其意义

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位1、2、5在早产大鼠高氧肺损伤组织中的动态表达及其意义。方法早产新生大鼠生后1d随机分为高氧和空气组,高氧组持续暴露于850mL/L氧气中,空气组置同一室内常压空气中。分别取二组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14d肺组织标本,采用HE染色观察肺组织形态学改变,采用RT-PCR法在mRNA水平检测NADH脱氢酶亚单位1、2、5的表达。结果1.高氧暴露1、4d,早产大鼠肺组织形态较空气组无明显改变;高氧暴露7、10d,肺组织渐出现小血管充血扩张,肺泡腔内炎性细胞浸润,肺泡间隔增厚,肺泡数目减少、结构简单化和囊泡化等改变。2.空气组NADH脱氢酶亚单位1(ND1)和亚单位2(ND2)mRNA的表达随日龄增长渐降低,至7d时最低,随后其表达逐渐增高;空气组NADH脱氢酶亚单位5(ND5)mRNA的表达随日龄增长渐降低,至4d时最低,随后其表达逐渐增高。3.与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4和7dND1和ND5mRNA表达显著增强(Pa<0.05),随后其表达渐下降,10、14d时低于空气组,但二者相比差异无显著性意义(Pa>0.05);与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4d ND2 mRNA表达二组间差异无显著性意义(Pa>0.05),7d时较空气组极显著增强(P<0.01),10、14d时较空气组显著降低(Pa<0.05)。结论高氧可导致早产大鼠肺组织NADH脱氢酶表达改变,提示其可能参与高氧肺损伤的病理生理过程。

酶法合成6-氯嘌呤核苷

利用菌种Lactobacillus helveticus（ATCC 10697）所产生的N-脱氧核糖转移酶,以底物鸟苷和6-氯嘌呤为原料通过碱基交换合成6-氯嘌呤核苷,并优化了反应条件,25 m1的锥形瓶装有反应液10 ml,结果显示最佳反应条件如下：底物最适反应浓度为30 mmol/L（鸟苷）和10 mmol/L（6-氯嘌呤）,菌体添加量8%～10%（湿重）,反应温度40℃,0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH值6.0）,摇床转速120 r/min,反应时间24 h,6-氯嘌呤核苷收率可达到51.6%,具有较好的应用前景.

嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠脑组织中DA和NE水平的影响及其机制

目的:探讨外源性嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠脑组织中多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)水平以及代谢关键酶的影响,探索嘌呤核苷酸治疗药物依赖的可能性。方法:65只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(C)、海洛因组(H)、海洛因+嘌呤核苷酸组(HAG)、海洛因+腺嘌呤核苷酸组(HA)、海洛因+鸟嘌呤核苷酸组(HG),每组13只。荧光分光光度计法检测各组大鼠中脑组织中DA和NE水平,ELISA试剂盒检测酪氨酸羟化酶(TH)水平,实时定量PCR法检测TH的表达。电镜下观察大鼠VTA区神经结构的形态变化。结果:与C组比较,H组DA、NE、TH水平和TH表达水平降低(P<0.05)。与H组比较,HAG组DA、NE、TH水平升高(P<0.05),HA组TH水平升高(P<0.05),HG组TH、NE水平升高(P<0.05)。与C组比较,H组TH基因表达降低;与H组比较,HAG、HA及HG组中TH基因表达水平升高(P<0.05)。电镜下H组出现神经毡水肿及髓鞘脱落现象,HAG、HA和HG组常染色体稍有增多,超微结构损伤都较H组减轻。结论:嘌呤核苷酸补偿能提高大鼠脑组织中DA和NE的水平,能够减轻海洛因对大鼠造成的损伤,提示嘌呤核苷酸治疗药物依赖具有可行性。

嘌呤核苷酸减弱吗啡抑制的PC12细胞嘌呤核苷酸合成代谢

目的:探讨外源性嘌呤核苷酸对吗啡致神经细胞核苷酸合成代谢降低的影响。方法:大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12细胞)分为对照组、吗啡组、单嘌呤核苷酸(AMP+GMP)组、三嘌呤核苷酸(ATP+GTP)组、吗啡+AMP+GMP组及吗啡+ATP+GTP组。应用RT-PCR法检测各实验组腺苷激酶(AK)和次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)基因转录产物含量的变化。结果:吗啡组AK mRNA及HGPRT mRNA表达量(分别为1.330±0.108和1.407±0.141)与对照组(1.874±0.161和1.923±0.155)比较明显降低(P<0.01,P<0.05)。吗啡+AMP+GMP组AK mRNA表达量(1.626±0.171)与吗啡组和对照组比较差异无显著性(P>0.05),HGPRT mRNA表达量(1.796±0.168)高于吗啡组(P<0.05)。吗啡+ATP+GTP组AK mRNA表达量(1.107±0.164)低于对照组(P<0.01),HGPRT mRNA表达量(1.563±0.209)与吗啡组及对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:外源性补充嘌呤核苷酸能改善吗啡所致的PC12细胞嘌呤核苷酸合成代谢关键酶基因表达降低。

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶介导血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞增殖

目的:探讨活性氧(ROS)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的c-Jun氨基末端激酶(JNK)/活化蛋白(AP-1)信号通路活化及系膜细胞增殖中的作用并探讨其来源。方法:体外培养人肾小球系膜细胞,应用3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法和细胞计数测定系膜细胞增殖;荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFDA)检测细胞内ROS的产生;化学发光法检测尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性;WesternBlot检测JNK活化。结果:AngⅡ呈时间依赖性和剂量依赖性促进肾小球系膜细胞ROS产生。AngⅡ刺激3min,系膜细胞内ROS产生明显增加,至60min达到高峰。AT1R血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)拮抗剂氯沙坦完全阻断了AngⅡ诱导的ROS产生。NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素和二联苯碘(DPI)几乎完全阻断AngⅡ诱导的ROS产生,而线粒体复合体Ⅰ抑制剂鱼藤酮、黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌醇、环氧化酶抑制剂吲哚美辛、脂氧化酶抑制剂去甲二氢化愈创木酸、细胞色素P450氧化酶抑制剂酮康唑以及一氧化氮合成酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对AngⅡ诱导的ROS产生均无明显影响。AngⅡ显著刺激NADPH氧化酶活化及p47phox和p67phox膜转位。氯沙坦、乙酰半胱氨酸(NAC)、夹竹桃麻素和DPI阻断AngⅡ诱导的JNK/AP-1活化和系膜细胞增殖。结论:NADPH氧化酶来源的ROS调控AngⅡ诱导的JNK/AP-1信号通路活化及系膜细胞增殖。NADPH氧化酶抑制剂能显著抑制AngⅡ诱导的系膜细胞增殖,可能具有一定的治疗作用。

嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠睾丸和附睾组织中腺苷脱氨酶活性及基因表达的影响

目的:研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠睾丸、附睾腺苷脱氨酶(ADA)活性及基因表达的影响,阐明海洛因对男性生殖系统嘌呤核苷酸代谢的损害及嘌呤核苷酸补偿的对抗作用。方法:建立海洛因依赖及戒断大鼠模型,80只建模成功的雄性Wistar大鼠随机分为对照组(生理盐水)、海洛因组、海洛因戒断3d组、海洛因戒断9d组、核苷酸组(不给海洛因)、海洛因+核苷酸组(同时给药)、核苷酸3d组及核苷酸9d组(每组10只),检测睾丸和附睾组织内ADA活性及基因表达的情况。结果:睾丸和附睾组织中ADA活性,海洛因组和海洛因戒断3d组均明显高于对照组(P<0.05),其他各组与对照组比较,差异均无显著性(P>0.05);睾丸组织中ADAmRNA水平,海洛因组明显高于对照组(P<0.05),附睾组织中ADAmRNA水平,海洛因组、海洛因戒断3d组和海洛因戒断9d组均明显高于对照组(P<0.05),其他各组与对照组比较,差异均无显著性(P>0.05)。结论:海洛因对大鼠睾丸和附睾组织中ADA活性和基因表达有持续增强作用,补偿嘌呤核苷酸可以对抗海洛因的作用。

嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的影响

目的:探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的影响,阐明嘌呤核苷酸补偿治疗海洛因依赖效应机制。方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、海洛因组、海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组。检测各组血尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cre)含量,以及血浆和大脑皮质腺苷脱氨酶(ADA)和黄嘌呤氧化酶(XO)活性。结果:海洛因组血浆中UA含量及ADA、XO的活性均比对照组明显升高(P<0.05),而海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组血浆UA含量及ADA、XO的活性与海洛因组相比明显降低(P<0.05)。各组间BUN和Cre含量差异无显著性(P>0.05)。海洛因组大脑皮质中ADA、XO的活性均比对照组明显升高(P<0.05),而海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组大脑皮质ADA、XO的活性与海洛因组相比明显降低(P<0.05)。结论:海洛因可促进大鼠整体水平上嘌呤核苷酸的分解代谢,而补偿嘌呤核苷酸可以抑制或拮抗海洛因的上述作用。

腺嘌呤核苷的一种简便制法

核苷及核苷酸化合物作为新型药物正在蓬勃发展。已有报导的,对治疗冠心病、肿瘤和病毒性疾病,已不下数十种有明显疗效的药物,如阿糖腺苷,2—5A,2′,3′一双去氧腺苷衍生物等,研究这些药物的合成需要大量的腺嘌呤核苷为原料。目前尚无国产腺苷商品的供应,依赖进口品价格昂贵,现一般是按文献方法,从目前国内生产的核苷酸降解而得。

巯基嘌呤甲基转移酶在嘌呤类药物代谢过程中的作用及基因多态性

巯基嘌呤甲基转移酶(TPMT)是嘌呤类抗肿瘤药物在体内代谢过程中起关键作用的酶,它可以减少嘌呤类药物在代谢中生成的巯基鸟嘌呤磷酸盐(是导致造血系统毒性作用的主要成分)。TPMT活性降低或缺失的患者,在接受标准剂量的嘌呤类药物治疗时,极易造成骨髓抑制。红细胞内TPMT活性在人群中呈多态性分布,其遗传学基础是TPMT基因编码区的单个碱基突变或启动子区的串联重复序列的多态性。因此,明确TPMT基因型和表现型的关系,对于预测TPMT活性,指导临床用药将有重要意义。

RP-HPLC测定虫草菌粉中核苷类成分

采用高效液相色谱法测定虫草菌粉中核苷类成分,尿苷、鸟苷、腺苷及腺嘌呤能很好分离,其优化的色谱条件为:AlltimaC1 8(2 5 0mm×4 .6mm ,5 μm)色谱柱,乙腈-水(V/V =4 :96 )为流动相,流速为1 .0ml/min ,检测波长为2 6 0nm。该方法灵敏度高、定量准确、重现性好、回收率高(98.7%～1 0 1 .5 %) ,适合用于虫草菌粉中核苷类成分的分析。虫草菌粉中尿苷、鸟苷、腺嘌呤和腺苷的含量分别为1 0 .5 2mg/g ,8.5 6mg/g ,0 .70 8mg/g和1 .79mg/g ,其测定RSD范围为0 .5 1 %～1 .30 %(n =5 )。

竹叶菜中的核苷类化学成分

目的 :为了开发利用竹叶菜资源 ,对竹叶菜的化学成分进行了研究。方法 :运用硅胶柱层析法分离其化学成分 ,用UV、IR、NMR、MS及X晶体衍射的方法进行结构鉴定。结果 :从甲醇提取物中分离得到 3个核苷类化合物 ,分别鉴定为胸腺嘧啶脱氧核苷 (Ⅰ ) ,腺嘌呤核苷 (Ⅱ ) ,2′ 脱氧腺苷 (Ⅲ )。结论 :首次对竹叶菜的核苷类化学成分进行了报道 。

油菜蜂花粉中一种核苷类成分的分离

为了研究油菜蜂花粉中核苷类成分的组成,本实验采用15%乙醇进行超声提取,结合薄层色谱法(thin layerchromatography,TLC)分析(展开剂为氯仿-甲醇-氨水,体积比为6.5:8.0:1.5),再经D101大孔吸附树脂柱层析(洗脱剂为5%乙醇)、水饱和正丁醇萃取及高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)分离纯化,最终分离得到单一化合物,通过液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(liquid chromatography-quadrupole-time offlight mass spectrometer,LC-Q-TOF)对其相对分子质量、不饱和度、同位素匹配度、相似度进行分析,通过HPLC法比较样品与标准品的保留时间、紫外光谱图比对,确认该化合物为腺嘌呤(adenine)。