一种新型肽对Lewis肿瘤细胞凋亡的影响

目的探讨新型肽对Lewis肿瘤细胞凋亡作用的影响。方法采用吖橙啶/溴乙啶(AO/EB)及线粒体膜电位法检测Lewis肿瘤细胞在48 h细胞凋亡情况,荧光显微镜观察AO/EB双染法检测细胞凋亡及线粒体膜电位的变化。结果新型肽对Lewis细胞具有明显促进凋亡的作用。荧光显微镜下观察:新型肽(2 000μg/ml)治疗组可见典型的细胞凋亡形态学特征性改变;线粒体膜电位显著降低;细胞凋亡率明显增加分别与空白对照及新型肽(1 000μl/ml)治疗组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论新型肽可能通过降低Lewis肿瘤细胞线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,发挥抗肿瘤生长作用。

新型肽对Lewis肿瘤细胞的作用

目的探讨新型肽对Lewis肿瘤细胞的抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测Lewis肿瘤细胞在不同时间段(24、48、72 h)细胞增殖活性,构建C57BL/6N纯系小鼠肺癌模型,免疫组化法检测细胞周期蛋白D1阳性表达。结果 Lewis肿瘤细胞在给药48 h,新型肽对肿瘤细胞的增殖具有明显抑制作用,与空白对照组比较差异显著(P<0.05);在连续给药21 d后,肿瘤体积明显缩小,抑制率为43.38%;细胞周期蛋白D1阳性表达明显降低,与空白对照组比较具有统计学意义(P<0.05)。结论新型肽可能通过调节细胞周期蛋白D1的表达,诱导肿瘤细胞凋亡,发挥抗肿瘤生长作用。

Bacillussp.fmbJ224发酵产新型抗菌肽培养基的优化研究

采用Plackett_Burman设计(Plackett_BurmanDesign,PB)法,对影响Bacillussp.fmbJ224产新型抗菌肽的17个因素进行了筛选。结果表明:影响该菌发酵产新型抗菌肽的主要培养基成分为葡萄糖、NH4NO3、谷氨酸、CaCl2、MnSO4。在此基础上,再采用响应曲面法(ResponseSurfaceMethodology,RSM)对其5个显著因子的最佳水平范围进行研究。通过对二次多项回归方程求解得知,在上述自变量分别为葡萄糖8·13g/L、NH4NO36·14g/L、谷氨酸4·2g/L、CaCl23·98mg/L、MnSO44·87mg/L时,新型抗菌肽的产量从1304·21μg/mL提高到了1487·58μg/mL。

Bacillus sp. fmbJ224发酵产新型抗菌肽发酵条件的优化研究

采用响应面方法对Bacillussp.fmbJ224发酵产新型抗菌肽发酵条件进行了优化。首先采用Plackett-Burman设计(Plackett-Burman Design,PB)法,对影响Bacillus sp.fmbJ224产抗菌肽的6个发酵外部条件进行了筛选。结果表明:影响深层该菌发酵产抗菌肽的主要因子为温度、装液量、发酵时间。在此基础上,然后用Box-Boken设计及响应面分析法确定关键因子的最佳水平及交互作用。通过对二次多项回归方程求解得知,在上述自变量分别为温度33.08℃,装液量为71.93ml,发酵时间为43.45h时抗菌肽的含量提高了199.19μg/mL。

促红素新型环性衍生肽对顺铂诱导肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的 :探讨促红素新型环性衍生肽(cyclic helix B peptide,CHBP)对顺铂诱导肾小管上皮细胞(NRK-52E)损伤的保护作用及可能机制。方法:体外培养NRK-52E细胞,分为(1)对照组:NRK-52E细胞(4×105个)单独培养;(2)顺铂组:10μmol/L顺铂处理NRK-52E细胞;(3)CHBP干预组:顺铂处理NRK-52E细胞加入不同浓度CHBP干预,低浓度亚组为16 nmol/L CHBP,中浓度亚组为32 nmol/L CHBP,高浓度亚组为64 nmol/L CHBP。每个亚组分别干预12 h、24 h。采用流式细胞术及Annexin V-FITC-PI法检测NRK-52E细胞凋亡率。结果:顺铂组处理24 h凋亡率较12 h增高,差异具有统计学意义(P<0.05);在处理12 h和24 h两个时间点,顺铂组凋亡率高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);在处理12 h后,低浓度亚组凋亡率与顺铂组比较,差异无统计学意义(P>0.05),中、高浓度亚组的凋亡率低于顺铂组,差异均具有统计学意义(P<0.05);在处理24 h时间点,各干预组凋亡率低于顺铂组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:CHBP对顺铂诱导NRK-52E细胞损伤具有保护作用。

新型双功能谷胱甘肽合成酶的真核和原核表达

通过裂解无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)菌体细胞得到基因组DNA。根据GenBank上已发表的无乳链球菌(菌种编号ATCC13813)新型双功能谷胱甘肽合成酶基因(gshF)的核酸序列与2种不同表达载体多克隆位点序列,分别设计引物F1、R1和F2、R2,再以总DNA为模板,经过特异性PCR扩增出长度约为2200bp的目的基因。随后分别对目的基因gshF和2种表达载体进行双酶切、连接等操作,得到表达载体pPIC9K-gshF与pET-gshF。用SalI线性化表达载体pPIC9K-gshF后电转至毕赤酵母GS115中。经MD平板筛选重组子、菌落PCR鉴定阳性菌株、G418抗性梯度平板筛选多拷贝菌株,最终在4.0mg·mL^-1G418抗性平板上筛选出阳性菌株。用甲醇终浓度为2%的BMMY培养基诱导该阳性菌株表达,每隔12h取样并添加甲醇,96h后离心收集发酵上清,经SDS-PAGE蛋白电泳显示:在85kDa处出现1条明显蛋白带,大小与预期GshF蛋白一致。重组菌BL21-pET-gshF用IPTG诱导表达,先在37℃下培养90min,再加入IPTG至1mmol·L^-1后诱导7h,离心收集表达产物并对重组菌进行超声破碎处理后,进行SDS-PAGE蛋白电泳,同样在85kDa处有1条蛋白带。采用Bradford法测定2种表达产物上清的蛋白量,其中重组酵母表达上清中蛋白量为0.46mg·mL^-1,重组大肠杆菌表达产物破壁后的蛋白量为1.46mg·mL^-1。测定并比较2种不同表达方式所得酶活,发现GshF在毕赤酵母表达中的比酶活仅为14.15U·mL^-1,经原核表达后比酶活可达62.15U·mL^-1。

新型LL-37杂合肽对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤活性的研究

目的:探究新型LL-37杂合肽对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤活性及其作用机制。方法:利用抗菌肽数据库(http://aps.unmc.edu/AP/main.php)筛选出人源的抗肿瘤抗菌肽,即LL-37和中性粒细胞防御素-1(human neutrophil peptide 1,HNP-1),经生物信息学软件分析提取有效肽片段,改造整合成新型LL-37杂合肽;采用CCK-8法检测0~70μmol/L的新型LL-37杂合肽对MCF-7细胞和人正常乳腺细胞MCF10A增殖的影响,激光扫描共聚焦显微镜观察分析新型LL-37杂合肽与肿瘤细胞的亲和能力,流式细胞仪检测新型LL-37杂合肽和caspase抑制剂对MCF-7细胞凋亡和周期的影响。结果:经软件分析得出新型LL-37杂合肽为水脂两亲性的阳离子多肽,可靶向性地抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖(P<0.05),其IC50值为58.34μmol/L,而对正常乳腺MCF10A细胞无明显抑制作用;新型LL-37杂合肽与MCF-7细胞具有较高的亲和力,可引起细胞周期阻滞于S期及显著增加细胞早期凋亡率(P<0.01);但在加入caspase抑制剂后,细胞周期阻滞及凋亡情况明显缓解(P<0.01)。结论:新型LL-37杂合肽对乳腺癌MCF-7细胞具有抗肿瘤活性,可能通过caspase依赖的信号通路阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。

含氨基酸新型小分子多肽化合物的概述

蛋白质是组成人体一切细胞、生命器官的重要成分,生物体所有重要组成部分都需要有蛋白质的参与,蛋白质是生命的根源,是构成细胞的基础有机物,是生命活动的主要承担者。蛋白质由21种不同的氨基酸组成,氨基酸作为组成蛋白质的基本单位,合成含有特殊氨基酸的新型小分子多肽化合物,与金属离子作用生成某些性质与生物体内金属酶相似的金属配合物,对生命体的研究具有非常重要的意义。在这种类似金属酶的中心金属离子配合物中,金属离子与这些小分子多肽化合物之间的作用通常表现为:范德华力、氢键、π-π堆积、疏水作用等弱作用力。

新型抗菌肽类蛋白物质及生物清创在兽医临床的应用与推广

近年来，抗菌药物的研发工作一直进展缓慢。不过，最近发现的两种可用于治疗革兰氏阳性菌感染的新型抗菌肽却让人眼前一亮。目前，全球滥用抗生素的情况严重，有学者曾忧心地提出——由于人类在与细菌的“军备竞赛”中总是处于被动和落后的态势，当有朝一日人类研制的最强效的抗生素都因为超级细菌的存在而失效时，这个世界将会变成什么样子呢？不过，最近科学家发现的一种可用于治疗革兰氏阳性菌感染的新型抗菌肽，可望为一直进展缓慢的抗菌药物研发工作增添一份信心。

基于分子对接技术从虾夷扇贝中筛选抗SARS-CoV-2活性肽研究

为从食品原料中筛选具有抗2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)能力的生物活性肽段,选用虾夷扇贝肌球蛋白为目标序列,利用计算机对虾夷扇贝肌球蛋白进行模拟酶解,对酶解所得的肽段进行毒性和生物活性预测。选取活性评分超过0.5且无毒性的肽段,以SARS-CoV-S/ACE2复合蛋白和COVID-19 Mpro水解酶为靶标进行分子对接,鉴定其病毒抗性。结果表明:肽段CSNAIPEL可以与SARS-CoV-S/ACE2复合蛋白上的GLN42和GLU329两个关键氨基酸结合,LibDock Score为136.03;肽段LPIY不仅能与SARS-CoV-S/ACE2复合蛋白上的ASP38和TYR491氨基酸结合,还能够与COVID-19 Mpro上的THR24、THR25和THR26氨基酸结合,LibDock Score分别为142.85和168.04;肽段QRPR与COVID-19 Mpro水解酶晶体上的THR24、THR25和THR26氨基酸结合,LibDock Score为154.93。研究表明,肽段CSNAIPEL、LPIY和QRPR三者表现出较好的抗SARS-CoV-2能力。本研究旨在为抗新型冠状病毒功能食品的研发提供新的思路。

生香酵母对多肽黄酒发酵中的风味影响研究

采用黄酒酿制复式发酵工艺,酶法活性多肽生物发酵技术酿制新型生物多肽黄酒.研究生香酵母假丝酵母AS2.1182和球似酵母AS2.202不同添加量在新型多肽黄酒复式发酵过程中的风味增香效果,并与同类传统黄酒的品质进行比较.结果表明,在复式发酵过程中添加上述生香酵母混合培养液0.2％～0.3％,能显著改善新型多肽黄酒的风味和香气,且品质优于国内同类传统黄酒.

活性多肽对黄酒发酵过程的影响

采用多肽黄酒酿造技术,酶法活性多肽生物发酵工艺酿制新型生物多肽黄酒。主要研究玉米肽不同浓度、不同添加时段对黄酒发酵过程的影响。结果表明:玉米肽能提高黄酒的酿造效率。在前发酵开始后第50小时段添加2.0 mg/mL浓度的玉米肽发酵周期可缩短2d,有助于促进菌体生长,提高发酵液中酒精含量,提高总糖利用率;后发酵添加玉米肽使其成为主要活性成分之一的新型生物黄酒,肽含量可达4.0 g/L以上,大大强化了黄酒保健养生功能,且品质更优良,市场发展潜力巨大。

新型HLA衍生肽对大鼠脾细胞免疫功能的抑制作用

目的 观察一种新型组织相容性白细胞抗原(HLA)衍生肽(RDP1258)的免疫抑制作用并探讨其机制。方法 人工合成一种HLA RDP1258,用3H胸腺嘧啶( 3H TdR)掺入法观察其在体外对大鼠脾细胞增殖反应的影响;以酶化学法观察其对脾细胞血红素氧合酶 1(HO 1)活性的影响。并与HLA衍生肽(HLA 2702.75 84)进行对比。结果 HLA RDP1258 抑制大鼠脾细胞增殖作用比HLA B2702.75 84 强,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05);HLA RDP1258 对淋巴细胞增殖具有显著的抑制作用,抑制率大约是 HLA B2702.75 84 的 8 倍以上;HLA RDP1258 具有较明显的体外HO 1抑制作用,是HLA B2702.75 84抑制作用的5倍以上,呈剂量依赖性。结论 HLA RDP1258能够显著抑制大鼠脾细胞经丝裂原或同种抗原刺激引起的增殖反应,这种作用可能与影响HO 1活性有关。

O型FMDV多抗原表位在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析

为了研制口蹄疫的新型多肽疫苗，试验以l株0型口蹄疫病毒（FMDV）VP1基因为模板，根据毕赤酵母密码子偏嗜性，设计合成了含有T细胞表位（21～40aa）和B细胞表位（129～169aa）的多肽基因TB60，通过基因工程技术克隆到pGAPZαA质粒中，构建成分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA—TB60，并经线性化后用电穿孔法转入毕赤酵母X33中，经博莱霉素（Zeocin）抗性筛选及PCR检测后，获得高拷贝转化子；再对重组毕赤酵母pGAPZαA—TB60-X33的分泌表达产物进行Tricine—SDS—PAGE和Western-blot分析。结果表明：重组多肽TB60的分子质量约为8．0ku，其在上清液中的表达量为70mg／L。此多肽能诱导机体产生特异性的体液免疫应答，有良好的免疫原性。

副溶血性弧菌拮抗菌的筛选鉴定及抑菌物质特性研究

为获取既可抑制食源性致病菌又可抑制水产致病菌的益生菌株,以人畜共患致病菌副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus ATCC17802)为指示菌,采用点种法初筛以及打孔扩散法复筛,得到1株来源于上海东海海水的H19菌株,其抑菌物抑菌圈直径达(17.16±0.28)mm。通过形态观察及16SrDNA序列分析可知,菌株H19为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis H19,GenBank登录号:MG383451)。将菌株H19进行抑菌谱试验,探究菌株H19抑菌物的理化性质,并且抑菌物通过硫酸铵沉淀及不同孔径透析袋截留粗提,粗提物经蛋白酶处理及Tricine-SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳可知,该抑菌物具有广谱抑菌活性,既可抑制革兰氏阳性菌又可抑制大部分革兰氏阴性菌,且具有较好的热、pH以及紫外线稳定性,该抑菌物可能为2种新型抗菌肽,分子量分别在6.5~9.5kDa以及27.0~35.0kDa。由此可见,枯草芽孢杆菌H19所产抗菌肽具有防治食源性疾病以及水产疾病的应用潜力。

从菊科植物中分离出的新型非肽类速激肽NK_1受体阻滞剂

为了寻找天然的新型速激肽NK_1受体阻滞剂,检测了约200种植物提取物的速激肽阻滞活性,从菊科植物提取物中获得了1个有效的速激肽NK_1受体阻滞剂。 菊科植物母菊(Matricaria chamomilla)的干燥花头(400g)在室温下用甲醇提取,过滤,甲醇提取液挥干,得到残余物(78.8g)。取少量残余物(20mg)经ODS柱色谱分离,获得的各部分干燥,

新型复合抗菌肽在肉鸡生产中的应用试验

抗菌肽是生物体内存在的一种具有抗菌活性的小分子多肽,对G+菌、G-菌、霉菌、螺旋体、病毒、癌细胞和寄生虫等均具有很强的杀伤活性,而且还可以作为饲料添加剂。目前,已被广泛应用于医药、畜牧、农业、食品和化妆品等各个领域。本次实验针对中国科学院动物研究所研制的新型复合抗菌肽在肉鸡生产中的抗菌效果及生产性能影响进行研究。结果表明:抗菌肽在肉鸡生产过程中提高了料肉比,增加出栏时的体质量,具有一定的抗菌效果,提高机体的抵抗力,降低死亡率,提高经济效益。

新抗菌肽RGD-嵌合体靶向抗黑色素瘤活性

目的研究新抗菌肽RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)嵌合体的靶向抗肿瘤活性。方法采用MTT法和流式细胞术筛选抗肿瘤活性强的抗肿瘤肽和细胞表面整合素αvβ3表达量高的肿瘤细胞,建立BALB/c裸鼠(B16)皮下肿瘤模型。将裸鼠随机分为T-La(FS)、RGD-T-La(FS)、T-La和RGD-T-La组,尾静脉注射对应药物(600μg/m L),100μL/只,并设阳性对照组(1 mg/mL顺铂溶液)和空白对照组(PBS)。检测抗肿瘤肽对黑色素瘤B16细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。结果 RGD-T-La(FS)对B16细胞的敏感性最强,10μg/mL浓度时,细胞存活率为25. 12%;50μg/m L浓度时,T-La(FS)和RGDT-La(FS)作用的B16细胞存活率较低,分别为6. 61%和24. 65%。B16细胞表面整合素αvβ3表达量最高,PE-A荧光强度为868,其次为H460、HepG2和3T3细胞,PE-A荧光强度分别为840、446和265。T-La(FS)和RGD-T-La(FS)对VEGF的表达具有抑制作用,对Caspase-3的表达具有诱导作用,协同诱导黑色素瘤细胞的凋亡。结论为小分子抗菌肽作为靶向抗肿瘤肽的应用提供了科学依据,为临床上抗肿瘤药物的开发及应用奠定了理论基础。

抗革兰阴性菌新靶标:脂多糖转运蛋白LptDE及其抑制剂研究进展

富含脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的外膜是绝大多数革兰阴性(Gram-negative,G-)菌生存必需的生物学屏障。LPS转运蛋白(lipopolysaccharide transport protein,Lpt)复合体LptDE负责LPS转运和外膜组装的最后关键一步,在G-菌中普遍存在且结构-功能较为保守,哺乳动物细胞中缺乏同源蛋白,是颇具开发前景的抗菌新靶标。近10年,LptDE蛋白三维结构的破译为基于此类“非酶”蛋白靶标的药物发现奠定了基础,首个作用于LptD的拟肽类化合物murepavadin开启了一类新作用机制的抗菌药物研究。本文将总结LptDE的分子特征、结构-功能,梳理murepavadin等新型拟肽类抗菌药物的研究进展,以期为相关研究提供参考。