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六株鹅源新城疫病毒全基因序列分析及对雏鹅的致病性
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作者 张丹琳 王超 +2 位作者 朱婉君 张济培 陈济铛 《广东畜牧兽医科技》 2024年第5期61-69,共9页
为了解广东地区鹅源新城疫病毒(NDV)遗传进化及致病性情况,于2019年从广东肇庆、佛山地区疑似NDV感染鹅的组织病料中进行鹅源NDV分离鉴定并选取一株MDT最小的毒株进行病毒对雏鹅的致病性试验。结果显示:共分离6株Ⅻb亚型鹅源NDV毒株,6... 为了解广东地区鹅源新城疫病毒(NDV)遗传进化及致病性情况,于2019年从广东肇庆、佛山地区疑似NDV感染鹅的组织病料中进行鹅源NDV分离鉴定并选取一株MDT最小的毒株进行病毒对雏鹅的致病性试验。结果显示:共分离6株Ⅻb亚型鹅源NDV毒株,6株毒株间核苷酸和氨基酸相似性最高,但与基因Ⅶ型、La Sota等常用疫苗株相似性较低。F蛋白和HN蛋白部分功能位点氨基酸残基出现不同程度的变异。致病性试验结果表明基因Ⅻb亚型Goose/GD/F424/2019毒株对雏鹅有较强的致病性,死亡率高达87.5%,并出现脾脏肿大,呈“树枝状”样充血、腺胃乳头出血、十二指肠黏膜出血、胰脏变性出血、脑组织充血及水肿等典型病理变化症状。研究表明:从广东地区分离的6株鹅源NDV均是Ⅻb亚型且对雏鹅有较强的致病性,为进一步研究广东地区鹅源NDV流行、进化及相关疾病的防控奠定基础。 展开更多
关键词 鹅源新城疫病毒 基因Ⅻb亚型 遗传进化分析 致病性试验
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6株鸽源新城疫病毒广东分离株F、HN基因的克隆及遗传进化分析 被引量:1
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作者 云骜 张思远 +2 位作者 成子强 林举攀 杨家兴 《中国家禽》 北大核心 2024年第2期106-112,共7页
为研究广东省鸽源新城疫病毒(NDV)的遗传进化规律,试验于2021—2022年从广东6家疑似感染NDV的鸽场采集病鸽临床样品,进行RT-PCR诊断、病毒分离鉴定和动物回归试验,并对分离毒株进行生物学毒力测定以及F基因、HN基因的同源性和遗传进化... 为研究广东省鸽源新城疫病毒(NDV)的遗传进化规律,试验于2021—2022年从广东6家疑似感染NDV的鸽场采集病鸽临床样品,进行RT-PCR诊断、病毒分离鉴定和动物回归试验,并对分离毒株进行生物学毒力测定以及F基因、HN基因的同源性和遗传进化分析。结果显示:共分离到6株鸽源NDV,对幼鸽进行分组攻毒14 d后,发病率均为100%,死亡率为60%~80%;6株毒株的F蛋白裂解位点氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117/112R-R-R-K-R-F117,具有NDV强毒株的典型分子特征,和分离毒株ICPI的测定结果共同表明6株毒株均为强毒株;6株毒株均为NDV的ClassⅡ基因Ⅵ.2.1.1.2.2型;与传统疫苗株La Sota的同源性较低,且F、HN蛋白氨基酸出现多处位点变异。研究表明,广东省鸽源NDV流行以Class Ⅱ基因Ⅵ.2.1.1.2.2型为主,常用的疫苗株La Sota可能对广东地区流行的鸽源NDV保护效果不佳。 展开更多
关键词 鸽源新城疫病毒 F基因 HN基因 遗传进化分析
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4株不同基因型新城疫病毒毒力测定及与商品疫苗株抗原性比较
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作者 黄青红 华俊 +6 位作者 谢丽基 谢芝勋 曾婷婷 李孟 罗思思 李丹 谢志勤 《动物医学进展》 北大核心 2024年第2期16-21,共6页
为了探究不同基因型和不同来源4株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)及现有商品疫苗株的抗原性差异,测定4株新城疫病毒的鸡胚最小致死量的平均死亡时间(mean death time,MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(intracerebral pathogen... 为了探究不同基因型和不同来源4株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)及现有商品疫苗株的抗原性差异,测定4株新城疫病毒的鸡胚最小致死量的平均死亡时间(mean death time,MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(intracerebral pathogenicity index,ICPI),分别制备油乳苗,再与商品疫苗NDV La Sota株、A-Ⅶ株分别接种SPF鸡,收集单因子血清进行HI交叉试验和细胞交叉中和试验。结果显示,基因Ⅵ型NDV B27为中等毒力毒株,基因Ⅶ型NDV B9、基因Ⅸ型NDV B14、基因Ⅻ型NDV GX01为强毒株;HI交叉试验结果显示,基因Ⅵ型NDV B27和基因Ⅸ型NDV B14抗原同源性为0.64,抗原性差异微小,其他毒株之间的抗原同源性为0.69~0.99,抗原差异不大;细胞交叉中和试验结果显示,基因Ⅵ型NDV B27和基因Ⅸ型NDV B14抗原同源性为0.42,基因Ⅵ型NDV B27和基因Ⅱ型疫苗株La Sota抗原同源性为0.47,抗原差异较大,其余毒株及疫苗株La Sota之间抗原差异微小。试验结果可为后续筛选NDV疫苗候选株提供参考。 展开更多
关键词 新城疫病毒 基因 抗原性 致病指数
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人癌胚抗原与新城疫病毒HN基因共表达载体的构建及表达 被引量:2
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作者 魏林 戴建新 孙树汉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期641-644,共4页
The eukaryotic expression plasmid (pcDNA3 CEA)containing with the gene coding for the Carcinoembryonic antigen(CEA) had been gotten with RT PCR and gene recombination techniques.Using enzymolysis,ligation and other te... The eukaryotic expression plasmid (pcDNA3 CEA)containing with the gene coding for the Carcinoembryonic antigen(CEA) had been gotten with RT PCR and gene recombination techniques.Using enzymolysis,ligation and other techniques,an eukaryotic coexpression plasmid(pcDNA3 CEA/HN)containing two expression unites of CEA and Newcastle disease virus HN gene that may have the function of immunoenhancement had been constructed.The plasmid will lay a foundation for further researching CEA nucleiotide vaccine,adjuvant and their effect of special antitumor immune. 展开更多
关键词 癌胚抗原 新城疫病毒hn-基因 共表达质粒 疫苗
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新城疫病毒HN和F基因遗传变异相关性的研究 被引量:39
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作者 秦卓明 马保臣 +4 位作者 何叶峰 王友令 崔治中 徐怀英 袁小远 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期227-232,共6页
选取国内1999-2005年发生的NDV毒株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,对其融合蛋白(F)和血凝素.神经氨酸酶(HN)基因分别进行克隆测序,结合在GenBank中发表的具有F和HN基因的NDV序列,利用DNAStar软件,对其不同毒株的F或HN基因片段... 选取国内1999-2005年发生的NDV毒株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,对其融合蛋白(F)和血凝素.神经氨酸酶(HN)基因分别进行克隆测序,结合在GenBank中发表的具有F和HN基因的NDV序列,利用DNAStar软件,对其不同毒株的F或HN基因片段和全长、F和HN基因全长分别进行遗传变异的研究,利用统计学软件SPSS8.0进行同源性相关分析。结果表明:不同NDV毒株F或HN基因片段与其全长之间,核甘酸r≥0.973,氨基酸:0.911≤r≤0.968,遗传变异高度相关,但F与HN基因全长之间核甘酸的遗传变异呈现弱相关(r=0.312)。国内NDV野毒株之间HN核甘酸高度同源(同源率97%以上),而与LaSota同源率仅为79.2%-80.7%,且显示出明显的地域性。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 HN基因 同源性 遗传变异 相关性
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鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组的序列测定 被引量:25
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作者 黄勇 万洪全 +2 位作者 刘红旗 吴艳涛 刘秀梵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期348-354,共7页
依据GenBank上公布的新城疫病毒(NDV)的基因序列,自行设计了9对引物,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获取覆盖NDV鹅源毒株ZJ1株全基因组的部分重叠片段。病毒RNA的5′及3′端的序列由cDNA末端快速扩增技术(RACE)获取。整个病毒基因组... 依据GenBank上公布的新城疫病毒(NDV)的基因序列,自行设计了9对引物,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获取覆盖NDV鹅源毒株ZJ1株全基因组的部分重叠片段。病毒RNA的5′及3′端的序列由cDNA末端快速扩增技术(RACE)获取。整个病毒基因组序列由15192个碱基组成,比GenBank上公布的其它4个NDV毒株BeaudetteC、B1、Lasota及Clone-30的全基因组序列长6个核苷酸。这6个核苷酸位于核衣壳蛋白(NP)基因内,相对于NDV毒株Lasota株全基因序列的1647nt~1648nt位。其它10个NDV毒株中的9个毒株也被验证具有此特征,且它们分属于3个不同的基因型。 展开更多
关键词 新城疫病毒 基因 鹅源 序列测定
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新城疫病毒F_(48)E_9株M NP F和HN基因的真核表达 被引量:11
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作者 闻晓波 闫丽辉 +3 位作者 曹殿军 刘培欣 刘春国 步志高 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期429-433,共5页
将新城疫病毒(NDV)F48E9株的M、NP、F和HN基因克隆到真核细胞表达载体 pCAGG上,经酶切、PCR鉴定和序列分析,分别筛选出了含有M、NP、F和HN基因的重组质粒, 命名为pCAGG-M、pCAGG-NP、pCAGG-F和pCAGG-HN。纯化后的重组质粒通过脂质体单... 将新城疫病毒(NDV)F48E9株的M、NP、F和HN基因克隆到真核细胞表达载体 pCAGG上,经酶切、PCR鉴定和序列分析,分别筛选出了含有M、NP、F和HN基因的重组质粒, 命名为pCAGG-M、pCAGG-NP、pCAGG-F和pCAGG-HN。纯化后的重组质粒通过脂质体单独转染HeLa细胞,经间接免疫荧光试验检测到了M、NP、F和HN蛋白的表达。pCAGG-M、 pCAGG-NP、pCAGG-F和pCAGG-HN重组质粒组合共转染HeLa细胞48 h后,可以观察到明显的细胞融合现象。试验结果表明,NDV F48E9株的M、NP、F和HN蛋白均在HeLa细胞内得到了成功表达,同时证明在该表达系统中F蛋白不足以诱导细胞融合。 展开更多
关键词 新城疫病毒 M基因 NP基因 F基因 HN基因 真核细胞表达 病毒样颗粒
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鸡IL-2在新城疫病毒F基因疫苗免疫中的作用 被引量:16
8
作者 姜永厚 刘忠贵 +2 位作者 陈奖励 宋秀龙 童光志 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期22-24,共3页
利用国内首次克隆成功的鸡 IL- 2基因真核表达质粒与新城疫病毒 (NDV) D2 6株 F基因真核质粒 (F基因疫苗 )联合免疫 SPF雏鸡 ,观察了其诱导的免疫应答及免疫保护作用 ,以及不同免疫方式对其免疫作用的影响。结果证实了国内克隆鸡 IL- 2... 利用国内首次克隆成功的鸡 IL- 2基因真核表达质粒与新城疫病毒 (NDV) D2 6株 F基因真核质粒 (F基因疫苗 )联合免疫 SPF雏鸡 ,观察了其诱导的免疫应答及免疫保护作用 ,以及不同免疫方式对其免疫作用的影响。结果证实了国内克隆鸡 IL- 2基因的免疫增强作用 ,以及作为免疫佐剂应用于禽类基因免疫的可行性 ,为鸡 IL- 2这一新型佐剂的实际应用提供了重要的试验依据。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 鸡IL-2 佐剂 基因疫苗 免疫
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一株基因Ⅶ型新城疫病毒的分离及分子鉴定 被引量:15
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作者 刘华雷 王永坤 +3 位作者 朱国强 严维巍 田慧芳 周继宏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期216-218,共3页
从一起新城疫暴发的病例中分离出 1株新城疫病毒 (NDV) ,命名为铜山分离株 (TS)。运用 RT- PCR技术 ,克隆了该分离株 F基因的重要功能片段 (约 0 .5 kb) ,并进行了序列测定。序列分析表明 ,TS分离株在 F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为 1 1 ... 从一起新城疫暴发的病例中分离出 1株新城疫病毒 (NDV) ,命名为铜山分离株 (TS)。运用 RT- PCR技术 ,克隆了该分离株 F基因的重要功能片段 (约 0 .5 kb) ,并进行了序列测定。序列分析表明 ,TS分离株在 F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为 1 1 2 - R- R- Q- K- R- F1 1 7,与 NDV强毒株特征相符 ,且具有 10 1处的 K(赖氨酸 )和 12 1处 V(缬氨酸 ) 2个特征性氨基酸 ,与基因 型 展开更多
关键词 新城疫病毒 RT-PCR Ⅶ型基因 病毒分离 分子鉴定
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新城疫病毒(长春株)F蛋白基因的克隆和序列分析 被引量:24
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作者 王兴龙 金宁一 +6 位作者 丁壮 金扩世 罗坤 郭志儒 王宏伟 欧阳红生 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期109-113,共5页
新城疫病毒(NDV)长春株在鸡胚增殖后纯化,提取RNA,然后利用特异性引物,经RT-PCR一次性扩增出了NDV长春株的全长F基因。将该F基因插入pKS(-)后,进行了序列测定。序列分析表明,该F基因核苷酸长度为175... 新城疫病毒(NDV)长春株在鸡胚增殖后纯化,提取RNA,然后利用特异性引物,经RT-PCR一次性扩增出了NDV长春株的全长F基因。将该F基因插入pKS(-)后,进行了序列测定。序列分析表明,该F基因核苷酸长度为1758bp,编码553个氨基酸,序列中有6个糖基化位点,13个半胱氨酸残基,裂解位点区(112~117)氨基酸序列为Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu,与所有弱毒株在这一区域的序列(Gly-Arg/Lys-Gln-Gly/Ser-Arg-Leu)相符,证明长春株为弱毒株。同源性分析表明,长春株F基因与目前国外发表的其他NDVF基因相比,核苷酸序列同源性在88%~99%之间。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F蛋白基因 RT-PCR 序列分析
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新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因对裸鼠荷HCT肿瘤的治疗 被引量:11
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作者 连海 金宁一 +5 位作者 米志强 薛丽娟 李华 解丽华 金洪涛 李萍 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第2期88-92,共5页
目的 :寻求有效的肿瘤基因治疗方法 ,研究新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因在无胸腺裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法 :建立BALB/c裸小鼠荷人结肠癌模型 ,瘤内注射脂质体包裹的真核重组子 pVHN和pVVP3。观测 pVHN和pVVP3治疗荷HCT裸鼠的... 目的 :寻求有效的肿瘤基因治疗方法 ,研究新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因在无胸腺裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法 :建立BALB/c裸小鼠荷人结肠癌模型 ,瘤内注射脂质体包裹的真核重组子 pVHN和pVVP3。观测 pVHN和pVVP3治疗荷HCT裸鼠的效果 ,免疫组化法检测肿瘤细胞Bcl 2和PCNA的表达。结果 :经HN基因和VP3基因联合治疗组的小鼠与荷瘤对照组小鼠相比 ,肿瘤体积明显缩小 ,抑瘤率可达 70 %。病理组织切片表明 ,治疗组裸鼠体内肿瘤细胞大量凋亡 ,局部地方可见细胞消失。免疫组化表明 ,Bcl 2和PCNA蛋白在荷HCT裸鼠对照组与各治疗组均有表达 ,其中Bcl 2表达在荷瘤对照组与pVHN治疗组差异有显著意义 (P <0 .0 5 ) ,PCNA表达在荷瘤对照组与 pVHN +pVVP3治疗组差异极其显著 (P <0 .0 1)。结论 :NDVHN基因与凋亡素VP3基因对裸鼠荷HCT肿瘤细胞的增殖有一定抑制作用 ,可诱导其凋亡 ,其凋亡可能与下调Bcl 2表达有关。 展开更多
关键词 新城疫病毒HN基因 鸡贫血病毒 VP3基因 裸鼠 荷HCT肿瘤 治疗
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4株鹅源新城疫病毒融合蛋白基因的克隆及序列分析 被引量:13
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作者 万洪全 吴艳涛 +1 位作者 刘秀梵 张如宽 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期208-213,共6页
测定了 4株鹅源新城疫病毒 (NDV)融合蛋白 (F)基因 5’端 1 70 0核苷酸片段的序列 ,并由此推导了F蛋白氨基酸序列 ,并对鹅源NDV的基因型分类地位进行探讨。结果表明 ,4株病毒F基因的同源性大于 97% ,与DNV标准强毒株F48E8F基因的同源性... 测定了 4株鹅源新城疫病毒 (NDV)融合蛋白 (F)基因 5’端 1 70 0核苷酸片段的序列 ,并由此推导了F蛋白氨基酸序列 ,并对鹅源NDV的基因型分类地位进行探讨。结果表明 ,4株病毒F基因的同源性大于 97% ,与DNV标准强毒株F48E8F基因的同源性为 86 0 %~86 8% ,F基因转录起始序列及起始密码子位置与已知NDV完全相同 ;F蛋白具有和已知NDV相似的各种功能区 ,F蛋白前体F0裂解位点附近的氨基酸序列为112 RRQKRF117,符合NDV强毒株的特征。对F基因第 3 3 4~ 1 6 82位核苷酸之间 3种限制性内切酶HinfⅠ、BstoⅠ、RsaⅠ酶切图谱的分析表明 。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 序列分析 基因 基因克隆
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10株新城疫病毒分离F基因的克隆及遗传变异分析 被引量:22
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作者 田夫林 陈静 +2 位作者 马惠玲 李运兰 徐延友 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期28-31,共4页
对10株具有一定代表性的NDV分离株的F基因进行RT_PCR扩增和序列测定,核苷酸序列及其推导的氨基酸序列比较结果表明:F基因核苷酸序列的同源性为93.6%,推导氨基酸序列同源性为95.39%;根据F基因裂解位点的氨基酸序列推测,其中2株属于弱毒... 对10株具有一定代表性的NDV分离株的F基因进行RT_PCR扩增和序列测定,核苷酸序列及其推导的氨基酸序列比较结果表明:F基因核苷酸序列的同源性为93.6%,推导氨基酸序列同源性为95.39%;根据F基因裂解位点的氨基酸序列推测,其中2株属于弱毒株,8株属于强毒株,该结果与致病性试验测定的结果完全相符;不同年代、不同宿主分离株的F基因序列一致,高度保守。通过BLASTSEARCH比较,8株强毒株与广东鹅分离株GDGO(Y97)高度同源,处于进化树的同一分支。2株弱毒分离株与LaSota疫苗株仅有1~4个氨基酸改变,推测可能是免疫或散播LaSota疫苗株。抗原性指数分析表明HI分离株有三处明显变异,抗原位点推测分析表明H分离株比F48株和LaSota多出6个抗原位点,而Liu株抗原位点在446位后缺失。 展开更多
关键词 新城疫病毒 流行病学 抗原变异 F基因 基因克隆 遗传变异
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鸡新城疫病毒HN基因在重组鸡痘病毒中的表达及其保护性的研究 被引量:14
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作者 曹殿军 刘惠莉 +3 位作者 王莉林 闵平 张莹 卢景良 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期61-64,共4页
利用重组表达质粒HN-PEFL-29与鸡痘病毒FP9共转染鸡胚成纤维细胞,经蚀斑筛选,结合Southern杂交,获得含有外源HN基因的纯化重组病毒。将筛选到的重组病毒经4次传代,细胞可见明显病变。免疫荧光检测结合We... 利用重组表达质粒HN-PEFL-29与鸡痘病毒FP9共转染鸡胚成纤维细胞,经蚀斑筛选,结合Southern杂交,获得含有外源HN基因的纯化重组病毒。将筛选到的重组病毒经4次传代,细胞可见明显病变。免疫荧光检测结合Western印迹表明该重组子表达产物主要位于细胞膜上,以糖基化(74kD)和非糖基化(68kD)2种形式存在,表达产物具有类似于天然NDVHN蛋白的红细胞吸附活性及神经氨酸酶活性,且这2种活性均可被NDVHN特异性单抗所抑制。对该表达产物的免疫活性研究表明:用重组病毒免疫4周龄SPF鸡的ELISA抗体水平和血凝抑制效价均高于FPV接种组,但低于LaSota弱毒活疫苗接种组。以NDV强毒株F48E9攻毒发现:接种重组病毒106pfu/只时,保护力可达80%,而104pfu/只时,保护率仅为60%,这表明该重组病毒对雏鸡具有一定的保护作用,且该保护作用与接种剂量有一定的相关性。 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN基因 重组禽痘病毒
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新城疫病毒HN基因的遗传变异与HI相关性的研究 被引量:15
15
作者 秦卓明 王友令 +4 位作者 马保臣 欧阳文军 贾强 袁小远 崔治中 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期379-384,共6页
选取国内1999~2004年分离的新城疫野毒10株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,对其血凝素-神经氨酸酶(HN)基因分别进行克隆和测序,结合在GenBank中发表的LaSota、F48E9和Clone30等参考序列,对其氨基酸序列进行遗传变异分析,绘制系统... 选取国内1999~2004年分离的新城疫野毒10株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,对其血凝素-神经氨酸酶(HN)基因分别进行克隆和测序,结合在GenBank中发表的LaSota、F48E9和Clone30等参考序列,对其氨基酸序列进行遗传变异分析,绘制系统发育树。利用SPF鸡在隔离器中分别制备上述NDV毒株的单因子阳性血清,进行血凝抑制(HI)交叉试验,计算NDV不同株之间的HI相关系数(r)。利用统计学软件SPSS8.0对NDV不同株之间的HN氨基酸同源率和HI相关系数(r)进行相关比较。结果表明:NDV野毒间氨基酸高度同源,同源性为96.5%~99.8%,而与LaSota、F48E9和Clone30同源率仅为87.4%~89.9%;所有野毒均缺乏1个潜在的糖基化位点;HN基因的氨基酸同源性与HI相关系数显著相关(P〈0.01,r=0.55)。 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN基因 氨基酸同源性 HI 相关性
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新城疫病毒F基因在新型杆状病毒表达系统中的表达及重组病毒的免疫原性 被引量:11
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作者 王兴龙 金宁一 +5 位作者 丁壮 金扩世 米志强 王宏伟 郭志儒 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期533-535,共3页
将新城疫病毒 (四平株 ) F基因插入到 p Fast Bac 质粒中 ,构建了重组质粒 p FF。 p FF转化大肠杆菌 DH10 Bac后 ,F基因在助手质粒 (helper plasmid)提供转座酶的情况下 ,通过转座进入 Bacmid,构建了重组 Bacmid(re- Bacmid)。在含有 X-... 将新城疫病毒 (四平株 ) F基因插入到 p Fast Bac 质粒中 ,构建了重组质粒 p FF。 p FF转化大肠杆菌 DH10 Bac后 ,F基因在助手质粒 (helper plasmid)提供转座酶的情况下 ,通过转座进入 Bacmid,构建了重组 Bacmid(re- Bacmid)。在含有 X- gal/ IPTG、庆大霉素、卡那霉素和四环素的琼脂平板上 ,筛选白色菌落后 ,提取 re- Bacm id转染 Sf- 9昆虫细胞。在昆虫细胞内 ,re- Bacm id经复制、表达、装配 ,形成重组杆状病毒 ,并表达 F蛋白。经 SDS- PAGE和 Western- blot分析 ,表达的 F蛋白的分子大小为 6 30 0 0 ,并证明在昆虫细胞内表达的蛋白能部分糖基化。表达的 F蛋白约占细胞总蛋白的 10 %。动物试验证明 。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 杆状病毒 重组病毒 免疫原性
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鹅源新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因的序列分析 被引量:14
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作者 万洪全 吴艳涛 +3 位作者 刘秀梵 彭大新 刘文博 张如宽 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期176-178,共3页
Six isolates of Newcastle disease virus were derived from south and east China regions during the disease outbreaks called "avian paramyxovirus infection of geese" or "geese paramyxovirus infection"... Six isolates of Newcastle disease virus were derived from south and east China regions during the disease outbreaks called "avian paramyxovirus infection of geese" or "geese paramyxovirus infection",and partial sequence analysis of hemagglutinin-neuraminidase(HN) gene was carried out to identify the genetic characteristics of these goose isolatesA 1905 nucleotide portion of HN gene of each of the 6 isolates was sequenced,the results revealed that the coding region of their HN genes are all 1716 nucleotides in length,which can encode 571 amino acid residues aloneThe coding region is followed by a noncoding sequence of 189 nucleotidesThough they diverged only 08%-37% from each other in the nucleotide sequences of coding region,they differed by 175%-179% to F48E8, a standard challenge strain of chicken originCysteine residues are well conserved throughout the amino acid sequences,while the number of the potential glycosylation sites varys from 4 to 6Residue positions Thr 48,His 54,Ser 77,Ala 266,His 340 and Lys 384 are also highly conserved in the 6 goose isolatesThe corresponding residues in other NDV strains are commonly Met 48,Ser 54,Asn 77,Ile 266,Tyr 340 and Glu 384However,the sequences of receptor-binding related regions show no difference to the 14 reference strains from domestic or 展开更多
关键词 鹅源新城疫病毒 血凝素 神经氨酸酶基因 序列分析
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鸡新城疫病毒La Sota株F基因克隆及原核表达 被引量:12
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作者 符芳 姜北宇 +2 位作者 张莉 高轩 张飚 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2006年第3期117-120,共4页
参照NDVLa Sota株核酸序列(AF077761)设计1对引物,利用RT-PCR扩增F基因并得到了长为1 700 bp的片段,将其克隆到pGEM-T easy vector中,经酶切鉴定和测序后克隆进原核表达载体pET-32a,将重组表达质粒转化BL21(DE3),在IPTG诱导下表达约83 k... 参照NDVLa Sota株核酸序列(AF077761)设计1对引物,利用RT-PCR扩增F基因并得到了长为1 700 bp的片段,将其克隆到pGEM-T easy vector中,经酶切鉴定和测序后克隆进原核表达载体pET-32a,将重组表达质粒转化BL21(DE3),在IPTG诱导下表达约83 kd的融合蛋白,SDS-PAGE电泳和Western blotting检测证实该基因片段获得高效表达且表达产物具有免疫学活性。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 克隆 原核表达
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不同基因型新城疫病毒株对鹅的致病性 被引量:8
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作者 陈立功 万洪全 +4 位作者 宋红芹 吴力力 王宝安 盛祖勋 王小波 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期131-134,共4页
用不同基因型(Ⅳ、Ⅵb、Ⅵg、Ⅶd(鸡源)、Ⅶd(鹅源)、Ⅶ、Ⅸ)新城疫病毒(NDV)强毒株分别人工感染23日龄隆昌鹅,观察了其对鹅的致病性.结果:各株病毒均可使接种鹅感染、发病,发病率为10%~100%,死亡率分别为0%、20%、30%、70%、50%、40%... 用不同基因型(Ⅳ、Ⅵb、Ⅵg、Ⅶd(鸡源)、Ⅶd(鹅源)、Ⅶ、Ⅸ)新城疫病毒(NDV)强毒株分别人工感染23日龄隆昌鹅,观察了其对鹅的致病性.结果:各株病毒均可使接种鹅感染、发病,发病率为10%~100%,死亡率分别为0%、20%、30%、70%、50%、40%、50%.接种Ⅵg、Ⅶd、Ⅶ和Ⅸ型NDV强毒株可使鹅严重发病、死亡,症状和病变都与Ⅶd亚型鹅源毒株感染鹅相似,接种Ⅳ型(Herts/33)及Ⅵb亚型(PB9601)毒株的鹅轻微发病.免疫组化检测发现,攻毒鹅多种组织器官中都能检测到病毒抗原.在能检测到病毒抗原的器官中,病毒抗原主要定位于淋巴细胞、网状细胞、巨噬细胞、肝细胞及各种上皮细胞的胞浆内;与Ⅵg、Ⅶd、Ⅶ和Ⅸ型NDV感染鹩组织相比,Herts/33、PB9601感染鹅大部分组织内的阳性染色较弱.本试验结果表明,不同基因型NDV强毒株对鹅的致病性存在明显差异. 展开更多
关键词 新城疫病毒 基因 致病性 新城疫 症状 病理变化 组织嗜性
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新城疫病毒F_(48)E_8株融合蛋白基因序列分析 被引量:21
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作者 吴艳涛 刘秀梵 张如宽 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期143-146,共4页
本研究报道了新城疫病毒(NDV)中国标准强毒株F48E8融合蛋白(F)基因的序列。该基因核苷酸序列长度为1700bp,编码由553个氨基酸组成的F0多肽。F0酶切激活部位序列为RRQRR↓F,具有NDV强毒的特征。F... 本研究报道了新城疫病毒(NDV)中国标准强毒株F48E8融合蛋白(F)基因的序列。该基因核苷酸序列长度为1700bp,编码由553个氨基酸组成的F0多肽。F0酶切激活部位序列为RRQRR↓F,具有NDV强毒的特征。F0中有3个主要由疏水性氨基酸组成的区域和6个可糖基化位点。经比较,NDVF48E8株和Miyadera株、TexasGB株的氨基酸同源性分别为9364%和9241%。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 序列分析
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