CpG ODN对鸡新城疫LaSota活疫苗的免疫增强效应

将3种不同的未甲基化CpG ODN分别与新城疫LaSota活疫苗混合后,经滴鼻和点眼免疫鸡,通过检测鸡血清中HI抗体、外周血T淋巴细胞增殖活性、诱导巨噬细胞分泌NO含量,以及刺激外周血淋巴细胞表达IFN-γ、IL-6与IL-1βmRNA量,分析各CpG ODN对新城疫LaSota活疫苗免疫效果的影响。结果表明,经2次免疫后,含GTCGTT核心基序的CpG ODN1组,鸡血清平均HI抗体效价最高达8.2log2、淋巴细胞刺激指数达9.836、NO分泌量达35.833μmol/L,分别比疫苗单独免疫组高出2个滴度(P<0.05)、4.4(P<0.01)、27.6μmol/L(P<0.01);含GACGTT核心基序的CpG ODN2组增强作用不明显,与疫苗单独免疫组无差异;而CpG ODN3的免疫刺激活性由于受其侧翼序列的影响,作用明显减弱甚至丧失。对细胞因子的影响,CpG ODN3组IFN-γmRNA表达量稍高于CpG ODN1组,而其余细胞因子均以CpG ODN1组表达水平最高(P<0.05)。由此证明CpG ODN1能显著增强鸡对新城疫LaSota活疫苗的体液和细胞免疫反应,可以作为高效的免疫增强剂。

新城疫LaSota活疫苗对基因Ⅶ型分离株的免疫保护性试验

从山东省发病鸡群分离鉴定了一株新城疫病毒(NDV),命名为SDLY01。经蚀斑纯化后进行毒力测定和序列分析表明分离株SDLY01属于基因Ⅶ型NDV强毒。20只7日龄SPF鸡免疫新城疫活疫苗LaSot a后14 d分别用NDV标准强毒F48E8和分离株SDLY01攻毒,同时设同日龄SPF鸡为对照组,未免疫任何疫苗。攻毒后观察10 d,免疫组在攻毒后食欲、精神均正常;对照组在攻毒后2～4d发病死亡,并表现ND典型的临床症状和病理变化。攻毒后第3、5、7、9 d对免疫组试验鸡取喉头、泄殖腔棉拭进行病毒分离,F48E8攻毒组病毒分离均为NDV阴性,SDLYO1攻毒组第5 d病毒分离NDV阳性,第3、7和9d病毒分离阴性。本研究结果表明LaSot a活疫苗对F48E8和SDLY01均能提供100%免疫保护,但不能完全抑制基因Ⅶ NDV分离株在体内的复制和排毒。

新城疫LaSota活疫苗对基因Ⅶ型分离株的免疫保护性试验

从山东省发病鸡群分离鉴定了一株新城疫病毒（NDV），命名为SDLYOI。经蚀斑纯化后进行毒力测定和序列分析表明分离株SDLY01属于基因Ⅶ型NDV强毒。20只7日龄SPF鸡免疫新城疫活疫苗LaSota后14d{ff别用NDV标准强毒F48E8和分离株SDLYOI攻毒，同时设同日龄SPF鸡为对照组，未免疫任何疫苗。

基于悬浮细胞制备的鸡新城疫-H9亚型禽流感二联灭活疫苗(La Sota株+BX13株)安全性和免疫产生期研究

为探讨悬浮细胞制备的鸡新城疫-H9亚型禽流感二联灭活疫苗(La Sota株+BX13株)(以下简称二联灭活疫苗)的安全性和免疫产生期,试验用新城疫病毒(NDV)La Sota株和H9亚型禽流感病毒(AIV)BX13株分别接种BHK-21和MDCK悬浮细胞,收获抗原液,制备二联灭活疫苗;采用1 mL/只的剂量接种21日龄SPF鸡进行二联灭活疫苗的安全性试验;以0.02、0.05、0.1、0.3、0.5 mL/只的剂量接种21日龄SPF鸡,免疫后7、14、21 d采血测定NDV HI和AIVHI抗体,并于免疫后21日龄攻毒进行免疫保护试验和免疫产生期试验。结果显示:二联灭活疫苗对SPF鸡安全,鸡只无不良反应,疫苗吸收良好;各剂量组免疫后抗体水平均逐渐升高,免疫后21 d NDV HI效价为6.1~8.5 log2,AIV HI效价为7.5~11.2 log2;免疫后21 d,0.02 mL/只剂量组对两种毒株的攻毒保护率均为9/10,其余剂量组均为10/10保护。研究表明,二联灭活疫苗对SPF鸡安全,以0.1 mL/只的剂量免疫SPF鸡21 d可获得对NDV和H9 AIV的有效抵抗。

黄芪多糖对新城疫活疫苗免疫增强的作用

黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)具有免疫调节作用,在中医上应用十分广泛。为了验证APS对家禽疫苗的免疫增强作用,在新城疫(Newcastle Disease,ND)活疫苗稀释液中添加APS,以滴鼻点眼的方式免疫雏鸡,通过血清抗体检测和强毒攻击保护试验来评价APS对疫苗的免疫增强作用。结果表明,以104.0EID50抗原含量免疫雏鸡,免疫后14 d,添加APS组血清抗体HI效价显著高于未添加组,且攻毒保护率达到100%,证明了黄芪多糖对新城疫活疫苗的免疫作用显著增强。

鸽新城疫rGX-mF株灭活疫苗的制备及免疫原性分析

为有效控制临床中鸽新城疫的发生,选取基因Ⅵ型鸽新城疫病毒弱毒株rGX-mF作为疫苗候选株,评价其生物学特性,并将rGX-mF灭活后制备成油佐剂灭活疫苗,接种雏鸽和SPF鸡进行rGX-mF株的免疫原性分析,为研制安全高效的鸽新城疫灭活疫苗奠定基础。结果表明,rGX-mF株能够在鸡胚中稳定传代,效价高,毒力弱;rGX-mF株灭活疫苗接种雏鸽后疫苗吸收良好,无局部和全身不良反应,安全性好,免疫持续期长达12个月;rGX-mF株灭活疫苗与LaSota株灭活疫苗相比,rGX-mF株灭活疫苗在鸽体内能产生更高水平的抗体;rGX-mF株灭活疫苗同时免疫SPF鸡和雏鸽,SPF鸡产生的抗体显著高于鸽产生的抗体,这可能与鸽和鸡的免疫系统存在差异有关。综上,利用基因Ⅵ型鸽新城疫病毒弱毒rGX-mF株制备的灭活疫苗可在鸽体内产生有效的抗体,免疫效果好,免疫持续期长。

鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗冻干工艺研究

为提高鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗生产效率,该试验对冻干保护剂组方、冻干参数和冻干曲线进行优化研究。试验结果显示:优选工艺制备的疫苗冻干损失及37℃10d耐老化损失均在0.3个滴度以内,并且冻干时缩短17h,因此,优选工艺制备的鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗热稳定性较好、生产效率较高。

鸡群加强免疫新城疫活疫苗(CS_(2)株)与灭活苗(La Sota株)的效果对比

为了比较新城疫活疫苗(CS2株)与灭活苗(La Sota株)对鸡群的加强免疫效果,本试验对首次已饮水免疫过新城疫弱毒苗的鸡群,再次用新城疫活疫苗(CS_(2)株)与灭活苗(La Sota株)分别进行加强免疫,采用血凝抑制试验方法检测新城疫免疫抗体,并作对比分析。结果显示:加强免疫使用灭活苗(La Sota株)比用活疫苗(CS_(2)株)的免疫合格率更高,免疫效果更理想。

鸡新城疫LaSota株油乳剂灭活疫苗抗体消长规律的研究

用鸡新城疫LaSota株接种10日龄SPF鸡胚,收获尿囊液,经甲醛灭活后与10号白油佐剂混合乳化制成油乳剂灭活疫苗。抽取其中三批,接种14日龄非免疫鸡100羽,4天后检测抗体,以后每隔1周或2周采血检测ND-HI抗体,并于抗体水平为2log2、4log2、6log2左右时攻毒。结果表明,免疫后4天即能检测出抗体,之后逐渐上升,至第4周抗体水平达到高峰且较稳定,然后缓慢下降,150天后HI抗体降至临界值以下。攻毒结果表明,能使鸡抵抗强毒攻击的抗体临界值为6log2。

鸡新城疫LaSota株油乳剂灭活疫苗抗体消长规律的研究

用鸡新城疫LaSota株接种10日龄SPF鸡胚,收获尿囊液,经甲醛灭活后与10号白油佐剂混合乳化制成油乳剂灭活疫苗。抽取其中三批,接种14日龄非免疫鸡100羽,4d后检测抗体,以后每隔1周或2周采血检测ND-HI抗体,并于抗体水平为2log2、4log2、6log2左右时攻毒。结果表明,免疫后4d即能检测出抗体,之后逐渐上升,至第4周抗体水平达到高峰且较稳定,然后缓慢下降,150d后HI抗体降至临界值以下。攻毒结果表明,能使鸡抵抗强毒攻击的抗体临界值为6log2。

免疫鸡血清新城疫病毒抗体水平与攻毒保护效果的相关性研究

为了明确不同血清新城疫病毒(NDV)抗体水平对鸡的保护效果,本研究采用重组NDV灭活疫苗(A-Ⅶ株)对鸡进行免疫,通过交叉血凝抑制(HI)试验比较A-Ⅶ株与La Sota株间的血清学差异,并采用NDV标准强毒株F_(48)E_(8)和基因Ⅶ型强毒株JSC0804对不同抗体水平免疫鸡进行了攻毒保护试验。结果显示:抗A-Ⅶ株血清用A-Ⅶ株抗原测得的平均HI抗体效价显著高于La Sota株抗原(P<0.01),约高1.5log2,而抗La Sota株血清用La Sota株抗原测得的平均HI抗体效价稍高于A-Ⅶ株抗原,但无显著差异(P>0.05),表明2种疫苗株存在一定的血清学差异。在试验条件下,所有免疫鸡经点眼滴鼻攻毒后均未表现明显临床症状,但存在不同程度的排毒现象,排毒率总体上随抗体效价升高呈逐渐下降趋势。A-Ⅶ株疫苗免疫鸡血清HI抗体效价分别达≥13log_(2)和≥14log_(2)时可完全阻止F_(48)E_8株和JSC0804株排毒。免疫鸡排毒一般仅限于攻毒后5 d内。本研究阐明了免疫鸡的抗体水平和免疫保护效果的相关性,为新城疫免疫控制提供了依据。

表达传染性法氏囊病毒超强毒流行株VP2基因重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建

【目的】重组新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)作为新型的活病毒载体疫苗具有巨大的优势和应用前景,本研究旨在探讨新城疫病毒作为防制传染性法氏囊病超强毒(very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV)及新城疫重组二联活病毒载体疫苗的可行性。【方法】采用单股负链RNA病毒反向遗传操作技术,救获野生型NDV LaSota疫苗株rLaSota及表达vvIBDV Gx株VP2基因的重组疫苗株rLaSota-VP2,分别经滴鼻点眼途径免疫SPF雏鸡,免疫后21d分别以vvIBDVGx超强毒和新城疫强毒进行攻击。【结果】rLaSota及表达vvIBDV-VP2基因平均鸡胚致死时间均大于120h,脑内致病指数(ICPI)分别为0.4和0.36,静脉内致病指数(IVPI)均为0;接种后72～96h每毫升尿囊液EID50则分别达到109.0以上。rLaSota-VP2以106.0EID50一次免疫7日龄SPF鸡雏,免疫后3周对新城疫强毒致死攻击100%保护,对vvIBDV攻击免疫保护率达90%以上。【结论】重组病毒rLaSota-VP2保持了LaSota亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病性及遗传稳定性,免疫雏鸡对新城疫强毒和传染性法氏囊病毒超强毒株的致死均形成有效免疫保护。本研究为研制传染性法氏囊病-新城疫重组二联活载体疫苗奠定了基础。

鸡新城疫病毒分离株与La Sota株灭活疫苗效力比较试验

用NDV分离株及LaSota株为抗原液 ,经福尔马林灭活后 ,与油佐剂混合 ,分别制成分离株灭活苗、LaSota株灭活苗及分离株与LaSota株二价灭活苗。将这三种灭活疫苗分别免疫SPF鸡后 ,均获得 10 0 %抵抗NDV分离株及F48株强毒攻击的保护力 ;而用这 3种灭活苗与LaSota活苗单独或联合使用 ,免疫带有ND母源抗体的普通鸡后 ,3种灭活苗的免疫效力不同 ,分离株灭活苗与二价灭活苗对NDV分离株攻击的免疫保护效力明显优于LaSota灭活苗 ;灭活苗与活苗同时使用 ,其免疫效力明显优于单独使用灭活苗或活苗。

鸡IL-6真核表达载体的构建及其对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用研究

利用RT-PCR方法从ConA诱导的鸡脾淋巴细胞RNA中扩增出IL-6基因,与pCI-neo连接构建真核表达质粒pCI-IL-6,并研究pCI-IL-6在CEF细胞中的表达及其对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用。研究发现,pCI-IL-6在CEF细胞中得到表达,pCI-IL-6和LaSota疫苗联合免疫组HI抗体、CD4+、CD8+和CD3+T淋巴细胞百分含量从免疫后第14天起均高于LaSota疫苗单独免疫组。其中,HI抗体效价在第14、21和35天时差异显著(P<0.05),在第28天时差异极显著(P<0.01);CD4+、CD8+和CD3+T淋巴细胞百分含量在第14天后表现为差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。在免疫后第35天进行攻毒,pCI-IL-6和LaSota疫苗联合免疫组的保护率为89.5%,而LaSota疫苗单独免疫组的保护率为76.5%。结果表明,pCI-IL-6真核表达质粒在鸡体内成功表达,并能明显提高新城疫LaSota疫苗的免疫效果,具有免疫增强作用。

禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究(Ⅳ报)——疫苗的田间试验(英文)

1材料与方法 1．1二联营的制备与质量检验 1．1．1毒株来源与二联苗的制备。禽A型为杀性巴氏杆菌（APM）效力检验用强毒为C48．1株，鸡新城疫病毒（NDV）效力检验用强毒为北京株、APM1502株和NDVLaSota株，均购自中国兽药监察所。将APM强毒1502株培养菌液与NDV弱毒LaSota株感染鸡胚尿囊液混合，经甲醛溶液灭活后，按马闻天等的方法制备5批二联油乳剂灭活疫苗（批号05-1—05-5）。

重组鸡痘病毒表达的鸡IL-1β和IL-2以及cMGF对新城疫LaSota疫苗免疫效果的影响

将128只10日龄SPF鸡随机分成8组,每只免疫1 PD_(50)的新城疫LaSota疫苗；同时Ⅰ～Ⅵ组鸡分别皮下注射不同剂量的重组鸡痘病毒rFPV-IL-1β、rFPV-IL-2或cMGF,而Ⅶ组和Ⅷ组鸡分别皮下注射鸡痘病毒wt-FPV和PBS作为阴性对照和空白对照。结果,重组鸡痘病毒表达的IL-1β、IL-2或cMGF可以消除鸡痘病毒在免疫后第7d对雏鸡体重增长的影响；一定剂量的IL-1β和IL-2可使鸡脾中CD4^+T细胞在免疫后第7d和CD8^+T细胞在免疫后第14d的总体水平提高；免疫第21d新城疫F48E8强毒攻毒后,一定剂量的IL-1β和IL-2能提高免疫保护率,而cMGF却无此作用。结果表明,重组鸡痘病毒表达的IL-1β和IL-2在一定剂量下可增强新城疫LaSota疫苗的免疫效果。

鸡传染性鼻炎和新城疫二联油佐剂灭活疫苗的研究（Ⅰ）

以副鸡嗜血杆菌血清型Ａ的菌株Ｈｐｇ－８，血清型Ｃ菌株Ｈｐｇ－６６８和鸡新城疫ＬａＳｏｔａ制成一种鸡传染性鼻炎和新城疫灭活油佐剂二联苗，２．０ｍｌ接种鸡（相当于８个剂量）安全无异状，０．０２ｍｌ和０．２ｍｌ接种可以保护鸡分别抵抗新城疫病毒和副鸡嗜血杆菌的攻击。接种２次可保护鸡度过整个产卵期。疫苗在４－８℃中保存一年或在２５℃下保存３００天效力不减。根据７批疫苗的结果，对新城疫疫苗的半数保护剂量皆大于５０。

板蓝根多糖的制备及其对鸡新城疫Lasota疫苗的免疫效果研究

[目的]研究自制的板蓝根多糖对鸡新城疫弱毒疫苗的免疫效果。[方法]将120只健康AA肉仔鸡随机分为板蓝根多糖组、黄芪多糖组以及生理盐水对照组,研究板蓝根多糖对鸡新城疫Lasota疫苗的免疫增强作用。[结果]板蓝根多糖组和黄芪多糖组鸡NDV血凝抑制抗体滴度差异不显著,而板蓝根多糖组和黄芪多糖组鸡的免疫器官指数都显著高于生理盐水对照组。[结论]制备的板蓝根多糖可以用作鸡新城疫弱毒疫苗的免疫增强剂。

鸡新城疫活疫苗的研究

本产品用新城疫 (ND)克隆_30株 ,用 10个免疫剂量ND_克隆 30活疫苗免疫 7～ 10日龄雏鸡 ,不引起ND临床症状 ,说明该苗安全可靠。接种 7～ 10日龄鸡 ,7天产生免疫力 ,14～ 2 1d达到高峰 ,一次免疫 ,免疫期 2个月 ,保护率95 %以上 ,现地应用已逾 2亿羽份 ,获得良好的效果。