低氧预适应小鼠脑皮层内与nPKCε相互作用蛋白的鉴定

目的鉴定脑低氧预适(HPC)小鼠脑皮层组织内与新奇型蛋白激酶Cε(nPKCε)相互作用的蛋白。方法利用免疫沉淀(IP)和双向电泳(2-DE)技术分离小鼠脑皮层中与nPKCε相互作用的蛋白;以ImageMaster2D Platinum软件对双向电泳图谱进行差异表达分析;目标蛋白用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)及蛋白印迹(Western blot)进行鉴定分析。结果与对照组比较,HPC小鼠脑皮层内与nPKCε相互作用的胞质成分中有34个蛋白点上调,20个蛋白点下调,膜相关成分中有27个蛋白点上调,28个蛋白点下调;HPC后脑皮层胞质及膜相关成分中与nPKCε相互作用的热休克蛋白(HSP)70和14-3-3γ的蛋白表达量均升高,而HSP60仅在膜相关成分中升高(P<0.05,n=3)。结论nPKCε可能通过调节HSP60、HSP70和14-3-3γ等多种与其相互作用的蛋白参与脑HPC的形成。

低氧预适应增加小鼠脑组织内nPKCε膜转位

目的 :初步探讨新奇型蛋白激酶C(novelproteinkinasesC ,nPKCs)在脑低氧预适应发生发展过程中的作用。方法 :利用蛋白电泳 (SDS PAGE)和蛋白印迹 (Westernblot)等生化技术 ,并结合本室已建立的小鼠低氧预适应模型 ,观察低氧预适应对小鼠海马和大脑皮层组织内nPKCs(nPKCε、δ、η、μ和θ亚型 )膜转位 (激活 )的影响。结果 :随低氧次数 (H0 H4 )或低氧耐受时间的增加 ,小鼠海马 (H0 :4 1.6 %± 1.4 %vsH1 H4 :4 6 .9%± 4 .5 % ,5 2 .7±3.9% ,5 8.8%± 2 .7% ,6 1.3%± 3.7% )和大脑皮层 (H0 :38.4 %± 4 .5 %vsH1-H4 :4 2 .4 %± 5 .0 % ,4 8.7%±6 .5 % ,5 5 .3%± 8.9% ,6 1.2 %± 10 .2 % )组织内nPKCε膜转位明显增加 ,且海马和大脑皮层分别在H2、H3、H4和H3、H4具有统计学的显著意义 (P <0 .0 1) ;而nPKCδ、η、μ和θ亚型在海马和大脑皮层组织内的膜转位变化均无统计学意义。结论 :nPKCε可能在脑低氧预适应的发生发展过程中发挥着重要作用 ,但需进一步的研究证实。