海南2株大肠埃希菌中发现新德里金属β-内酰胺酶1

目的分离和确认2株耐碳青霉烯类药物大肠埃希菌(E.coli)携带新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)基因。方法用法国生物梅里埃公司API20E生化鉴定条和Vitek 2全自动细菌鉴定仪和配套GNS卡鉴定出2株耐亚胺培南和美罗培南的E.coli;并对其进行亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验、IP/IPI E-test试条法协同试验检测金属β-内酰胺酶,对目的菌株进行NDM-1基因PCR特异性扩增,扩增产物测序鉴定;对目的菌株进行质粒接合转移试验分析其耐药机制。结果 2株测试菌亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验、IP/IPI E-test试纸条法协同试验均为阳性,PCR扩增及测序证实为携带NDM-1耐药基因;体外药敏试验除对多黏菌素B和替加环素敏感外,其他广谱抗菌药物包括头孢菌素类、β-内酰胺类加酶抑制剂类、碳青霉烯类、氨基糖苷类和喹诺酮类均呈现高水平耐药,2株接合子E.coli对所有β-内酰胺类药物的MIC值高于受体菌E.coli J53,其中对美罗培南和亚胺培南MIC均提高了8倍以上,头孢他啶及头孢曲松则提高了64倍以上。结论海南地区出现携带NDM-1基因的E.coli,该基因可在不同菌株之间传递。

臭鼻克雷伯和鲍曼不动杆菌中检出NDM-1型金属β内酰胺酶基因

目的调查对碳青霉烯类抗菌剂敏感性降低的肠杆菌和鲍曼不动杆菌中NDM-1型金属β内酰胺酶基因的存在情况。方法应用改良Hodge试验和EDTA协同试验对2007～2010年本院收集的对碳青霉烯类抗菌剂敏感性降低的肠杆菌和鲍曼不动杆菌进行碳青霉烯酶筛选。PCR法扩增NDM-1基因,并对PCR扩增阳性产物进行DNA测序分析。对NDM-1基因阳性菌株用PCR方法检测armA和rmtB16S rRNA甲基化酶基因,VIM、SPM、IMP和KPC碳青霉烯酶基因以及Ⅰ类整合子。Etests法进行药敏试验。结果 70株肠杆菌中10株Hodge Test和EDTA协同试验阳性,55株鲍曼不动杆菌中6株EDTA协同试验阳性。其中1株臭鼻克雷伯和3株鲍曼不动杆菌PCR扩增出NDM-1型金属β内酰胺酶基因目的片段,经测序比对为NDM-1型基因。其中1株臭鼻克雷伯和1株鲍曼不动杆菌检测出armA型16S rRNA甲基化酶基因,1株鲍曼不动杆菌检测出2000 bp左右的Ⅰ类整合子,未检出除NDM-1型外的其他碳青霉烯酶基因。NDM-1基因阳性菌除对替加环素、多黏菌素B敏感外,对其他检测的抗菌剂均耐药。结论臭鼻克雷伯和鲍曼不动杆菌中存在NDM-1型金属β内酰胺酶基因,有的携带armA型16S rRNA甲基化酶基因和Ⅰ类整合子,为该地区首次报道。

2株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌发现新德里金属β-内酰胺酶基因

目的调查新德里金属β-内酰胺酶1基因(New Delhi metallo-β-lactamase 1,blaNDM-1)在我院碳青霉烯类抗菌药物耐药肠杆菌科细菌中的流行状况。方法收集并鉴定临床分离碳青霉烯类抗菌药物耐药肠杆菌科细菌51株。药物敏感试验用琼脂稀释法;改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;亚胺培南和亚胺培南+EDTA双纸片协同法检测金属β-内酰胺酶;PCR法检测blaNDM-1基因及其他主要的碳青霉烯酶基因(blaVIM、blaIMP、blaSIM、blaKPC、blaGES、blaSME、blaOXA-48),PCR扩增产物进行DNA测序分析。通过质粒转化试验来确定耐药基因的转移性。结果 1株阴沟肠杆菌和1株大肠埃希菌检出blaNDM-1基因,其他碳青霉烯酶基因阴性。2株细菌改良Hodge试验均为阳性,均产金属β-内酰胺酶,对所有的β-内酰胺类抗菌药物均耐药。耐药基因质粒转化试验阳性,转化子blaNDM-1基因检测阳性,并对青霉素类、头孢菌素类以及碳青霉烯类抗菌药物产生较高的耐药性。结论在本地区首次发现blaNDM-1基因,临床工作者应高度重视,加强对此类耐药基因的监测。

新德里金属β内酰胺酶-1序列和抗药性的生物信息学分析

在2009年报导的新德里金属-β-内酰胺酶-1（NDM-1）是“超级细菌”的一种主要的抗药物酶，具有通过基因重组在不同物种间转移的潜力，而且它具有广谱耐药性，目前已知的抗生素中，仅替加环素对其有抑制作用。本文旨在通过生物信息学技术探索NDM-1的基因重组的方式，并利用分子对接方法研究替加环素抑制NDM-1的分子机制。通过对一系列金属-β-内酰胺酶的氨基酸序列的进化树分析，发现三种来自海洋生物的蛋白与NDM-1具有较近的功能类似性，而相应编码基因的进化树分析发现仅其中一种与NDM-1有较近的进化距离。GC含量分析也发现NDM-1上游100～350bp剧烈波动，而在编码区段与该种基因的GC含量较为相似。因此认为NDM-1基因可能通过该基因水平转移的获得其特殊的功能。另外，通过半柔性分子对接，对NDM-1与替加环素的优势结合构象的潜在氢键进行分析，并与另外5种抗生素与NDM-1的对接结果进行比较，初步确定替加环素对于NDM-1蛋白存在竞争抑制优势，从而为NDM-1抑制剂的设计提供有价值的信息。

新德里金属β-内酰胺酶-1的表达、纯化与活性测试

目的 通过E.coli BL21(DE3)系统对重组质粒pET26b-NDM-1进行表达,纯化得到新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-β-lactamase-1, NDM-1),为新型NDM-1抑制剂的生物活性评价提供物质条件。方法 将pET26b-NDM-1重组质粒转化后,在E.coli BL21(DE3)中进行诱导、表达;通过快速蛋白液相色谱系统,利用含氯化钠缓冲溶液对目标蛋白进行洗脱并以十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide gel Electrophoresis, SDS-PAGE)检测纯度;利用稳态动力学研究方法,通过测定NDM-1催化头孢唑啉钠水解反应的初速率以及乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid, EDTA)对该反应的半数抑制浓度(Half Maximal Inhibitory Concentration, IC50),验证并评价所制备NDM-1的生物活性。结果 SDS-PAGE及UV-Vis表征结果显示,所制备NDM-1分子量正确,纯度大于95%;稳态酶动力学活性鉴定结果表明,所得NDM-1催化活性良好,水解头孢类β-内酰胺抗生素头孢唑啉钠能力强,速率快,EDTA对该NDM-1催化底物水解反应的IC50=7.803μM。结论 表达、纯化所得金属β-内酰胺酶NDM-1具有优良的催化活性,可用以评价新型NDM-1抑制剂的抑制效果。

NDM-1型金属β-内酰胺酶的生物信息学分析

目的了解新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)的氨基酸组成、理化性质、二三级结构和系统进化等,为进一步研究其作用机制和生物学功能奠定基础。方法利用Compute pI/MW、ProtParam、SOPMA等生物信息学方法,对NDM-1进行分析。结果 NDM-1的等电点为5.07,疏水性GRAVY值为0.107;二级结构存在螺旋、折叠和转角等,没有信号肽和跨膜区域;三级结构由3个α-螺旋和4个β-折叠片组成;属于Family Lactamase_B(PF00753)蛋白质家族;其基因序列与海洋细菌(Erythrobacter litoralis)HTCC2594的β-内酰胺酶Ⅱ基因同源性最近。结论 NDM-1可能起源于环境,通过基因水平转移被传递给临床致病菌,并在抗生素的选择压力下,成为威胁人类健康的全球性问题。

新德里金属β-内酰胺酶NDM-1的研究进展

2010年首次报道的新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)能水解几乎所有β-内酰胺类抗生素,产生NDM-1的菌株被称为"超级细菌"。由于缺乏有效的抗生素,目前临床上还没有能够完全治愈超级细菌感染的方法。因此针对超级细菌抑制剂的创新药物研究已经成为一个充满挑战的研究方向。本文对NDM-1抑制剂的研究现状、抗药原理及发展前景等做了详细的分析、整理和阐述。

携带blaIMP-4或blaKPC-2的产新德里金属β-内酰胺酶-1的肠杆菌科菌的基因型检测及其质粒转移传播机制的研究

目的：分析携带blaIMP‐4或blaKPC‐2的产新德里金属β‐内酰胺酶‐1（NDM‐1）的肠杆菌科菌的基因型及其质粒转移传播机制。方法收集2012年4月至2014年10月间浙江省温州市和杭州市5家医院细菌培养非重复菌株中碳青霉烯类耐药（如亚胺培南、美罗培南、厄他培南等耐药）肠杆菌科菌33株，应用全自动微生物分析仪对该类菌株进行鉴定和药物敏感试验。并用改良 Hogde试验、EDTA协同初筛金属酶试验、超广谱β‐内酰胺酶（ESBL）检测（采用美国临床和实验室标准协会推荐的双纸片方法）、高产头孢菌素（AmpC）酶检测（采用头孢西丁三维试验），对试验菌基因包括blaNDM‐1在内及ISAba125‐NDM连锁基因进行 PCR检测，并将扩增产物纯化、克隆后测序，对部分菌株及2株携带blaIMP‐4或blaKPC‐2的产blaNDM‐1基因的肺炎克雷伯菌进行质粒转移、接合与消除试验。结果33株碳青霉烯类耐药的肠杆菌科菌分别为肺炎克雷伯菌28株，产酸克雷伯菌1株，大肠埃希菌2株，植生乌拉尔菌1株，阴沟肠杆菌1株；分别来自浙江大学医学院附属邵逸夫医院13株、温州市中医院13株、温州市人民医院1株、温州医科大学附属第一医院3株、温州市中西医结合医院3株。有31株确定为产碳青霉烯酶，包括 blaKPC‐224株、blaNDM‐13株、blaNDM‐51株、blaIMP‐43株，其中blaNDM‐1阳性菌株中同时携带blaIMP‐4或 blaKPC‐2的各1株，将携带部分阳性基因的菌株与大肠埃希菌 EC600或肺炎克雷伯菌ATCC13833进行质粒转移结合试验，获得结合子进行相应基因检测，均获得相应 blaNDM‐1、ISAba125‐NDM等基因。结论碳青霉烯类耐药肠杆菌科菌中最常见的是 blaKPC‐2型；blaNDM‐1、blaNDM‐5基因与ISAba125‐NDM连锁基因可能有相关；2株 blaNDM‐1型阳性菌株中有1株同时携带 blaKPC‐2型基因、另1株同时携带金属酶blaIMP‐4型基因。由于这些菌株为多重耐药且基因大部分在质粒上，容易在菌株间发生水平传播，应引起临床高度关注。

新德里金属β-内酰胺酶-1的研究进展

NDM-1是新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-β-lactamase-1)的英文缩写,因携带该基因的细菌会产生一种特殊的β-内酰胺酶,且活性部位为金属离子,又首先在印度首都新德里出现而得名[1]。NDM-1基因可指导合成NDM-1酶,能水解几乎所有β-内酰胺类抗菌药物,包括目前最有效力的碳青霉烯类[1]。现就NDM-1超级细菌的生物学特征、流行现状、耐药特性、检测方法和治疗5个方面的内容作一综述。

海南分离出一株产新德里金属β-内酰胺酶-1基因的产气肠杆菌

目的分离与鉴定海南地区临床发现的耐碳青酶烯类药物的产气肠杆菌是否携带新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-beta-lactamas-1,NDM-1)基因。方法用法国梅里埃API 20E生化鉴定条和VITEK2全自动细菌鉴定仪及其配套CNS试剂,鉴定出临床耐亚胺培南和美洛培南的产气肠杆菌,并用亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验测定产金属酶类碳青霉烯酶;然后,对目的菌株进行NDM-1耐药基因聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)特异性扩增后,将扩增产物行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定及BLAST比对,以确定其NDM-1基因。结果采用亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验,从10株耐亚胺培南或美洛培南的产气肠杆菌中,检出4株金属类碳青霉烯酶表型阳性菌株。对其中4株金属酶表型阳性的产气肠杆菌进行NDM-1基因PCR扩增后,对其产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序分析,确认1株为携带NDM-1的耐药基因菌株。结论海南发现1株携带bla NDM-1基因的产气肠杆菌。

新德里金属β-内酰胺酶-1及其突变体结构与功能研究进展

耐药菌株所分泌表达的新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi Metalloβ-lactamase-1,NDM-1)是金属-β-内酰胺酶家族的成员,能够催化几乎所有β-内酰胺类抗生素的水解,其迅速传播已成为人类健康的严重威胁。我国是产该酶病原菌分离率较高的国家之一,绝大部分为革兰氏阴性菌。到目前为止,全世界已报道了由16个突变位点和1个插入位点所形成的21种不同的NDM突变体,这些突变体的核酸序列通过单个或多个碱基取代或插入而改变。本文总结了NDM-1的结构及催化水解机理,对其结构中α-螺旋、β-折叠和环区结构进行了探讨,并基于此突变位点对该酶结构的影响进行了分析。这些区域所发生的突变,直接影响其水解底物的活性。深入了解这些突变对其结构和功能方面的影响,对于在分子水平上的进化研究具有十分重要的意义。

产新德里金属β-内酰胺酶-1鲍氏不动杆菌的流行情况调查

目的筛查厦门部分医院鲍氏不动杆菌产新德里金属β-内酰胺酶-1(NDM-1)基因,了解产NDM-1鲍氏不动杆菌的流行情况。方法收集厦门部分医院2013年1月-2014年12月鲍氏不动杆菌341株,采用VIKET COMPACT 2全自动细菌鉴定仪进行鉴定和药敏实验,改良Hodge实验、MBL E-test法进行NDM-1表型确认,PCR方法进行NDM-1基因扩增,并将基因扩增产物进行测序比对。结果筛选出5株产NDM-1的鲍氏不动杆菌,表型确证实验结果为阳性,PCR扩增产物BLAST比对为99%以上同源性。结论厦门地区已出现产NDM-1鲍氏不动杆菌,应加强携带blaNDM-1菌株的监测与预防控制。

两株携带NDM-1型金属β-内酰胺酶阴沟肠杆菌的临床特征研究

目的调查分析两株耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌临床资料,探讨NDM-1产生的根源及预防和控制的措施。方法收集2012年7月医院培养两株耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,改良Hodge试验和金属酶试验检测产酶类型,聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因并进行测序。结果两株阴沟肠杆菌对亚胺培南和美罗培南的MIC均>8μg/ml,改良Hodge试验阳性,金属酶表型初筛试验阳性,经基因扩增并测序后,与Genebank比对,表明与NDM-1基因有99%的相似性,临床资料显示,该两株菌有一定的同源性,可能有共同的传播途径。结论对碳青霉烯类抗菌药物高度耐药的阴沟肠杆菌有传播的趋势,通过消毒等措施能得到控制。

新德里金属β内酰胺酶-1型超级细菌的研究及防控

新德里金属β内酰胺酶-1(NDM-1)属于B1亚类金属β内酰胺酶,能水解除氨曲南外的绝大多数β内酰胺类抗菌药物,其基因大多定位在质粒上,易引起水平传播。人主要是通过院内感染、个人旅行和社区获得3种途径感染产NDM-1细菌。实验室检测方法有表型筛查、表型确证和基因确证。本文主要从流行情况、分子生物学特点、检测方法、预防等方面对产NDM-1细菌做一综述,旨在加强对NDM-1型超级细菌的认识和防控。

产NDM-1型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌儿童血流感染的临床特征及细菌耐药性分析

目的研究产NDM-1型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌儿童血流感染的临床特征及细菌耐药性。方法收集首都医科大学附属北京儿童医院2011年1月-2014年8月住院患儿血培养分离的非重复耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKp);用微量肉汤稀释法测定15种抗菌药物的MIC值;采用PCR法确定产NDM-1菌株;回顾分析病历资料了解感染产NDM-1菌株患儿的临床特征,并与感染非产NDM-1菌株患儿进行比较。结果 52株CRKp中共检出28株产NDM-1菌株。产NDM-1菌株组均为多重耐药菌,对青霉素、头孢菌素和哌拉西林-他唑巴坦的耐药率达100%(28/28),对氨曲南、甲氧苄啶-磺胺甲唑及庆大霉素的耐药率均>75%,对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为100%(28/28)、92.9%(26/28)。产NDM-1菌株中碳青霉烯类高MIC值的菌株比例高于非产NDM-1菌株。产NDM-1菌株组的患儿中,82.1%(23/28)来自血液病房,常见基础疾病为血液系统恶性肿瘤(78.6%,22/28),20例(76.4%)患儿存在中性粒细胞缺乏伴发热;产与非产NDM-1肺炎克雷伯菌血流感染患儿相比,反复住院(P=0.202)、近期使用抗菌药物(P=0.615)、常见基础疾病(P=0.856)以及深静脉置管(P=0.099)方面差异无统计学意义。明确肺炎克雷伯菌感染后,37例患儿接受了碳青霉烯类药物联合敏感药物治疗。产NDM-1菌株组病死率与非产NDM-1菌株组相比无明显差异(2/28对3/24;P=0.625)。结论该院已出现产NDM-1肺炎克雷伯菌株,呈逐年增长趋势,此类细菌呈多重耐药,碳青霉烯类高MIC值的菌株所占比例高,临床特征上与非产NDM-1菌无明显区别。

ST571型产NDM-1肺炎克雷伯菌检出及分子流行病学研究

目的探讨产新德里金属-β-内酰胺酶1(NDM-1)肺炎克雷伯菌检出的分子流行病学意义。方法实验菌株为从临床标本中分离到的1株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌。采用VITEK-2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及药敏试验,PCR及测序方法检测NDM-1等碳青霉烯酶基因的表达,并对菌株进行质粒转移接合试验及多位点序列分型(MLST)。经检索Pub Med收集其他地区产NDM-1肺炎克雷伯菌的MLST数据,采用e BURST V3软件及Tree drawing软件进行分析。结果该菌株对包括碳青霉烯类在内的多种抗生素均高度耐药,携带NDM-1基因,MLST为ST571含有该基因的质粒通过接合方式成功转移到受体菌。共收集源自28个国家的238株产NDM-1肺炎克雷伯菌的MLST信息,包含41个ST型,CC258(clone complex)为主要流行株。结论我国首次检出ST571型产NDM-1肺炎克雷伯菌,耐药基因可能通过质粒进行传播。产NDM-1肺炎克雷伯菌的分子分型呈多样化,以CC258流行最广,本实验菌株与该克隆复合体菌株的亲缘关系甚远。

清开灵注射液提取物及清开灵注射液与抗生素联合对含blaNDM-1超级细菌的抑菌效果

目的体外初步研究清开灵注射液主成分提取液和清开灵注射液与抗生素联合用药分别对含产新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-β-lactamase1,NDM-1)基因的耐药细菌(blaNDM-1细菌)的抑菌性。方法采用琼脂稀释法和K-B法对清开灵注射液主成分板蓝根、金银花、栀子、黄芩苷4种药物提取液和清开灵注射液与抗生素联合用药分别对耐药超级细菌进行抑菌实验。并测定各提取液的最小抑菌浓度(MIC)值。结果清开灵主成分提取液对含blaNDM-1基因的耐药细菌均有不同程度的抑制效果,其中以黄芩苷为最好,对含blaNDM-1基因的耐药菌不动杆菌属/乙酸钙不动杆菌(WD)、鲍曼不动杆菌(WX)、嗜麦芽寡养单胞菌(WJ)和大肠杆菌pGEX-4T-NDM-1/DH5α(GST-NDM-1)的MIC分别为0.015、0.020、0.005、>0.020g/mL,而各提取液的MIC值的大小依次为黄芩苷、金银花、栀子、板蓝根;清开灵注射液与抗生素联合用药后,对含blaNDM-1基因多重耐药菌的抑菌效果非常明显,大大提高了各类抗生素单独用药的抑菌能力,其中以与青霉素类(青霉素G、美洛西林、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦)效果最好,抑菌效果提高10倍左右,其他抗生素类药物抑菌效果都有不同程度的提高。结论清开灵注射液主成分提取液和清开灵注射液与抗生素联合用药对含blaNDM-1耐药基因细菌都有很好的抑菌效果,此研究为药物开发及对blaNDM-1超级耐药细菌的用药和治疗提供了理论依据。

8株产NDM-1肠杆菌科细菌的耐药特点和流行性分析

目的研究温州医科大学附属第二医院临床分离的8株产新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)肠杆菌科细菌的耐药特点及分子生物学特点。方法采用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统进行菌株的鉴定和体外药物敏感性试验;采用聚合酶链反应(PCR)扩增β-内酰胺酶基因,并对扩增产物进行测序和Blast比对分析。采用接合转移试验检测NDM-1耐药基因的水平转移能力。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株的同源性。结果 8株菌株对β-内酰胺类药物及β-内酰胺酶抑制剂复合物均表现出较高的耐药性,而对氨基糖苷类和氟喹诺酮类药物敏感性很好;各菌株多同时携带多种耐药基因,其中5株携带SHV基因、2株携带CTX-M-1基因、1株携带DHA-1基因。产NDM-1菌株(2株大肠埃希菌除外)接合成功,接合子对β-内酰胺类药物的耐药性很高。PFGE结果显示,2株大肠埃希菌为不同克隆株,而3株阴沟肠杆菌中有2株具有同源性,视为同一克隆株。结论产NDM-1肠杆菌科细菌多同时携带多种耐药基因,对β-内酰胺类药物及β-内酰胺酶抑制剂复合物均表现出较高的耐药性。NDM-1耐药基因具有水平转移能力。

携带NDM-1基因ST571型肺炎克雷伯菌引起新生儿医院感染暴发的研究

目的调查某医院儿科分离的6株对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因型和相互间的同源性,为控制医院感染提供依据。方法采用梅里埃Vitek-2Compact对6株肺炎克雷伯菌进行鉴定及药敏试验。改良Hodge试验和金属酶E条检测菌株是否产碳青霉烯酶。聚合酶链式反应扩增菌株是否携带碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶和Ampc等耐药基因,并测序确定其基因型。多位点序列(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)验证菌株之间的同源性。结果 6株肺炎克雷伯菌表现为多重耐药性,对临床常用的抗生素耐药。所有菌株改良Hodge和金属酶E条试验均阳性,且携带多个耐药基因。其中5株菌,分别携带NDM-1、SHV-11、DHA-1、oqxA和fosA3基因。另外1株ST11型肺炎克雷伯菌携带KPC-2、CTX-M-65、TEM-1和OXA-1基因。5株携带NDM-1基因的肺炎克雷伯菌中,有4株的PFGE带型相同,且都为ST571型,另一株为ST76型,带型与前4株不同。结论新生儿病房中存在携带NDM-1、SHV-11、DHA-1、oqxA和fosA3基因的ST571型肺炎克雷伯菌引起的医院感染暴发。

NDM-1阳性细菌实时荧光LAMP方法的建立及应用

目的建立一种实时荧光环介导等温扩增(LAMP)方法快速检测新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)阳性细菌。方法根据NDM-1基因序列设计4套引物并进行优化,对LAMP反应中的荧光染料SYTO-9浓度进行优化,同时考察该方法的检出限和特异性。利用本方法检测72例临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌。结果本研究建立的实时荧光LAMP方法,其荧光染料SYTO-9的最佳浓度为4μmol/L;63℃恒温扩增35 min可检出101拷贝/μL的标准阳性模板;特异性较好;对72例临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌检出的阳性率为16.7%(12/72),12株NDM-1阳性细菌经测序验证,准确率为100%。结论本研究建立的检测NDM-1阳性细菌的实时荧光LAMP方法具有快速、操作简便、特异性好、敏感性高、准确、可靠等优点,可以直观、实时地观察反应的进行情况,适合临床NDM-1阳性细菌的快速检测。