携带新德里金属β-内酰胺酶的猪源大肠杆菌全基因组测序及植物提取物药物筛选

为了解大肠杆菌携带新德里金属β-内酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase,NDM)NDM耐药基因情况及筛选敏感植物提取物。采用16S rRNA菌种鉴定,PCR筛查菌耐药基因,bla NDM、bla TEM和AmpC酶耐药基因的确认,全基因组测序,BLAST和MEGA软件对序列进行生物信息学分析、系统进化树分析、NDM亚型鉴定和6种植物提取物药敏药物筛选研究。结果表明,从2021年(1-12月)临床猪腹泻病例中分离鉴定的91株大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中鉴定出1株同时携带新德里金属β-内酰胺酶NDM4、NDM5和β内酰胺酶blaTEM、AmpC酶的大肠杆菌(HN2187)。对其进行11种抗生素和6种植物提取物药物敏感性测试,结果显示HN2187菌株对其均耐药。而HN2187对血根碱、贯叶连翘提取物敏感,对黄芩、姜黄素、千里光和大蒜提取物耐药。HN2187产B类酶,携带NDM4、NDM5、bla TEM、AmpC酶耐药基因,其中bla NDM-4位于质粒pNDM4-HN2187(Plasmid B)上,bla NDM-5位于质粒pNDM5-HN2187(Plasmid A)上,bla TEM1位于质粒pTEM1-HN2187(Plasmid B)上,AmpC酶耐药基因位于染色体上,分别介导bla NDM-4、bla NDM-5、bla TEM和AmpC耐药基因,是耐药菌传播的重要载体。以上研究表明,携带NDM4和NDM5的多重耐药菌已在养殖场传播和流行,应加强该类耐药基因的流行调查、监测和新药物研究,为临床超级细菌和多重耐药菌感染的流行和防治提供理论基础。

海南2株大肠埃希菌中发现新德里金属β-内酰胺酶1

目的分离和确认2株耐碳青霉烯类药物大肠埃希菌(E.coli)携带新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)基因。方法用法国生物梅里埃公司API20E生化鉴定条和Vitek 2全自动细菌鉴定仪和配套GNS卡鉴定出2株耐亚胺培南和美罗培南的E.coli;并对其进行亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验、IP/IPI E-test试条法协同试验检测金属β-内酰胺酶,对目的菌株进行NDM-1基因PCR特异性扩增,扩增产物测序鉴定;对目的菌株进行质粒接合转移试验分析其耐药机制。结果 2株测试菌亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验、IP/IPI E-test试纸条法协同试验均为阳性,PCR扩增及测序证实为携带NDM-1耐药基因;体外药敏试验除对多黏菌素B和替加环素敏感外,其他广谱抗菌药物包括头孢菌素类、β-内酰胺类加酶抑制剂类、碳青霉烯类、氨基糖苷类和喹诺酮类均呈现高水平耐药,2株接合子E.coli对所有β-内酰胺类药物的MIC值高于受体菌E.coli J53,其中对美罗培南和亚胺培南MIC均提高了8倍以上,头孢他啶及头孢曲松则提高了64倍以上。结论海南地区出现携带NDM-1基因的E.coli,该基因可在不同菌株之间传递。

2株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌发现新德里金属β-内酰胺酶基因

目的调查新德里金属β-内酰胺酶1基因(New Delhi metallo-β-lactamase 1,blaNDM-1)在我院碳青霉烯类抗菌药物耐药肠杆菌科细菌中的流行状况。方法收集并鉴定临床分离碳青霉烯类抗菌药物耐药肠杆菌科细菌51株。药物敏感试验用琼脂稀释法;改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;亚胺培南和亚胺培南+EDTA双纸片协同法检测金属β-内酰胺酶;PCR法检测blaNDM-1基因及其他主要的碳青霉烯酶基因(blaVIM、blaIMP、blaSIM、blaKPC、blaGES、blaSME、blaOXA-48),PCR扩增产物进行DNA测序分析。通过质粒转化试验来确定耐药基因的转移性。结果 1株阴沟肠杆菌和1株大肠埃希菌检出blaNDM-1基因,其他碳青霉烯酶基因阴性。2株细菌改良Hodge试验均为阳性,均产金属β-内酰胺酶,对所有的β-内酰胺类抗菌药物均耐药。耐药基因质粒转化试验阳性,转化子blaNDM-1基因检测阳性,并对青霉素类、头孢菌素类以及碳青霉烯类抗菌药物产生较高的耐药性。结论在本地区首次发现blaNDM-1基因,临床工作者应高度重视,加强对此类耐药基因的监测。

产新德里金属β-内酰胺酶耐药菌感染治疗的研究进展

新德里金属β-内酰胺酶(NDM)自2009年首次被报道以来,产NDM耐药菌已在全球范围流行并引发多种类型感染,有效控制和治疗产NDM耐药菌感染具有重要的现实意义。然而,目前并没有确切的关于产NDM耐药菌的临床治疗方案。我们对产NDM耐药菌感染的治疗研究现状做简要综述,为产NDM耐药菌感染的控制和临床治疗提供科学合理的依据和指导。

产新德里金属β-内酰胺酶大肠埃希菌耐碳青霉烯类药物相关机制研究和分子分型

目的研究某三甲医院临床分离的产新德里金属β-内酰胺酶(NDM)大肠埃希菌的耐药机制和分子流行病学特征。方法在某三甲医院收集的耐碳青霉烯类大肠埃希菌中利用聚合酶链反应(PCR)筛查是否携带NDM基因,通过测序确定NDM型别并进一步检测其它碳青霉烯酶相关基因和广谱β-内酰胺酶类耐药基因。通过载体构建和表达研究NDM-1、NDM-6及NDM-9对亚胺培南的水解能力。采用多位点序列分型(MLST)对产NDM大肠埃希菌进行分子分型。结果共筛选出8株携带NDM大肠埃希菌,其中2株为NDM-9型,6株为NDM-6型。4株大肠埃希菌同时携带NDM-6、TEM和CTX-M-1基因,1株同时携带NDM-6、TEM和CTX-M-9基因。携带NDM-1、NDM-6与NDM-9重组菌对亚胺培南均耐药,最小抑菌浓度(MIC)分别为32μg/mL、128μg/mL和64μg/mL。产NDM大肠埃希菌MLST分型结果为ST226、ST648和ST1284型各1株,ST101型5株,此5株均来源于神经内科。结论首次发现同时携带NDM-6、TEM和CTX-M-1基因和携带NDM-6、TEM和CTX-M-9基因的大肠埃希菌,NDM-6、NDM-9对亚胺培南的耐药性比NDM-1强,应引起重视。MLST分型结果提示某三甲医院可能存在耐碳青霉烯类大肠埃希菌的院内局部传播。

我国北方地区部分医院产新德里金属β-内酰胺酶肠杆菌分子流行病学研究

目的调查北京、沈阳、济南、兰州等我国北方地区医院中产新德里金属β-内酰胺酶(NDM)耐药基因大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌流行情况。方法采用改良Hodge试验筛选产碳氢霉烯酶菌株;采用亚胺培南-EDTA协同试验检测金属β-内酰胺酶的产生;采用聚合酶链式反应(PCR)扩增测序筛查NDM基因;采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)和多位点序列分析法(MLST)对阳性菌株进行同源性分析。结果 31株大肠埃希菌和84株肺炎克雷伯菌Hodge试验阳性。其中15株大肠埃希菌和15株肺炎克雷伯菌筛选出NDM基因。MLST结果序列型(ST分型)与PFGE分型吻合。PFGE试验结果显示大肠埃希菌SY01、SY02、SY03与JN06属于同一分群,大肠埃希菌SY01、SY02、SY03图谱完全相同,且与JN06图谱同源性较高,且这4株菌ST型均为ST167。结论产NDM耐药基因的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌已出现于我国北方地区多个省会城市,且有局部散在的克隆性流行,需引起临床科室和医院感染控制部门的高度重视。

唐山地区CRE产新德里金属β-内酰胺酶亚型情况分析

目的探讨唐山地区2018—2019年碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌(CRE)产新德里金属β-内酰胺酶(NDM)亚型情况及流行特点,为临床合理用药提供依据。方法收集唐山地区3所三级甲等综合医院2018—2019年临床分离CRE 252株,采用Vitek 2 Compact细菌鉴定仪进行菌种鉴定和药敏试验,采用改良碳青霉烯类灭活试验(mCIM)和EDTA协同改良碳青霉烯类灭活试验(eCIM)进行表型筛查,并用PCR扩增blaNDM基因并测序。结果76株CRE检测出blaNDM基因。其中blaNDM-5型占60.53%(46/76)、blaNDM-1占36.84%(28/76)、blaNDM-9占2.63%(2/76)。标本来源主要为痰液(44.74%)、尿液(30.26%)。76株产NDM的肠杆菌科细菌中大肠埃希菌占比为50.00%(38/76),肺炎克雷伯菌为38.15%(29/76)。产NDM菌株对氨曲南、阿米卡星、妥布霉素、复方磺胺甲噁唑的耐药率分别为77.6%、77.6%、89.5%、82.9%,仅发现2株产NDM菌株对替加环素耐药,对其余抗菌药物100.0%耐药。结论唐山地区NDM亚型主要是NDM-5和NDM-1,耐药基因主要存在于大肠埃希菌中。blaNDM阳性者耐药性严重,医院应加强此类细菌的防控从而防止疾病的暴发、流行。

产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶耐药菌的研究概况及应对措施

2008年首次在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中确认了Ⅰ型新德里金属β内酰胺酶（New Delhi Metallo-β-lactamase1，NDM—1）。目前产NDM-1酶细菌在印度、英国、美国、加拿大、荷兰、澳大利亚以及中国等国均有报道。研究发现至少一例NDM-1阳性菌对所有已知的抗生素具有耐药性。该文简要介绍了NDM-1耐药菌的发现、发展过程及其耐药性情况，基因特点以及NDM-1阳性菌的应对措施.

氨曲南联合头孢他啶/阿维巴坦对产新德里金属β-内酰胺酶大肠埃希菌的体外抗菌活性评估

目的评估氨曲南联合头孢他啶/阿维巴坦对产新德里金属β-内酰胺酶(NDM)大肠埃希菌的体外抗菌活性。方法收集2018—2020年临床分离的碳青霉烯耐药大肠埃希菌30株,采用微量肉汤稀释法检测常规药物的敏感性,采用E-test试验检测菌株对氨曲南和头孢他啶/阿维巴坦的最低抑菌浓度(MIC),双E-test纸条法检测氨曲南与头孢他啶/阿维巴坦之间的协同作用;酶抑制剂增强试验检测碳青霉烯酶表型;PCR扩增和测序技术检测碳青霉烯酶基因和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因;多位点序列分型(MLST)对菌株进行分子分型。结果碳青霉烯酶表型检测结果显示,30株大肠埃希菌均为金属酶表型,基因检测结果显示携带NDM-5基因26株,携带NDM-7基因2株,携带NDM-1和NDM-9基因各1株。另外,15株携带TEM-1基因,22株携带CTX-M-1组基因(10株携带CTX-M-15,12株携带CTX-M-55),9株携带CTX-M-9组基因(均为CTX-M-27)。MLST将30株菌分为8个不同的ST型,以ST167(40%,12/30)、ST405(20%,6/30)和ST410(20%,6/30)为主。30株细菌仅对替加环素和多黏菌素敏感,对阿米卡星耐药率为46.7%。27株对氨曲南耐药的菌株,在联合头孢他啶/阿维巴坦后25株细菌由耐药变为敏感,氨曲南MIC_(50)和MIC_(90)分别下降至2μg/mL和4μg/mL。结论氨曲南联合头孢他啶/阿维巴坦对产NDM金属酶大肠埃希菌有较强的体外协同作用,可成为一种治疗产金属酶大肠埃希菌感染的潜在药物组合。

聊城地区新德里金属β-内酰胺酶菌株的分子流行病学及感染危险因素研究

目的研究聊城地区新德里金属β-内酰胺酶(NDM)菌株的分子流行病学及感染危险因素。方法采用分层抽样法从聊城地区2014年1月至2018年12月15所医院中抽取样本5689例,其中,临床标本中分离的碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌共112份,回顾性研究分析院内感染危险因素。用改良Hodge试验、ETP-EDTA协同试验、mCIM试验确证表型。用PCR法扩增碳青霉烯酶基因。结果5689例样本中临床标本中分离的碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌共112份,发生率1.97%。可见,不同危重度、合并基础疾病、存在侵入性操作、使用糖皮质激素、使用免疫抑制剂药物是碳青霉烯类耐药情况下碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌感染率差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析模型结果显示,危重度(符合并入住ICU)、合并基础疾病(2种及以上)、存在侵入性操作、使用糖皮质激素、使用免疫抑制剂药物是碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌感染的独立危险因素(OR=1.977、1.558、1.103、1.078、1.770,P<0.05),26株产NDM肠杆菌科细菌呈现多重耐药性,其中7株对亚胺培南耐药、8株对厄他培南耐药、6株对美罗培南耐药,5株对3种药物都敏感。PCR结果显示,26株产NDM的大肠埃希菌分为4个基因型,其中9株D型,8株B型,5株C型,4株A型。结论医院已出现多种NDM亚型,主要感染因素为侵袭性操作及抗生素的应用,主要通过X3型质粒在肠杆菌科细菌中传播。

碳青霉烯类药物不敏感的产气肠杆菌产新德里金属β-内酰胺酶

目的探讨3株对碳青霉烯类药物不敏感的产气肠杆菌的耐药机制及同源性。方法用生化和16S rDNA测序的方法鉴定细菌;用Bio Mérieux公司全自动药敏分析仪测定最小抑菌浓度(MIC),对亚胺培南和美罗培南的MIC用E-test法验证;双纸片协同实验测定金属酶的表型;PCR法扩增blaIMP、blaVIM、blaGIM、blaSPM、blaSIM、blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaOXA-40-like、blaOXA-58-like和blaNDM-1,阳性产物克隆转化后提取质粒进行测序和BLAST比对分析;用肠杆菌基因间重复一致序列PCR(enterobacterial repetitive intergenic consensus-PCR,ERIC-PCR)进行菌株分型。结果两种方法鉴定3株细菌均为产气肠杆菌,对左氧氟沙星、环丙沙星、多黏菌素B敏感,对青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类均表现耐药或中介。双纸片协同实验均为阳性,扩增和序列比对的结果证明均携带blaNDM-1,其余金属β-内酰胺酶和OXA类β-内酰胺酶基因的扩增均为阴性。ERIC-PCR分型获得的条带完全一致,证明3株产气肠杆菌为同一克隆。结论产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)的产气肠杆菌为院内交叉感染获得,应加强产NDM-1细菌的监控。

新德里金属β-内酰胺酶-1的表达、纯化与活性测试

目的 通过E.coli BL21(DE3)系统对重组质粒pET26b-NDM-1进行表达,纯化得到新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-β-lactamase-1, NDM-1),为新型NDM-1抑制剂的生物活性评价提供物质条件。方法 将pET26b-NDM-1重组质粒转化后,在E.coli BL21(DE3)中进行诱导、表达;通过快速蛋白液相色谱系统,利用含氯化钠缓冲溶液对目标蛋白进行洗脱并以十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide gel Electrophoresis, SDS-PAGE)检测纯度;利用稳态动力学研究方法,通过测定NDM-1催化头孢唑啉钠水解反应的初速率以及乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid, EDTA)对该反应的半数抑制浓度(Half Maximal Inhibitory Concentration, IC50),验证并评价所制备NDM-1的生物活性。结果 SDS-PAGE及UV-Vis表征结果显示,所制备NDM-1分子量正确,纯度大于95%;稳态酶动力学活性鉴定结果表明,所得NDM-1催化活性良好,水解头孢类β-内酰胺抗生素头孢唑啉钠能力强,速率快,EDTA对该NDM-1催化底物水解反应的IC50=7.803μM。结论 表达、纯化所得金属β-内酰胺酶NDM-1具有优良的催化活性,可用以评价新型NDM-1抑制剂的抑制效果。

产新德里金属β-内酰胺酶-1醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体碳青霉烯酶、外膜孔蛋白和外排泵相关基因检测

目的研究临床分离的产新德里金属β-内酰胺酶(NDM)醋酸钙-鲍曼不动杆菌(Acb)复合体耐碳青霉烯类药物的机制。方法通过VITEK-2 compact全自动微生物分析仪鉴定、42℃生长实验、聚合酶链反应(PCR)检测OXA-51-like基因,rpoB基因序列测定对收集的耐碳青霉烯类Acb复合体进行菌种鉴定。利用PCR筛查是否携带NDM基因,通过测序确定NDM型别并进一步检测其他碳青霉烯酶相关基因、外膜孔蛋白基因和外排泵基因。利用DiversiLab细菌DNA指纹图谱分析系统对产NDM-1的Acb复合体进行基因分型。结果共筛选出10株产NDM-1的Acb复合体,其中5株为Pittii不动杆菌,3株为Nosocomialis不动杆菌,2株为鲍曼不动杆菌。在5株Pittii不动杆菌中,2株检出OXA-58-like基因,5株检出外膜孔蛋白oprD基因和外排泵adeI,adeK基因,4株检出adeJ基因。3株Nosocomialis不动杆菌中均检出外膜孔蛋白carO和oprD基因以及外排泵adeB,adeI,adeJ和adeK基因。2株鲍曼不动杆菌中均检出外膜孔蛋白carO基因以及外排泵adeB,adeI,adeJ和adeK基因,1株检出外膜孔蛋白oprD基因,1株检出OXA-23-like基因。鲍曼不动杆菌、Pittii不动杆菌和Nosocomialis不动杆菌基因分型结果均分为两型。结论在福建省Pittii不动杆菌中同时检出NDM-1和OXA-58-like基因,在鲍曼不动杆菌中同时检出NDM-1和OXA-23-like基因。本地分离的Nosocomialis不动杆菌与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药可能与AdeIJK外排泵及NDM-1酶作用有关;Pittii不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药则可能是由外膜孔蛋白CarO缺失、AdeIJK外排泵及NDM-1酶共同作用的结果。

新德里金属β-内酰胺酶亚型在碳青霉烯类耐药肠杆菌中分布及分子流行病学研究

目的研究临床分离碳青霉烯类抗菌药物耐药肠杆菌科细菌中新德里金属β-内酰胺酶(NDM)及其亚型的分布及流行特点。方法收集医院2014年1月-2015年1月各种临床标本中分离碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌563株,结合改良Hodge试验、EDTA协同及增效试验与PCR扩增检测blaNDM基因;通过肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)及多位点序列分型(MLST)分析菌株之间的同源性,采用药物敏感性试验、接合试验、质粒图谱分析、特异性聚合酶链反应(PCR)扩增和序列分析等技术研究细菌新德里金属β-内酰胺酶耐药的分子机制。结果共筛选出45株产NDM菌株,其中肺炎克雷伯菌38株,包括NDM-1型37株、NDM-5型1株,大肠埃希菌7株,均为NDM-7型;所有菌株呈现多药耐药现象,且每株菌均携带多种耐药基因,其中blaCTX-M、blaTEM、blaSHV、qnrB、qnrS、acc(6′)-Ib、rmtB、armA等为最常见共同携带耐药基因;MLST分型显示,产NDM-1肺炎克雷伯菌主要分布于ST11、ST76、ST495、ST37、ST700及ST395型中,产NDM-5肺炎克雷伯菌仅为ST14型;21株产NDM菌株接合试验阳性,其中包括13株NDM-1型、1株NDM-5型及7株NDM-7型,部分质粒之间有着相似图谱,blaNDM均定位于约46kb大小IncX3质粒上。结论医院已出现多种NDM亚型,主要通过IncX3型质粒在肠杆菌科细菌中传播,存在克隆传播现象;此外,NDM亚型的出现也表明NDM或正处于快速进化过程中而导致其广泛传播。

携带blaIMP-4或blaKPC-2的产新德里金属β-内酰胺酶-1的肠杆菌科菌的基因型检测及其质粒转移传播机制的研究

目的：分析携带blaIMP‐4或blaKPC‐2的产新德里金属β‐内酰胺酶‐1（NDM‐1）的肠杆菌科菌的基因型及其质粒转移传播机制。方法收集2012年4月至2014年10月间浙江省温州市和杭州市5家医院细菌培养非重复菌株中碳青霉烯类耐药（如亚胺培南、美罗培南、厄他培南等耐药）肠杆菌科菌33株，应用全自动微生物分析仪对该类菌株进行鉴定和药物敏感试验。并用改良 Hogde试验、EDTA协同初筛金属酶试验、超广谱β‐内酰胺酶（ESBL）检测（采用美国临床和实验室标准协会推荐的双纸片方法）、高产头孢菌素（AmpC）酶检测（采用头孢西丁三维试验），对试验菌基因包括blaNDM‐1在内及ISAba125‐NDM连锁基因进行 PCR检测，并将扩增产物纯化、克隆后测序，对部分菌株及2株携带blaIMP‐4或blaKPC‐2的产blaNDM‐1基因的肺炎克雷伯菌进行质粒转移、接合与消除试验。结果33株碳青霉烯类耐药的肠杆菌科菌分别为肺炎克雷伯菌28株，产酸克雷伯菌1株，大肠埃希菌2株，植生乌拉尔菌1株，阴沟肠杆菌1株；分别来自浙江大学医学院附属邵逸夫医院13株、温州市中医院13株、温州市人民医院1株、温州医科大学附属第一医院3株、温州市中西医结合医院3株。有31株确定为产碳青霉烯酶，包括 blaKPC‐224株、blaNDM‐13株、blaNDM‐51株、blaIMP‐43株，其中blaNDM‐1阳性菌株中同时携带blaIMP‐4或 blaKPC‐2的各1株，将携带部分阳性基因的菌株与大肠埃希菌 EC600或肺炎克雷伯菌ATCC13833进行质粒转移结合试验，获得结合子进行相应基因检测，均获得相应 blaNDM‐1、ISAba125‐NDM等基因。结论碳青霉烯类耐药肠杆菌科菌中最常见的是 blaKPC‐2型；blaNDM‐1、blaNDM‐5基因与ISAba125‐NDM连锁基因可能有相关；2株 blaNDM‐1型阳性菌株中有1株同时携带 blaKPC‐2型基因、另1株同时携带金属酶blaIMP‐4型基因。由于这些菌株为多重耐药且基因大部分在质粒上，容易在菌株间发生水平传播，应引起临床高度关注。

白血病患者感染产新德里金属β-内酰胺酶大肠埃希菌的临床特征

目的分析白血病患者感染产新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)大肠埃希菌的临床特征及抗感染治疗方案,为临床血液病患者预防"超级细菌"感染及治疗提供帮助。方法采集2014年3例白血病耐碳青酶烯类大肠埃希菌感染患者送检的血液标本,以改良Hodge试验对耐碳青霉烯类肠杆菌进行碳青霉烯酶筛选,PCR特异性扩增及测序进行确认;脉冲场凝胶电泳和多位点序列分析(MLST)技术分析耐药菌株间的亲缘性;并收集感染患者的临床资料,对其临床特征及抗菌药物治疗进行分析。结果 2014年10月检出3例白血病感染产NDM-1大肠埃希菌患者,菌株经测序确认携带NDM-1基因,对常见的临床抗感染药物(包括碳青霉烯类)均耐药,仅对氨基糖苷类药物(阿米卡星)敏感;脉冲场凝胶电泳显示,患者1和患者2所感染细菌同源性100.0%,与患者3同源性也较高;MLST分析3株菌均为ST167型,为同一克隆菌株流行;依据药敏试验抗感染治疗后,1例有效,但出现肾功能异常,1例放弃治疗,1例死亡。结论携带此基因的菌株可能在3例患者间进行了水平传播,使用敏感药物阿米卡星治疗有效,但易出现肾功能损害。

新德里金属β-内酰胺酶的研究进展

新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-lactamase-1,NDM-1)是新近发现的由细菌产生的一种能够水解碳青霉烯类的金属β-内酰胺酶。NDM-1具有强大的水解作用,几乎能抵抗目前使用的所有抗生素,已严重威胁人类健康。本文对NDM-1携带菌的流行现状、NDM-1的基因排布特点、蛋白结构特点及酶活性中心的最新研究进展作一综述。

产新德里金属β-内酰胺酶肠外致病性大肠埃希菌的分子分型

目的对产新德里金属β-内酰胺酶(NDM)的肠外致病性大肠埃希菌(ExPEC)进行多位点序列分型(MLST)和系统发育分群研究。方法收集2016年2月至2018年2月分离自武汉大学人民医院临床送检标本中对亚胺培南和(或)美罗培南敏感性降低(MIC≥2μg/ml)的ExPEC菌株。改良Hodge试验(MHT)对碳青霉烯酶进行表型确证。PCR检测碳青霉烯酶编码基因blaNDM。Sanger测序法检测各碳青霉烯酶基因亚型。采用MLST分型和系统发育分群对PCR检测出的产NDM ExPEC菌株的分子流行病学特征进行分析。结果共收集到对碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低的ExPEC菌株20株,其中产NDMExPEC菌株15株。MHT检测产NDMExPEC菌株的敏感度和特异度分别为93.3%(14/15)和80.0%(12/15)。15株产NDM ExPEC菌株中11株(73.3%)产NDM-5型,4株(26.7%)产NDM-1型。系统发育分群结果显示,15株产NDM ExPEC菌株中,13株属于A群,2株属于D群。MLST分型结果显示,ST410是产NDM ExPEC菌株中检出率最高的ST型(5株,33.3%)。结论本院绝大多数产NDM ExPEC菌株属于毒力较小的系统发育群,应加强院感监测,防止高危克隆ST型的暴发流行。

肺炎克雷伯菌新德里金属β-内酰胺酶结构功能分析

目的:描述新出现的肺炎克雷伯菌超级耐药酶-新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)氨基酸序列的结构功能特征,及时提供潜在有用的超抗细菌诊断、预防、抗生素的协同治疗药物研制和分子流行病学信息。方法:采用生物信息频谱分析平台,对NDM-1氨基酸序列进行结构和功能及活性多肽特性的研究,包括ClustalW、MEGA、Modeller和PyMOL等方法。结果:NDM-1的核苷酸和氨基酸序列与亲缘关系较近的意大利维罗纳金属β-内酰胺酶(VIM-1)的相似性分别为44.6%和32.6%,同源性较低。所分析的NDM-1的270个氨基酸区域有共同的信息频谱特征,其主峰特征为F(0.20743,),显示了NDM-1的共同作用模式。对NDM-1预测的N110D和D199G氨基酸残基变异明显增加了F(0.2074)的特征峰高,可能对抗生素作用的模式有较大正影响;预测的G69D和D192G氨基酸残基变异明显减小了F(0.2074)的特征峰高,可能对抗生素作用的模式有较大负影响。NDM-1的78-104位区域是细菌/抗生素反应活性热点,它的许多残基分布在该酶同源建模3D结构的表面。同源建模显示NDM-1特有的4个氨基酸短肽在该酶3D结构的表面。NDM-1和金属锌离子的结合位点具有金属β-内酰胺酶B1亚型的保守性。结论:这些数据和信息较深层次地显示了新出现的NDM-1酶的结构和功能特点、相关的氨基酸的预测变异和活性多肽的同源建模的3D分布。可为今后预防和处置NDM超抗细菌的感染和流行,扩展鉴别潜在的治疗和诊断的分子靶标,提供分子生物学基础。

新德里金属β-内酰胺酶基因序列比对与蛋白分子结构

目的分析不同来源细菌新德里金属β-内酰胺酶(NDM)编码基因序列的相似性和同源性,并分析其蛋白分子结构。方法在GenBank中检索目前已经注册的NDM编码基因序列88个(包括NDM-1～NDM-6),利用ClustalW2生物软件在线分析NDM基因序列的相似性和同源性,建立基因进化树,分析编码基因序列的特点;利用ESyPred3D软件构建三维结构图,并用Molsoft ICM-Pro软件进行编辑处理。结果 88个NDM编码基因是完全一致的长度为813 bp的基因序列,具有很高的同源性;NDM蛋白由270个氨基酸组成并借助Zn2+和枸橼酸维持其分子空间结构。结论 NDM编码基因具有很高的同源性,本研究成功构建了NDM的三维结构图,为NDM宿主菌基于NDM核酸序列的分子生物学快速检测和其对各种抗生素产生耐药的机制研究奠定了理论基础。