新德里金属β-酰胺酶基因特征

目的:研究新德里金属β-酰胺酶(NDM-1)基因的特征,分析其可能的来源。方法:在美国生物信息中心(NCBI)检索NDM-1基因,使用Blast生物学软件对检索到的基因与GenBank进行比对。使用ClustalW2.0生物学软件,对5条NDM-1基因和30条各亚型β-内酰胺酶基因进行多序列比较。结果:在NCBI中检索到3条NDM-1基因,与GenBank比较后共发现9条基因序列与NDM-1基因同源性较高,其中2条为两株海洋细菌的部分基因序列(同源性达69%和70%)。选择5条NDM-1基因与30条β-内酰胺酶基因进行多序列比较,同源性均很低,在基因进化树上NDM-1基因与β-内酰胺酶基因位于不同分枝。结论:NDM-1基因并非来源于β-内酰胺酶基因,NDM-1基因可能与两株海洋细菌有一定的亲缘关系。

海南地区多重耐药肠杆菌科细菌产NDM-1酶现状调查

目的了解海南地区多重耐药肠杆菌科细菌产新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1酶)现状,为临床做好预防和控制提供依据。方法收集海南地区2012年8月至2013年8月临床分离的多重耐药肠杆菌科细菌425株,采用Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和药敏试验,对亚胺培南最低抑菌浓度(MIC)≥2μg/mL的菌株采用双纸片增效试验进行NDM-1表型确认,PCR特异性扩增blaNDM-1基因,并对扩增产物进行测序和BLAST比对分析。结果 425株多重耐药肠杆菌科细菌中,大肠埃希菌271株,占63.8%;肺炎克雷伯菌69株,占16.2%;阴沟肠杆菌41株,占9.6%;其他肠杆菌44株,占10.4%。经表型筛查对亚胺培南MIC≥2μg/mL的菌株有38株,双纸片增效试验有18株阳性,其中11株在约813 bp处扩增出blaNDM-1基因目的条带,经测序和比对结果证实为blaNDM-1基因。结论海南地区多重耐药肠杆菌科细菌中检到blaNDM-1基因,临床应加强合理用药并做好预防和控制工作。

毛细管直接PCR方法快速鉴定NDM-1阳性细菌

目的建立一种无需核酸提取预处理的毛细管PCR方法,用于新德里金属酰胺酶(NDM-1)阳性细菌的快速鉴定。方法考察在直接加入细菌培养液条件下,两种改良型DNA聚合酶Terra和MightyAmp DNA聚合酶对NDM-1编码基因的扩增效果。选用其中一种DNA聚合酶进行毛细管PCR,确定其对于NDM-1阳性细菌的检测限。结果当分别向25 μLPCR反应体系加入1、3、5、7μL细菌培养液条件下,两种DNA聚合酶均能有效扩增NDM-1编码基因序列,Terra DNA聚合酶效果较好。采用两步法毛细管PCR扩增NDM-1编码基因,3 μL反应体积条件下,40个循环反应在20 min内完成。结论应用改良型DNA聚合酶可以免去细菌核酸纯化步骤直接进行PCR。免核酸提取扩增结合毛细管PCR方法可以显著缩短核酸分析时间,适合于NDM-1阳性细菌的快速鉴定。

多粘菌素临床应用进展及应对超级细菌

随着抗菌药物和免疫抑制药的广泛应用,多药耐药或泛耐药革兰阴性菌,尤其是耐药鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷白杆菌已成为引起严重致死性院内感染的重要病原菌。最近国际上又发现了新的含泛耐药革兰阴性菌"新德里-金属-β-酰胺酶-1(NDM-1)"基因的耐药菌(所谓"超级细菌")。该菌对目前大多数抗菌药物包括β-内酰胺类、碳青霉烯类、氨基苷类、大环内酯类和喹诺酮类等抗菌药物具有广泛耐药性,仅对多粘菌素和替加环素敏感。后者目前在我国尚未上市。一旦患者感染这种细菌,会给临床治疗带来很大困难。该文介绍老药多粘菌素的药理作用和临床用于治疗多药耐药和泛耐药革兰阴性菌感染的进展。

芯片电泳在免核酸提取PCR产物分析中的应用

目的探讨两种免核酸提取试剂联合应用DNA芯片电泳是否能快速、准确地用于新德里金属酰胺酶(NDM-1)阳性细菌的鉴定,了解该联合检测方法在流行病病原体快速鉴定中的应用价值,为流行性病原体的快速鉴定提供便捷手段。方法取1个(或0.1个)麦氏单位NDM-1(+)菌液加入免核酸提取试剂后直接进行PCR扩增,扩增产物用自制的芯片电泳进行产物分析,通过样品迁移时间与标准品比较精确计算出目的基因片段长度并大致推算产物的含量。结果两种免核酸提取试剂联合芯片电泳分析技术能快速、准确、高效地扩增出新德里金属酰胺酶NDM-1(+)细菌的目的基因片段,尤其湖南某厂家的试剂灵敏度更高。结论该联合检测方法在流行病尤其是突发性病原体的快速鉴定、监测中具有潜在的临床应用价值。