新狼毒素B及其衍生物的抑菌活性研究

采用药敏纸片法对新狼毒素B(化合物1)及其羟基取代产物(化合物2)、羰基还原产物(化合物3)和狼毒色原酮(化合物4)、青霉素钠(化合物5)、头孢哌酮钠(化合物6)进行抑菌活性检测和比较.结果发现,化合物1和化合物2对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌5种供试菌均有不同程度的抑菌活性,即二者对革兰氏阳性菌和阴性菌均有活性,其中化合物1较化合物2的活性更强.化合物1～化合物5对4种球菌的抑菌活性大小次序为5＞1＞3＞4＞2.化合物1～化合物4、化合物6对大肠杆菌的活性大小为6＞3＞1＞2＞4.从而初步得出新狼毒素B分子中羟基为主要活性基团,另外,其经过羰基还原后虽然对4种球菌的抑菌活性有轻微的降低,但是对大肠杆菌的活性增强了,也就是说其抑菌活性的选择性提高了.

新狼毒素B的抑菌活性构效关系研究

以新狼毒素B为原料,以硼氢化钠为还原剂,以溴乙酸为羧基甲基醚化试剂,分别合成出2种羰基还原产物F1和F1-0及2种羧甲醚化产物B1和B2。选择金黄色葡萄球菌、乳房链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌和沙门氏菌为供试菌,采用药敏纸片法对新狼毒素B及其4种衍生物进行了抑菌活性测定。结果表明,与新狼毒素B相比,F1对所有供试菌的抑菌活性有一定程度增加,F1-0的抑菌活性有微小减弱,B1和B2对5种菌的抑菌活性均明显减弱。初步说明新狼毒素B分子中的7,7,″4,′4 4个酚羟基中的2个为主要活性基团,且不同活性基团对新狼毒素B的抑菌活性的选择性影响很大;羰基不是新狼毒素B的主要活性基团。

狼毒乙素和新狼毒素A的抗肿瘤作用

目的:观察狼毒乙素(ECB)对U_(14)宫颈癌的荷瘤小鼠,以及新狼毒素A对雄激素非依赖性前列腺癌(AIPCa)裸鼠移植瘤的抑制作用。方法:①U_(14)宫颈癌的腋下移植瘤小鼠各50只,各随机分成5组,实验组灌胃分别给予狼毒乙素(ECB)高、中、低组(12、10、8 mg/kg),阳性药组灌胃给予环磷酰胺(50 mg/kg),模型组给予等量生理盐水,给药14 d后处死动物剥离瘤组织称质量,计算抑瘤率。②雄性裸小鼠20只,皮下接种DU-145细胞,随机分成用药组和对照组。于癌细胞种植第2天起,对照组每天喂饲0.9%氯化钠溶液,用药组每天喂饲新狼毒素A 15mg·kg^(-1)·d^(-1)。记录用药第2~7周末时移植瘤的平均体积。结果:①狼毒乙素(ECB)高、中、低剂量组对小鼠U_(14)宫颈癌的抑瘤率分别为66.40%,49.61%,44.14%;②用药组裸小鼠移植瘤的生长明显受到抑制,第3周末至第7周末的移植瘤体积均显著小于对照组(P值均<0.001)。第7周结束时与对照组比较,用药组的生长抑制率达到65.34%。结论:狼毒乙素(ECB)对小鼠宫颈癌U14有显著抑制作用;新狼毒素A可以显著抑制DU-145肿瘤的生长,提示该药对AIPCa有抗癌活性。

新狼毒素A诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡的机制研究

为探讨新狼毒素A抑制人黑色素瘤A375细胞增殖及诱导凋亡的作用。本实验采用噻唑蓝(MTT)法检测新狼毒素A对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响,Hoechst33258法观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位,Westernblot检测凋亡相关蛋白表达。结果显示新狼毒素A以时间剂量依赖性的方式显著抑制A375细胞的增殖;不同浓度新狼毒素A(0、15、30、45μmol/L)作用于A375细胞48h后细胞出现显著凋亡特征,新狼毒素A增加A375细胞的凋亡率且降低了线粒体膜电位,上调Bax、caspase-3和细胞色素C(CytochromeC)蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。以上结果说明新狼毒素A抑制A375细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与诱导线粒体途径的凋亡有关。

新狼毒素A对人肝癌Hep G2细胞糖酵解的影响

目的研究新狼毒素A对Hep G2细胞糖酵解的影响。方法SRB法检测新狼毒素A对Hep G2细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测细胞形态变化以及对细胞增殖的影响;试剂盒法检测新狼毒素A对Hep G2细胞三磷酸腺苷(ATP)含量的影响,试剂盒法检测新狼毒素A对细胞上清液中乳酸含量(LD)和葡萄糖含量的改变,以及新狼毒素A对细胞中己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响。结果新狼毒素A(0,20,40,80μg/m L)显著抑制Hep G2细胞的增殖且呈剂量依赖性;不同浓度的新狼毒素A作用48 h后,细胞中ATP含量逐渐降低,细胞上清液中葡萄糖含量逐渐增大和乳酸含量逐渐减小;糖酵解相关酶(PK和LDH)的活性也逐渐下降。结论新狼毒素A能够影响Hep G2细胞糖酵解水平,其机制可能与减少葡萄糖摄取,抑制糖酵解关键酶有关。

新狼毒素B抑菌活性构效关系的进一步研究

【目的】进一步研究新狼毒素B的抑菌活性构效关系。【方法】以新狼毒素B为原料,合成了7″-甲氧基（A2-1）、7,7″-二甲氧基（E3）和7,7,″4-三甲氧基（E1）3个新狼毒素B甲醚化产物及4-亚甲基新狼毒素B（D3）,利用ESI-MS1、H NMR和13C NMR对其结构进行了表征。选择金黄色葡萄球菌（S.aureas）、无乳链球菌（S.agalactiae）、大肠杆菌（E.coli）和沙门氏菌（Samonellal）为供试菌,采用药敏纸片法对新狼毒素B及其4种衍生物进行了抑菌活性测定。【结果】4种修饰物对所有供试菌的抑菌活性均小于新狼毒素B;3种甲醚化产物在质量浓度为0.625-5mg/mL时,对沙门氏菌没有抑菌活性;对于其他3种供试菌,各供试物的抑菌活性次序为新狼毒素B≈D3〉A2-1〉E3〉E1。【结论】新狼毒素B分子中,7-OH和7-″OH是其主要抑菌活性基团,4′-OH和4-OH对抑菌活性的贡献较小,4-羰基不是主要抑菌活性基团。

新狼毒素A抑制小鼠黑色素瘤B16F10细胞糖酵解和迁移

目的研究新狼毒素A(Neochamae jasmin A,NCA)在体外对小鼠黑色素瘤B16F10细胞糖代谢及迁移的影响。方法采用黄酰罗丹明B(SRB)法检测NCA对细胞增殖的影响;采用划痕实验检测NCA对细胞迁移的影响;利用试剂盒检测NCA对B16F10细胞中乳酸(LD)水平、葡萄糖摄取量和ATP含量的改变及对己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响;利用RT-PCR法检测糖酵解及迁移相关基因的表达。结果NCA显著抑制小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖和细胞划痕愈合,下调MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,上调TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达;下调GLUT1、PKM2、LDHA mRNA的表达,浓度依赖性的抑制ATP的产生和乳酸的释放,减少葡萄糖的摄取,降低糖酵解关键酶HK、PK、LDH的活性。结论推测NCA抑制B16F10细胞增殖和迁移可能与调节肿瘤细胞糖酵解有一定相关性。

3%新狼毒素B水乳剂防治水稻稻瘟病的田间药效研究

进行了3%新狼毒素B水乳剂防治水稻稻瘟病的田间药效试验。结果表明:3%新狼毒素B水乳剂对水稻稻瘟病菌防治效果较好,对叶瘟和穗瘟防效分别达87.82%和86.30%。

瑞香狼毒根的抑菌活性成分研究(Ⅱ)

采用生物活性跟踪法 ,首次从瑞香狼毒根中分离出两个具有广谱性杀菌活性的物质 ,通过波谱分析分别鉴定为新狼毒素 B和狼毒色原酮 .生测结果表明 ,两个化合物在 2 2 0 0 m g· L- 1浓度对苹果干腐病菌、小麦赤霉病菌、蕃茄早疫病菌、南瓜枯萎病菌、玉米大斑病菌。

高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定瑞香狼毒5种黄酮类成分的含量

目的建立高效液相色谱(HPLC)梯度洗脱方法同时测定瑞香狼毒中狼毒色原酮、新狼毒素A、狼毒素、异狼毒素及7-甲氧基新狼毒素A 5种黄酮类成分的含量。方法采用HPLC-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18 (3.0 mm×100 mm,3.5μm);流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为纯乙腈,洗脱梯度为0~6 min 20%B、6~10 min 20%~35%B、10~50 min 35%B;流速为0.4 mL/min;平衡时间设置为10 min;采集时间为50 min;柱温为25℃;DAD检测波长为290 nm;进样量为5μL。结果狼毒色原酮、新狼毒素A、狼毒素、异狼毒素及7-甲氧基新狼毒素A在该条件下分离良好,分别在4.680~468.0、2.016~201.6、3.784~378.4、5.520~552.0、0.974~97.40μg/mL浓度范围内线性关系良好,且其精密度、稳定性、重复性和回收率均良好。结论 HPLC-DAD法稳定性、重复性好,可用于测定瑞香狼毒中狼毒色原酮、新狼毒素A、狼毒素、异狼毒素及7-甲氧基新狼毒素A 5种黄酮类成分的含量。

瑞香狼毒中的化学成分研究

目的 分离鉴定瑞香狼毒的化学成分。方法 乙醇提取 ,超声提取 ,硅胶柱层析分析 ,采用IDNMR ,2DNMR及MS方法确定结构。结果 分得 5个化合物 ,经光谱数据的分析 ,分别鉴定为新瑞香素 (Ⅰ ) ,β 谷甾醇 (Ⅱ ) ,伞形花内酯 (Ⅲ )、东莨菪素(Ⅳ )和胡萝卜苷 (Ⅴ )。

新狼毒素B及其混剂对植物病原菌的毒力测定

测定了新狼毒素B单剂及其分别与3种对照药剂混配对常见的3种植物病原真菌的室内毒力。结果表明,新狼毒素B对水稻稻瘟病病菌的EC50为36.14μg/mL,与三环唑混配的EC50为5.10μg/mL;新狼毒素B对辣椒疫霉菌的EC50为277.45μg/mL,与烯酰吗啉混配的EC50为0.74μg/mL;新狼毒素B对苹果炭疽病病菌的EC50为71.88μg/mL,与丙环唑混配的EC50为0.40μg/mL。新狼毒素B的加入,对3种对照药剂的毒力均具有明显的增效作用。