基于网络药理学研究红景天苷治疗新生小鼠缺氧缺血性脑损伤的作用机制

目的采用网络药理学和实验验证探讨红景天苷治疗新生小鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的作用机制。方法利用PubChem、pharm Mapper、Swiss Target Prediction和Similarity Ensemble Approach数据库检索并预测红景天苷作用靶点,借助DisGeNET、GeneCards和OMIM数据库获得HIBD疾病作用相关靶点,绘制韦恩图确定交集基因;将交集基因导入STRING平台构建蛋白质相互作用网络,结合STRING数据库和Cytoscape软件做可视化处理,筛选作用靶点,通过拓扑网络分析得到核心靶点;利用DAVID数据库行潜在作用靶点GO功能和KEGG通路富集分析。构建新生小鼠HIBD模型,设置假手术组、缺氧缺血组、安慰剂组和红景天苷组,分别采用TTC染色和HE染色评估新生小鼠脑损伤;借助Western blot检测与细胞凋亡相关蛋白及PI3K/Akt信号相关蛋白的表达;利用Y迷宫实验、拉力测试和角落实验验证红景天苷改善小鼠行为学表现的效果。结果网络药理学分析显示,共筛选获得有效药物靶点176个,有效疾病靶点2173个,“药物-疾病”交集靶点61个,核心靶点10个;KEGG通路富集分析发现红景天苷的作用机制与PI3K/Akt信号通路相关;动物实验发现,与缺氧缺血组比较,红景天苷可促进HIBD小鼠p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt表达,提升Bcl-2/Bax表达水平,抑制Cleaved-caspase-3的表达,减轻皮层神经元和海马神经元损伤,减少小鼠HIBD诱导的脑梗死体积和脑萎缩,提高小鼠记忆和运动能力(P<0.05,P<0.01)。结论红景天苷通过激活PI3K/Akt信号通路改善神经元凋亡,可用于治疗新生小鼠HIBD。

新生小鼠缺氧缺血性脑损伤模型的建立

目的对经典Vannucci法进行改进,建立一种简便、稳定的新生小鼠缺血缺氧脑损伤模型。方法将新生11 d的KM小鼠分为正常对照组(N组,n=20)和缺血缺氧组(HIBD组,n=160),对HIBD组行左侧颈总动脉结扎,分别按照C1-C8条件缺氧建模。建模后通过比较各条件下小鼠死亡率、建模成功率和TTC染色脑梗死体积,选取最稳定的建模条件。建模后利用体重生长曲线分析小鼠生长发育情况;Longa、Grip test、悬吊试验评估小鼠神经运动功能;HE染色观察脑组织病理改变。结果新生小鼠行左侧颈总动脉结扎,8% O_2、35℃条件下缺氧45min,死亡率低(8.3%)且成模率高(47.92%);HIBD组较N组小鼠体重增长缓慢并出现严重的神经运动功能障碍;结扎侧出现脑梗死区,约占全脑体积(17.76±0.70)%;结扎侧大脑皮层及海马区神经元出现变性坏死。结论本实验采用新生小鼠行左侧颈总动脉结扎,在8%O2、35℃条件下缺氧45 min复制HIBD动物模型,简便且稳定性好,是用于新生儿缺血缺氧性脑损伤研究较为理想的动物模型。

热敏灸对新生小鼠缺氧缺血性脑损伤抗凋亡作用的研究

目的:探讨热敏灸对新生小鼠缺氧缺血性脑损伤的抗凋亡作用及机制。方法:出生7 d的新生小鼠,随机分为假手术组、模型组和艾灸组,其中艾灸组根据艾灸前后尾温的变化,再分为非热敏灸组和热敏灸组。采用右侧颈总动脉结扎联合缺氧的方法制备缺氧缺血性脑损伤新生小鼠模型,HE染色观察脑组织形态结构,TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡,免疫组织化学法检测caspase-9表达,放射免疫分析法测定脑组织caspase-3含量。结果:与假手术组相比,模型组小鼠脑梗死灶增大,脑组织排列疏松,脑组织凋亡细胞数和caspase-9表达显著增多(P<0.05),caspase-3含量增加;与模型组相比,非热敏灸组和热敏灸组小鼠脑梗死灶均缩小,脑组织排列较致密,脑组织凋亡细胞数和caspase-9表达均减少(P<0.05),caspase-3含量显著减少(P<0.05),尤以热敏灸组更为明显。结论:热敏灸可能通过降低脑组织caspase-9表达和减少caspase-3含量,减少细胞凋亡,从而达到减轻新生小鼠缺氧缺血性脑损伤。

水苏碱调节Hippo-YAP信号通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的探究水苏碱(stachydrine,STA)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠的神经保护作用,并分析其作用机制。方法将新生SD大鼠随机分为假手术组、HIBD组、STA低剂量(5 mg/kg)组、STA中剂量(10 mg/kg)组、STA高剂量(20 mg/kg)组、维替泊芬(10 mg/kg)+STA高剂量(20 mg/kg)组,除假手术组外,其余大鼠构建HIBD大鼠模型。对各组大鼠进行神经功能缺损评分,采用Morris水迷宫实验进行认知功能评价,测定各组大鼠脑含水量和脑指数,HE染色、尼氏染色观察脑组织神经元损伤,TUNEL染色观察脑组织神经元细胞凋亡情况,Western blot法检测YES相关蛋白(YES associated protein,YAP)、p-YAP、哺乳动物STE20样蛋白激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)、p-MST1、具有PDZ基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)蛋白表达。结果与假手术组比较,HIBD组海马组织损伤加重,尼氏小体减少(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著增加(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著降低(P<0.05);与HIBD组相比,STA低、中、高剂量组海马组织损伤改善,尼氏小体增加(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著降低(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著增加(P<0.05);与STA高剂量组相比,维替泊芬+STA高剂量组海马组织损伤加重,尼氏小体减少(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著增加(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著降低(P<0.05)。结论STA可能通过调控Hippo-YAP信号通路、减少神经损伤和神经元细胞凋亡、改善神经功能,发挥对HIBD新生大鼠的神经保护作用。

基于NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡探讨针康法对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的影响

目的:观察针康法对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠神经元NLRP3炎症小体及细胞焦亡的影响,探讨其改善缺氧缺血性脑损伤后运动功能缺损的可能机制。方法:选择120只7 d龄大鼠分为正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、头穴丛刺组(C组)、康复训练组(D组)和针康组(E组),再均分为24 d、7 d和14 d 3个时间点。结扎颈总动脉构建HIBD动物模型。C组针刺百会以及左右各旁开2 mm处,1次/d,每次留针2 h;D组进行转笼转棒训练,1次/d,10 min/次;E组在头穴丛刺的基础上进行转笼转棒训练。在各时间点,采用网屏实验评定运动功能缺损,TUNEL+Caspase-1免疫荧光双标法观察海马区神经细胞焦亡的情况,蛋白印迹法检测海马区NLRP3、Caspase-1和GSDMD-N端蛋白表达。结果:相较于A组,经缺氧缺血造模处理的4组在各时间点网屏实验评分和海马区神经细胞焦亡率均显著升高,NLRP3、Caspase-1和GSDMD-N端蛋白的表达显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05);相比较B组,各治疗组在各时间点网屏实验评分和海马区神经细胞焦亡率均显著减少,NLRP3、Caspase-1和GSDMD-N端蛋白的表达水平降低,其中E组的疗效最明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:针康法可改善HIBD新生大鼠的运动功能缺损,且疗效优于单纯针刺或康复疗法,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡有关。

β淀粉样蛋白对缺氧缺血性脑损伤新生鼠神经元凋亡影响的实验研究

目的:通过建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,以β淀粉样蛋白(Aβ)为切入点,研究其在模型的表达以及与神经元凋亡的关系,探讨Aβ在新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型中对神经元的作用及机制。方法:建立10日龄新生大鼠缺血性脑损伤模型,模型后2、4、8、24 h心脏灌注,分别检测脑组织中Aβ、脑内淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶(BACE1)、Caspase-3、Cleaved caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达,BACE1的mRNA表达。使用BACE1抑制剂干预,实验分为三组,缺氧缺血组、抑制剂组和溶剂组,抑制剂组在缺氧缺血后即给予BACE1抑制剂AZD3293处理24 h后再次检测以上指标。结果:APP、Aβ的蛋白表达、BACE1的蛋白表达和mRNA水平在建模后呈时间依赖的上升,24 h达到高峰。同时,促凋亡蛋白Cleaved caspase-3在建模后也呈时间依赖的上升,24 h达到高峰。而在缺氧缺血2 h后,凋亡抑制蛋白Bcl-2的蛋白水平显著升高(P<0.05)。之后逐渐降低,24 h最低。当使用BACE1抑制剂后,Aβ及BACE1在脑组织中的表达显著下降(均P<0.05),而BACE1mRNA的表达没有变化(P>0.05)。同时促凋亡蛋白Cleaved caspase-3的表达明显下降(P<0.05),同时,Bcl-2蛋白的表达也显著升高(P<0.05)。结论:在新生鼠HIBD时Aβ产生增多,应用BACE1抑制剂可降低Aβ的表达,增加Bcl-2的表达,减轻神经元凋亡。

姜黄素改善缺氧缺血性脑损伤新生大鼠远期神经行为缺陷的机制

目的探讨姜黄素减轻缺氧缺血性脑损伤新生大鼠相关神经炎性反应的作用机制并且评估其对缺氧缺血性脑损伤远期神经行为的影响。方法2023年1—6月在武汉大学人民医院中心实验室进行实验。选用7日龄新生SD大鼠66只,采用随机数字表法分为假手术组(n=22)、缺氧缺血脑损伤组(HIBD组,n=22)和缺氧缺血脑损伤+姜黄素组(HIBD+姜黄素组,n=22)。造模后24 h采用Longa评分评估造模是否成功,造模后48 h通过负性趋地反射、翻正反射评估短期神经行为;4周后采用圆筒实验、水迷宫实验、转角实验、爬杆实验评估远期神经行为;采用ELISA试剂盒检测脑组织炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)水平;采用Western-blot法检测脑组织蛋白(STAT3、p-STAT3)水平。结果造模24 h后,HIBD组(n=18)与HIBD+姜黄素组(n=15)新生大鼠Longa评分为1~3分提示造模成功。短期行为学评估表明,与HIBD组比较,HIBD+姜黄素组负性趋地反射和翻正反射时间缩短(P<0.05)。远期神经行为学评估表明,与HIBD组比较,HIBD+姜黄素组圆筒实验大鼠左前肢使用率明显增加、水迷宫实验穿越平台潜伏期缩短、穿越平台象限次数增加、转角实验右转得分率减少、爬杆实验中爬杆时间缩短(P<0.01)。ELISA检测显示,与HIBD组比较,HIBD+姜黄素组脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6水平下降(P<0.05)。蛋白免疫印迹技术显示,与HIBD组比较,HIBD+姜黄素组脑组织中p-STAT3/STAT3水平降低(P<0.01)。结论姜黄素可通过抑制STAT3磷酸化介导的神经炎性反应并改善缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经行为学缺陷。

褪黑素通过PI3K/AKT通路减轻缺氧缺血性脑损伤新生大鼠大脑皮层神经细胞自噬的研究

目的 观察褪黑素(melatonin,Mel)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠大脑皮层神经细胞自噬的影响,并从PI3K/AKT信号通路探讨其机制,为Mel的临床应用提供依据。方法 将7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组、HIBD组及Mel组(各组n=9)。采用经典RiceVannucci法构建新生大鼠HIBD模型。采用苏木精-伊红和尼氏染色法观察新生大鼠大脑皮层神经细胞形态;免疫荧光染色和Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3 (microtubule-associated protein 1 light chain3,LC3)及Beclin-1蛋白表达水平;免疫组化和Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphoinositide 3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (phosphorylated protein kinase B,p-AKT)蛋白表达水平;通过Pearson相关性分析探讨Mel组与HIBD组自噬与PI3K通路的相关性。结果 建模后24h,假手术组新生大鼠大脑皮层神经细胞大小形态正常、排列规则,HIBD组神经细胞胞体肿胀、排列不规则,Mel组神经细胞排列较规整、形态相对正常。假手术组尼氏小体形态规整,HIBD组尼氏小体形态异常,Mel组尼氏小体形态尚规整。HIBD组LC3及Beclin-1平均荧光强度较假手术组增加,Mel组较HIBD组减少(P<0.05)。HIBD组p-PI3K^(+)、pAKT^(+)细胞数较假手术组减少,Mel组较HIBD组增加(P<0.05)。HIBD组LC3、Beclin-1蛋白表达水平较假手术组增加,p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平较假手术组减少(P<0.05);Mel组LC3、Beclin-1蛋白表达水平较HIBD组减少,p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平较HIBD组增加(P<0.05)。相关性分析显示,Mel组与HIBD组损伤侧大脑皮层LC3、Beclin-1蛋白平均荧光强度差值与p-PI3K^(+)、p-AKT^(+)细胞数差值均呈负相关(P<0.05)。结论 Mel可抑制HIBD新生大鼠大脑皮层神经细胞过度自噬,从而减轻HIBD,其机制与PI3K/AKT通路相关。

藁本内酯抑制缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织凋亡相关蛋白的表达

目的:通过检测体内外缺氧缺血条件下NOD样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、GSDMD-N蛋白水平评价藁本内酯(LGSL)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的神经保护作用。方法:选取7日龄SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、HIBD组和LGSL组各10只,采用左颈总动脉双重结扎构建HIBD模型,体外建立小胶质细胞氧糖剥夺(OGD)模型(OGD/R)。采用CCK-8评估不同浓度LGSL干预24 h对OGD/R小胶质细胞活力的影响;通过免疫印迹评估20μM LGSL对体内外缺氧缺血条件下NLRP3、Caspase1、IL-1β、GSDMD-N表达的影响。结果:在体内外模型中,NLRP3、IL-1β、Caspase1及GSDMD-N表达均上调(P<0.05);20μM LGSL干预24 h后,NLRP3、IL-1β、Caspase1及GSDMD-N表达均下调(P<0.05)。结论:LGSL可以显著抑制新生大鼠体内外因缺氧缺血引起的神经炎症反应。

LncRNA MEG3靶向调节miR-17-5p对缺氧缺血性脑损伤新生小鼠血-脑屏障的影响

目的探讨LncRNA MEG3通过调节miR-17-5p对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生小鼠血-脑屏障的影响。方法90只C57BL小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、si-NC组、si-LncRNA MEG3组、si-LncRNA MEG3+anti-miR-NC组、si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组,每组15只。除对照组外,其余组小鼠构建HIBD模型,并采用Longa评分评估小鼠神经损伤情况;电镜观察脑组织周围血管内皮细胞超微结构;EB法测定小鼠血-脑屏障通透性;qRT-PCR法测定各组小鼠脑组织LncRNA MEG3、miR-17-5p水平;Western blotting法测定小鼠脑组织ZO-1、Occludin蛋白水平。结果与对照组相比,模型组小鼠血管内皮薄厚不均、多处呈现水肿状态;与模型组相比,si-LncRNA MEG3组小鼠血管内皮细胞逐渐连接紧密、薄厚较为均匀,水肿减少;与si-LncRNA MEG3组相比,si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组血管内皮细胞损伤加剧。与对照组相比,模型组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平显著升高,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。与模型组相比,si-NC组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平、miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),si-LncRNA MEG3组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平显著降低,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著升高(均P<0.05)。与si-LncRNA MEG3组相比,si-LncRNA MEG3+anti-miR-NC组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平、miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量显著升高,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论LncRNA MEG3沉默可能通过上调miR-17-5p,降低HIBD新生小鼠血-脑屏障通透性,维持血-脑屏障对大脑的保护作用,保护脑组织。

袋鼠式护理联合被动康复训练在新生儿缺氧缺血性脑病中的应用

目的:探究袋鼠式护理(Kangaroo mother care,KMC)联合被动康复训练在新生儿缺氧缺血性脑病(Hypoxieischemic encephalopathy,HIE)患儿中的应用效果。方法:选取2020年3月至2021年12月于我院就诊的80例HIE患儿作为研究对象。按随机数字表法分为对照组和观察组,每组各40例。对照组采取常规护理联合被动康复训练,观察组采取KMC联合被动康复训练。分析比较两组的神经行为、神经系统后遗症发生率以及护理满意度。结果:护理后,两组的新生儿神经行为测定量表(Neonatal Behavioral Assessment Scale,NBNA)评分均高于护理前;并且观察组高于对照组(P<0.05)。观察组神经系统后遗症总发生率低于对照组(P<0.05)。观察组患儿家长满意度高于对照组(P<0.05)。结论:KMC联合被动康复训练可改善HIE患儿的神经行为,降低神经系统后遗症发生率,提高患儿家长的满意度。

新生儿缺氧缺血性脑病磁共振检查特点及与脑损伤的相关性分析

目的 探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)磁共振(MRI)检查特点及与脑损伤的相关性。方法 回顾性选择2018年3月到2023年3月我院收治的115例足月HIE患儿,依据HIE临床分度分为轻度组(n=41)、中度组(n=53)重度组(n=21)。比较三组患者的一般资料、MRI影像学评分、表观弥散系数(ADC);采用Pearson相关性检验分析各部位MRI影像学评分与脑损伤的相关性,通过受试者工作特征(ROC)曲线验证各表观弥散系数(ADC)诊断脑损伤风险的预测价值。结果 三组在性别、胎龄、出生体质量、分娩方式、母体妊娠期合并症、围产期情况、灰白质分界模糊、深部白质侧脑室壁、皮层及以下点状和T_(1)WI高信号的临床资料差异无统计学意义(P>0.05)。三组患儿双侧丘脑-基底节区不对称性、脑内静脉扩张、颅内出血差异有统计学意义(P<0.05)。三组MRI影像学评分的分水岭区、基底节/丘脑、内囊后肢、脑干、综合评分均随着脑损伤程度加深而增高,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson分析结果显示,分水岭区、基底节/丘脑、内囊后肢、脑干和综合评分与脑损伤程度均呈正相关性(P<0.05)。三组患儿腹外侧丘脑ADC值均随着10^(th)ADC~90^(th) ADC逐渐升高。重度组60^(th) ADC~90^(th) ADC、ADC_(max)、ADC_(min)、ADC_(mean)均大于中度组和轻度组,中度组患儿60^(th) hADC~90^(th)ADC、ADC_(max)、ADC_(min)、ADC_(mean)均大于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC分析结果显示,90^(th) ADC的AUC最大0.895(95%CI:0.762~0.965),C-ind ex=0.876(95%CI:0.781~0.997),以848.19为最佳截点,灵敏度为85.78%,特异度为90.36%。MRI影像综合评分联合90^(th) ADC值诊断HIE患儿脑损伤程度的灵敏度(89.77%)高于二者分别单独诊断的灵敏度(70.71%和73.28%)。结论 HIE患儿双侧丘脑-基底节区不对称性、脑内静脉扩张、颅内出血与脑损伤程度有关,MRI影像学评分与脑损伤程度呈正相关性,MRI影像综合评分联合90^(th) ADC值诊断HIE患儿脑损伤程度灵敏度89.77%。

鼠神经生长因子在新生儿缺氧缺血性脑病中的应用

目的探究鼠神经生长因子在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)中的应用价值。方法回顾性分析选取2019-01-01—2023-12-01中国人民解放军联勤保障部队第九八九医院收治的132例HIE病患儿临床资料。对照组76例,采用单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液干预,试验组56例,采用鼠神经生长因子干预。比较2组患儿临床治疗效果与康复指标[肌张力恢复、意识恢复、意识反射恢复、吸吮恢复时间、住院时间]及治疗前、后血气指标[动脉血氧分压(PaO_(2))、pH值、动脉二氧化碳分压(PaCO_(2))]、超氧化物歧化酶(SOD)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)以及干预前和干预2、3、4周新生儿行为神经测定量表(NBNA)。结果132例患儿总有效率为86.36%(114例),试验组、对照组治疗总有效率(87.50%比85.53%)差异无统计学意义(P>0.05)。试验组、对照组4项指标恢复时间及住院时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。干预前后,试验组、对照组3项血气指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。干预后2组SOD、NSE均有改善,且试验组改善更明显(P<0.05)。NBNA评分时点比较,差异有统计学意义(F_(时点)=719.128,P<0.01),NBNA评分有随时间变化趋势,但组间无统计学差异(P>0.05)。结论鼠神经生长因子对HIE治疗效果较好,与单唾液酸四己糖神经节苷脂钠相比,更能改善神经因子水平。

超声剪切波弹性成像对新生儿缺氧缺血性脑损伤的诊断价值探讨

目的探讨超声剪切波弹性成像(SWE)对新生儿缺氧缺血性脑损伤(HII)的诊断价值。方法64例新生儿作为研究对象,应用超声SWE技术对其颅脑内感兴趣区(ROI)进行弹性测量,ROI分别为左右侧脑室及基底节区脑实质,弹性成像的剪切波速度转化为杨氏模量表示组织硬度。分析新生儿基本信息;比较正常儿新生儿与HII患儿双侧侧脑室及基底节弹性值;分析新生儿双侧侧脑室及基底节弹性诊断效能。结果64例新生儿中正常新生儿30例,HII患儿34例。HII患儿左右侧侧脑室以及基底节区的均值(mean)、最大值(max)、最小值(min)、标准差(sd)均小于正常新生儿,差有显著统计学意义(P<0.05)。基于弹性均值,右侧侧脑室的曲线下面积(AUC)[95%置信区间(95%CI)]、阈值、敏感度、特异度分别为1.00(1.00,1.00)、5.34 kPa、100.00%、100.00%;左侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.99(0.98,1.00)、5.20 kPa、97.06%、96.67%;基底节的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.92(0.85,0.99)、6.32 kPa、88.24%、86,67%。基于弹性最大值,右侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为1.00(0.99,1.00)、11.37 kPa、97.06%、100.00%;左侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.98(0.95,1.00)、8.98kPa、94.12%、100.00%;基底节的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.69(0.55,0.83)、13.10 kPa、58.82%、96.67%。基于弹性最小值,右侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.91(0.82,0.99)、3.22 kPa、100.00%、76.67%;左侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.73(0.60,0.86)、3.12 kPa、82.35%、66.67%;基底节的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.76(0.63,0.88)、2.32 kPa、79.41%、76.67%。基于弹性标准差,右侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.98(0.96,1.00)、1.62 kPa、91.18%、96.67%;左侧侧脑室的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.97(0.93,1.00)、1.62 kPa、94.12%、93.33%;基底节的AUC(95%CI)、阈值、敏感度、特异度分别为0.70(0.57,0.83)、2.19 kPa、58.82%、86.67%。左右侧侧脑室比基底节区的诊断效能好且与最小值和标准差相比,均值和最大值的诊断效能更高。结论超声SWE测量脑实质弹性能很好地区分HII和正常新生儿,最佳位置为左右侧侧脑室旁脑实质,最佳弹性参数为均值和最大值,值得临床推广。

血清HIF-1α、NSE、GFAP及相关临床特征与新生儿缺氧缺血性脑病发生风险的关系分析

目的探讨血清低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及相关临床特征与新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)发生风险的关系。方法选取2020年1月—2023年1月苏州大学附属儿童医院收治的85例HIE患儿作为HIE组,另选取同期在该院出生的120例健康新生儿作为对照组,分析两组的临床资料并检测新生儿出生后3 d血清HIF-1α、NSE、GFAP水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HIF-1α、NSE、GFAP水平预测新生儿HIE发病的价值;多因素逐步Logistic回归模型分析新生儿HIE发病的影响因素。结果与对照组相比,HIE组宫内窘迫、脐带异常、羊水污染、1 min Apgar评分≤7分的患儿比例较高(P<0.05),并且血清HIF-1α、NSE、GFAP水平较高(P<0.05);两组孕妇年龄、孕妇文化程度、胎龄、新生儿性别、出生体重、产次、剖宫产、胎膜早破比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,HIF-1α、NSE、GFAP及三者联合预测新生儿HIE发病的敏感性分别为82.7%(95%CI:0.795,0.862)、78.7%(95%CI:0.705,0.849)、84.0%(95%CI:0.803,0.891)、85.3%(95%CI:0.788,0.922),特异性分别为85.3%(95%CI:0.816,0.907)、74.7%(95%CI:0.715,0.796)、72.0%(95%CI:0.692,0.771)、90.5%(95%CI:0.825,0.956),AUC分别为0.907(95%CI:0.884,0.930)、0.850(95%CI:0.816,0.884)、0.893(95%CI:0.827,0.959)、0.936(95%CI:0.905,0.967);多因素逐步Logistic回归分析显示,宫内窘迫[O^R=3.592(95%CI:2.017,6.397)]、脐带异常[O^R=4.905(95%CI:2.862,8.406)]、羊水污染[O^R=7.262(95%CI:3.603,14.637)]、1 min Apgar评分≤7分[O^R=3.139(95%CI:1.954,5.043)]、HIF-1α≥0.463 ng/mL[O^R=2.916(95%CI:1.422,5.980)]、NSE≥12.395μg/L[O^R=3.714(95%CI:1.955,7.056)]、GFAP≥3.962 ng/mL[O^R=3.556(95%CI:2.039,6.202)]均是新生儿HIE发病的危险因素(P<0.05)。结论宫内窘迫、脐带异常、羊水污染、出生后1 min Apgar评分低及血清HIF-1α、NSE、GFAP水平高是新生儿HIE发病的危险因素,临床通过检测血清HIF-1α、NSE、GFAP水平可为临床筛查HIE提供帮助,3项指标联合检测可进一步提高诊断价值。

亚低温对新生儿缺氧缺血性脑病患儿血清泛素羧基末端水解酶-L1、低氧诱导因子-1α表达水平及神经发育结局的影响

目的探讨亚低温对新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)患儿血清泛素羧基末端水解酶-L1(ubiquitin carboxy-terminal hydrolase-L1,UCH-L1)、低氧诱导因子-1a(hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α)表达水平及预后的影响。方法选取2015年8月至2022年8月邯郸市妇幼保健院新生儿重症监护病房(neonatal intensive care unit,NICU)收治的110例中重度HIE患儿作为研究对象。根据家属是否同意患儿接受亚低温治疗,将患儿分为亚低温治疗组(n=70)和传统治疗组(n=40);亚低温治疗组患儿除常规治疗外,于出生后0~6 h实施选择性头部亚低温治疗。传统治疗组患儿给予常规治疗;治疗前和治疗后第3天,采用酶联免疫吸附实验双抗夹心法检测UCH-L1、HIF-1α表达水平。随访患儿出生后12~15个月神经发育结局。统计学方法采用独立样本t检验、配对t检验、χ^(2)检验或Fisher确切概率法。结果亚低温治疗组与传统治疗组治疗后血清UCH-L1[(1.9±0.4)与(3.1±0.3)μg/L,t=16.495,P<0.001]、HIF-1α表达水平[(1.40±0.22)与(2.75±0.19)μg/L,t=32.486,P<0.001]比较,亚低温治疗组明显低于传统治疗组;亚低温治疗组患儿治疗后血清UCH-L1表达水平低于治疗前[(1.9±0.4)与(3.3±0.5)μg/L,t'=18.293,P<0.01]。亚低温治疗组和传统治疗组在治疗3 d后,虽然两组血清中HIF-1α表达水平均出现高于治疗前[(1.40±0.22)与(1.23±0.29)μg/L,t'=3.907,P<0.001;(2.75±0.19)与(1.27±0.35)μg/L,t'=23.504,P<0.001],但是,亚低温抑制血清HIF-1α表达水平升高的效果明显优于传统治疗组。随访结果显示,亚低温治疗组患儿神经发育正常的比例高于传统治疗组[68.6%(48/70)与32.5%(13/40),χ^(2)=13.408,P<0.001];亚低温治疗组神经发育迟缓的比例低于传统治疗组[11.4%(8/70)与37.5%(15/40),χ^(2)=10.462,P<0.001]。结论亚低温治疗可以明显降低中重度HIE患儿血清UCHL1表达水平,抑制血清HIF-1a表达水平升高的作用明显优于传统治疗,这可能是低温治疗的神经保护机制之一。

医用控温仪对缺氧缺血性脑病新生儿神经行为和神经损伤指标的影响

目的探讨医用控温仪对缺氧缺血性脑病(HIE)新生儿神经行为和神经损伤标志物的影响。方法选取2019年7月至2021年10月浙江省台州医院收治的74例HIE新生儿作为研究对象,采用随机数字表法分为两组,每组37例。对照组予吸氧、降颅压、镇静及稳定血糖、血压及内环境等常规治疗,试验组在对照组基础上加用医用控温仪。两组均随访至出生后28 d。比较两组意识、反射及肌张力恢复时间,治疗前和出生28 d后的神经行为[采用新生儿神经行为测定量表(NBNA)评估]、发育缺陷程度[采用盖塞尔(Gesell)发育评估表评估]和血清神经损伤指标[神经元烯醇化酶(NSE)和髓鞘碱性蛋白(MBP)]水平,并统计两组1年内神经系统后遗症发生率。结果试验组意识、反射及肌张力恢复时间均短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。出生28 d后,两组NBNA、Gesell评分均高于治疗前,血清NSE、MBP水平均低于治疗前,且试验组NBNA、Gesell评分高于对照组,血清NSE、MBP水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。试验组1年内神经系统后遗症发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论医用控温仪用于HIE新生儿中,不仅可加快意识、反射及肌张力恢复,且可改善神经行为,降低发育缺陷程度,减少神经系统后遗症的发生,与其可降低NSE和MBP水平、促进神经恢复和再生密切相关。

紫檀芪调节LKB1/AMPK信号通路减轻缺氧缺血性脑损伤新生大鼠氧化应激损伤

目的:分析紫檀芪调节肝激酶B1/腺苷酸活化蛋白激酶(LKB1/AMPK)信号通路减轻缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠氧化应激损伤的机制。方法:构建72只HIBD新生大鼠模型,并分为模型组、紫檀芪低剂量组(15 mg/kg)、紫檀芪高剂量组(30 mg/kg)、紫檀芪高剂量+compound C组(紫檀芪30 mg/kg+compound C 20 mg/kg),每组18只,另选取12只新生大鼠为假手术组。采用水迷宫实验评估大鼠学习与记忆能力;红四氮唑(TTC)染色法测定大鼠脑梗死面积;测定大鼠脑含水量;检测大鼠脑组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;蛋白质印迹法测定海马组织LKB1/AMPK信号通路相关蛋白。结果:与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期加长,脑梗死面积、脑含水量、脑组织MDA水平升高,穿越平台次数减少,脑组织上清液SOD、GSH-Px及海马组织p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平降低(P<0.05)。与模型组相比,紫檀芪低剂量组、紫檀芪高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短,脑梗死面积、脑含水量、脑组织MDA水平降低,穿越平台次数增多,脑组织上清液SOD、GSH-Px及海马组织p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平升高(P<0.05),且紫檀芪低、高剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与紫檀芪高剂量组相比,紫檀芪高剂量+compound C组大鼠逃避潜伏期加长,脑含水量、脑组织MDA水平升高,穿越平台次数减少,脑组织上清液SOD、GSH-Px及海马组织p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平降低(P<0.05)。结论:紫檀芪可能通过促进LKB1/AMPK/Nrf2信号通路介导的抗氧化应激,减轻新生大鼠HIBD。

青蒿琥酯通过抑制NLRP3炎性体激活和炎性细胞因子分泌减轻新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的研究青蒿琥酯对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)的保护作用及其作用机制。方法7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组、模型组、5 mg/kg青蒿琥酯组、10 mg/kg青蒿琥酯组、20 mg/kg青蒿琥酯组、6 mg/kg地塞米松组,每组18只。除假手术组外,其余各组建立HIBD模型,假手术组只需分离左颈侧总动脉,不行结扎和氮氧混合气体通气处理。在手术后,各组立刻腹腔注射对应药物,假手术组和模型组大鼠注射等体积的生理盐水,之后每日一次,共给药5次。末次给药1 h后,对各组大鼠进行神经功能缺损评分,大鼠处死后检测脑含水量,观察大鼠海马CA1区脑组织病理学改变,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况,ELISA分别检测各组大鼠脑组织和外周血中白细胞介素1β(IL⁃1β)、IL⁃6、肿瘤坏死因子α(TNF⁃α)的水平,Western blot法检测各组大鼠海马CA1区脑组织含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、含胱天蛋白酶募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase⁃1)蛋白表达。结果与模型组比较,(10、20)mg/kg青蒿琥酯组和地塞米松组大鼠神经功能缺损评分下降,脑组织病理损伤减轻,脑含水量明显减少,海马神经元细胞凋亡数明显减少,脑组织和外周血中IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α水平明显降低,NLRP3、ASC、caspase⁃1水平明显降低。结论青蒿琥酯能够改善HIBD新生大鼠的神经功能、缓解脑部损伤、减轻脑水肿,对HIBD起保护作用,这可能与抑制NLRP3炎性体激活,减少炎性细胞因子的分泌有关。

缺氧缺血性脑病新生儿大脑中动脉血流参数与病情严重程度及预后的相关性分析

目的 应用经颅彩色多普勒超声(TCD)检测缺氧缺血性脑病(HIE)新生儿大脑中动脉(MCA)血流参数变化,分析其与病情严重程度及预后的相关性。方法 选取我院新生儿重症监护病房收治的75例HIE新生儿,根据其病情严重程度分为轻度组38例、中度组24例、重度组13例,另选同期健康新生儿75例为对照组。分别于出生48 h及72 h后行TCD检查,测量并比较各组MCA血流参数[收缩期血流速度峰值(Vs)、舒张末期血流速度(Vd)、平均流速(Vm)、阻力指数(RI)]的差异。对HIE新生儿随访28 d,复查TCD并采用新生儿神经行为测定(NBNA)量表评估其预后,比较预后良好者与预后不良者MCA血流参数的差异。采用Pearson相关分析法分析HIE新生儿MCA血流参数与NBNA评分的相关性。结果 出生48 h后,对照组、轻度组、中度组、重度组Vs、Vd、Vm均依次降低,RI均依次增高,两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。出生72 h后,对照组、中度组、重度组Vs、Vd、Vm均依次降低,RI均依次增高,两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05);轻度组各参数与中、重度组比较差异均有统计学意义(均P<0.05),与对照组比较差异均无统计学意义。75例HIE新生儿中,预后不良者23例,平均NBNA评分为(29.47±2.53)分;预后良好者52例,平均NBNA评分为(37.42±1.15)分,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良者出生48 h、72 h及28 d后Vs、Vd、Vm均低于预后良好者,RI高于预后良好者,差异均有统计学意义(均P<0.001)。相关性分析显示,HIE新生儿出生48 h、72 h及28 d后Vs、Vd、Vm与NBNA评分均呈正相关(均P<0.05),RI与NBNA评分均呈负相关(均P<0.05)。结论 随着病情程度的加重,HIE新生儿MCA血流参数中Vs、Vd、Vm呈降低趋势,RI呈增高趋势;应用TCD监测脑血流动力学参数可较为客观地反映HIE新生儿脑血流灌注变化情况,对其预后预测有一定的指导意义。