不同批次新生牛血清对MDCK细胞培养效果的研究

为筛选适宜MDCK细胞生长的最佳血清,分析6个批次新生牛血清在两种培养方式即贴壁静置培养条件下MDCK细胞的生长状态、平均集落形成率及微载体悬浮培养条件下MDCK细胞的生长状态、生长速率、生长动力学情况。结果表明6组新生牛血清贴壁静置培养的MDCK细胞,平均集落形成率最大的为第Ⅴ组,最小的为第Ⅰ组,由大到小依次为第Ⅴ、Ⅵ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅰ组;微载体悬浮培养条件下的MDCK细胞,最大增殖密度从大到小依次为第Ⅳ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅴ、Ⅱ、Ⅰ组,平均倍增时间由大到小依次为第Ⅵ、Ⅴ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅰ组。因此,通过对不同批次血清贴壁静置培养的MDCK细胞生长状态、平均集落形成率及微载体悬浮培养的MDCK细胞生长状态、生长动力学评价,筛选出适宜细胞生长的新生牛血清批次为第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组,而第Ⅰ组新生牛血清对细胞生长的促进效果不明显,细胞生长状态不佳。

新生牛雄性生殖细胞源类ES的培养及检测

采用贴壁速率差法分离纯化的新生牛雄性生殖干细胞（Male germ stem cell，mGSCs）和支持细胞（Calf sertoli cell，CSCs）；CSCs饲养层细胞一般维持时间不超过8d；新生牛雄性生殖干细胞在CSCs饲养层上1代培养至5～6d可形成类ES细胞集落，采用机械离散集落传代法有利于集落形成或存在，传代培养至少在前2代细胞集落存在；部分典型细胞集落的中心细胞AKP强阳性，周边细胞AKP弱阳性或阴性；免疫组化检测显示，细胞集落SSEA1强阳性、SSEA3弱阳性和Oct-4呈现阳性染色。表明mGSCs具有ES细胞的某些细胞特性。

新生牛雄性生殖干细胞的分离纯化与培养

为建立新生牛雄性生殖干细胞的体外增殖与分化体系,将新生牛睾丸消化成单细胞悬液,分别进行差速贴壁、不连续密度梯度Percoll分选雄性生殖干细胞和支持细胞,对分选生殖干细胞进行体外培养。结果表明,差速贴壁法能有效分选雄性生殖干细胞与支持细胞,2%血清浓度的培养液即可用于雄性生殖干细胞的体外培养,添加100 ng·mL-1的GDNF能显著促进雄性生殖干细胞的增殖,增殖形成的雄性生殖干细胞集落具有一定多能性。

新生牛肝活性肽对小鼠的免疫增强作用

目的观察新生牛肝活性肽对小鼠免疫功能的调节作用。方法采用清洁级ICR小鼠,分别经口给予2.08、4.16和12.48ml/kg3个剂量的新生牛肝活性肽,以生理盐水为对照组,通过淋巴细胞转化试验、小鼠迟发型变态反应试验、血清溶血素测定、抗体生成细胞检测、小鼠碳廓清试验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验及NK细胞活性测定来评价其对小鼠的免疫增强作用。结果3个剂量组均能促进淋巴细胞增殖,中、高剂量组能增强小鼠迟发型变态反应强度和小鼠血清溶血素作用,提高溶血空斑数及NK细胞活性,但对小鼠的碳廓清能力及腹腔巨噬细胞的吞噬能力无明显影响。结论新生牛肝活性肽能增强小鼠的免疫功能。

新生牛生精上皮细胞体外培养的研究

两步酶消化法制备新生牛生精上皮细胞悬液,分离纯化、鉴定精原干细胞和支持细胞,冷冻保存支持细胞。以支持细胞为饲养层探索不同培养条件下精原干细胞的增殖情况,免疫组化鉴定。结果表明:10%DMSO与0.1mol/L的海藻糖组合作为冷冻保护剂,冷冻效果较好;血清浓度为2.5%、支持细胞密度为5×105个/mL时,新生牛精原干细胞较易形成集落;精原干细胞及其集落的AKP染色和C-kit免疫组化均呈阳性。

新生牛肝活性肽的制备及其毒性检测

目的制备新生牛肝活性肽并评价其安全性。方法采用膜法分离制备新生牛肝活性肽。将3批制品于37～40℃,75%相对湿度条件下存放3个月,以多肽含量为指标观察其稳定性,并进行急性毒性试验、小鼠骨髓细胞微核试验、Ames试验、小鼠精子畸形试验和大鼠喂养试验。结果制备的3批新生牛肝活性肽存放3个月后,多肽含量无明显下降,质量稳定。小鼠和大鼠经口灌人大于20.0g/kg体重的新生牛肝活性肽,均无急性毒性。3种致突变试验均未显示出致突变性,大鼠喂养试验各项指标均未见明显毒性。结论新生牛肝活性肽未表现出明显毒性。

应用细胞倍增时间测定新生牛血清的质量

应用细胞倍增时间测定24批新生牛血清的促细胞生长效应,从中优选出5批,在用于杂交瘤细胞的研究工作中均获得满意的结果。其操作方法简便,实验数据准确可靠。为新生牛血清的质量控制打下了基础。

^(60)Coγ射线照射的新生牛血清对培养细胞的影响

为了获得质量合格的牛血清用于大规模细胞培养 ,以 3种不同剂量γ射线照射的新生牛血清加入细胞培养液 ,并用加热灭活的牛血清做对照培养CHO -C2 8细胞 ,观察两种灭活方法对除去牛血清中热原的效果及对细胞贴壁、生长增殖及分泌HBsAg的影响。结果表明 ,γ射线照射可除去牛血清中的热原质 ,在培养前期试验组牛血清对细胞贴壁和细胞生长增殖效果优于对照组。在培养中期 ,当γ射线的照射剂量为 2 0KGy时 ,细胞生长增殖和分泌HBsAg与对照组接近 ,两者无显著性差异 (P >0 .0 5 )。当照射剂量≥ 3 0KGy时 ,可抑制细胞分泌HBsAg ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 )。因而在细胞培养中采用γ射线照射牛血清以除去热原质是可行的 ,但照射剂量应≤ 2 0KGy。

新生牛肝活性肽对小鼠血清中ALT和AST酶活力的影响

目的观察新生牛肝活性肽对四氯化碳引起的小鼠化学性肝损伤的保护作用。方法采用四氯化碳致小鼠化学性肝损伤模型,设新生牛肝活性肽低、中、高剂量组、模型对照组和正常对照组,分别灌胃给药,观察各组小鼠肝损伤情况。结果新生牛肝活性肽高剂量组可有效降低模型小鼠血清中ALT,但AST降低不明显。结论新生牛肝活性肽对化学性肝损伤具有辅助保护作用。

超高效液相色谱-质谱联用技术分析新生牛和胎牛血清组分

目的探讨超高效液相色谱-质谱联用(UPLC/MS)技术对新生牛和胎牛血清组分中活性成分的分析和鉴别。方法采用UPLC/MS技术分析Gibco公司新生牛血清和Hyclone公司胎牛血清组分中的活性成分。结果特征图谱分析新发现:胎牛血清组分种类多于新生牛血清中组分,其质荷比(m/z)分别为498、273和448的物质。结论 UPLC/MS技术可用于胎牛血清及新生牛血清的区分和鉴别,检测出胎牛血清中的几种成分可能是促进细胞发生增殖分化的主要活性物质。

反复冻融新生牛血清对促细胞生长效应的影响

选择促细胞生长性能良好的三批新生牛血清 ,经不同次数冻融后用其配制MEM培养液 ,用于培养SP2 / 0细胞 ,从细胞最大增殖量和倍增时间 2个指标测定促细胞生长效应。结果 ,用经不同次数冻融的新生牛血清配制的MEM培养液 ,对SP2 / 0细胞的最大增殖量和倍增时间影响不大 ;但反复冻融 2 0次以上的新生牛血清配制的培养液使细胞的倍增时间延长。由此可见 ,为了防止细胞倍增时间延长 ,所用新生牛血清的冻融次数应该控制在 2

新生牛血清促牛肾细胞生长试验测定方法的建立

为了建立一种测定新生牛血清促牛肾细胞生长试验的方法,采用测定新生牛血清对原代牛肾细胞培养增殖的克隆率来评价新生牛血清的质量。结果显示,用克隆率大于25%的新生牛血清培养原代牛肾细胞至7～8d时均能形成良好单层,而克隆率小于25%的新生牛血清培养原代牛肾细胞时形成良好单层的时间将延长。由此可得出:对原代牛肾细胞培养增殖的克隆率大于25%的新生牛血清符合口服轮状病毒活疫苗生产的需要,依此结果可进行新生牛血清的筛选。

细胞生长促进试验筛选新生牛血清

目的建立适合人二倍体细胞培养血清的筛选方法。方法通过测定细胞倍增时间和进行细胞生长促进试验对15批次的新生牛血清作了筛选,并将筛选出的11批次血清用于大规模细胞培养,观察细胞的生长维持情况。结果发现细胞倍增时间与相对生长率无明显相关性(P>0.05)。在大规模细胞培养中,相对生长率97%以上的血清更适合二倍体细胞生长。结论细胞生长促进试验比细胞倍增时间测定更能客观地反映血清促人二倍体细胞的生长能力。细胞生长促进试验可能是较佳的。

新生牛血清促细胞生长活性检测方法的建立与应用

牛血清是医药生物技术产品中重要的原辅材料之一,做好牛血清的质量控制是提高生物制品质量的重要环节。本研究通过应用PK15、BHK21和ST三种兽用生物制品研制中常用的细胞作为载体,选用国内同等价位5个不同厂家生产的新生牛血清作为比较对象,采用细胞倍增时间测定法、细胞克隆形成率测定法、细胞三次连续传代培养法、MTT比色法和微量终点稀释法五种血清质量鉴定的方法进行比较,检测新生牛血清的促细胞生长活性,最终确定了MTT比色法作为便捷高效快速筛选新生牛血清的检测方法。

新生牛牙龈来源细胞的成骨特性

目的 在不同培养条件下 ,观察新生牛牙龈组织中是否含有具成骨细胞表型特征的细胞。方法 采用体外组织块法培养新生牛牙龈组织来源的细胞 ,根据加矿化液与否分为两组 ,并用免疫细胞 (组织 )化学及体外矿化实验观察其生物学特性。结果 牙龈结缔组织来源细胞在条件培养基中体外培养 14天后 ,骨桥蛋白、骨涎蛋白、骨粘结素及骨钙素等与矿化相关的非胶原蛋白表达阳性 ;碱性磷酸酶表达亦呈阳性 ;而且有散在矿化小结节形成。结论 新生牛牙龈结缔组织中的一些细胞在一定培养环境中可沿成骨细胞方向分化 。

新生牛促肝细胞生长因子的药效试验

目的：对新生牛促肝细胞生长因子（ Ｈ Ｇ Ｆ）的主要药效学进行研究。方法：采用存活率测定、 Ｓ Ｇ Ｐ Ｔ 活性测定、组织病理学观察、体内外３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入实验。结果： Ｈ Ｇ Ｆ 能够降低急性肝损伤小鼠的存活率及 Ｓ Ｇ Ｐ水平，能够促进损伤肝组织结构复原及肝细胞再生。结论：实验证明 Ｈ Ｇ Ｆ 具有十分理想的临床应用价值。

^(60)Coγ射线辐照对新生牛血清总蛋白含量、噬菌体及促Vero细胞生长的试验研究

试验将已知大肠杆菌噬菌体为阳性的同批新生牛血清,分别用剂量为4、8、12、18、24、28,32、40、44、48kGy的60Coγ射线辐照,检测其中的大肠杆菌噬菌体、总蛋白含量及对促Vero细胞生长效应的影响,以观察辐射对新生牛血清的影响.结果表明,当剂量大于等于8kGy时,噬菌体结果均为阴性;当辐射剂量为8、12、24、28、32、40、44、48kGy时,血清总蛋白含量无明显差异(P>0.05);当辐照剂量大于等于16kGy时Vero细胞最大增殖浓度随辐照剂量的增大而降低;倍增时间在8kGy、16kGy、24kGy时没有显著变化 从32kGy开始倍增时间增加 提示用60Coγ射线辐照可使阳性大肠杆菌噬菌体的牛血清转阴,在小于16kGy时对促细胞生长试验无影响;在大于24kGy时对细胞的分裂增殖有影响。

新生牛肝中的低分子量抑瘤物对白血病干细胞影响的初步研究

新生牛肝中的低分子量抑瘤物对白血病干细胞影响的初步研究王福生，吴祖泽（北京军事医学科学院放射医学研究所１００８５０）近来，我们报道了新生牛肝中存在着一类天然低分子量的肿瘤抑制物（ＢＬＳ），后者对体外培养的白血病细胞（系）及原代白血病祖细胞（Ｌ－ＣＦＵ...

我国新生牛血清的生产现状

文章针对我国新生牛血清的生产现状,从行业规范、原料采集点建设、生产规模、质量管理和存在的问题等进行总结分析.